刘艳丽 张丽娜
山东省寿光市妇幼保健院 262700
摘要：目的：探讨高迁移族率蛋白1（HMGB1）在ⅢB期结肠癌组织中的表达及其在临床诊断治疗中的意义。方法：选取本院86例经手术切除的ⅢB期结肠癌患者的结肠癌组织标本，以及30例癌旁组织、32例正常结肠组织。采用免疫组织化学染色法检测HMGB1，比较HMGB1水平以及分布状况。同时，分析其与CD3+细胞和CD45RO+细胞浸润密度的关系，最后比较结肠癌患者5年的随访资料，统计HMGB1水平和部位与患者术后1年、3年、5年的死亡率的关系。结果：（1）ⅢB期结肠癌组织切片中HMGB1呈强阳性表达，癌旁组织中HMGB1表达较少，正常结肠组织无表达。（2）HMGB1表达越弱，CD3+和CD45RO+细胞浸润密度越偏低，且HMGB1主要在细胞核中表达，少数由核质共同表达。（3）HMGB1表达水平与死亡率相关性不明显；而表达部位与患者死亡率具有显著相关性，核质共表达的患者5年内死亡率（56.0%）显著高于核表达组（21.3%）。结论：HMGB1在ⅢB期结肠癌患者组织中有强烈表达，CD3+和CD45RO+细胞浸润密度越高，患者预后越好，死亡率越低，为ⅢB期结肠癌患者预后的关键。
关键词：高迁移族率蛋白1；ⅢB期结肠癌
1 资料与方法
1.1 一般资料
本文研究对象为86例经外科手术手术切除的ⅢB期结肠癌组织的石蜡包埋标本，均为腺癌，患者于2008年3月~2009年4月内于我院就诊。其中男59例，女27例，年龄在48~76岁之间，60岁以上50例，60岁以下36例，平均年龄64.7±9.5岁；按照病理分级，Ⅰ级14例，Ⅱ级63例，Ⅲ级9例；原发部位为左半边结肠有52例，右半边结肠34例。所有患者均经病理学检查确诊为ⅢB期结肠癌。另选取30例结肠癌旁组织标本和32例正常结肠组织标本作为对照。
1.2 方法
选取本院86例经手术切除的ⅢB期结肠癌患者的结肠癌组织、30例癌旁组织、32例正常结肠组织标本，制成石蜡包埋切片。采用免疫组织化学染色法进行HMGB1的检测（试剂盒购自上海信然生物技术有限公司），比较染色后颜色深浅，分析HMGB1水平以及分布状况。同时，分析HMGB1与CD3+细胞和CD45RO+细胞浸润密度的关系，以考察HMGB1与淋巴转移的相关性。此外，对所有患者进行5年的随访，统计HMGB1水平和部位与患者术后1年、3年、5年的死亡率的关系。
1.3 免疫组织化学法
切取癌组织，福尔马林固定24小时，酒精逐级脱水，石蜡包埋，然后制成组织切片，脱腊至水后，采用3.3% H2O2处理10min，以防止非特异性染色。再以去离子水洗8min*3次，缓冲液浸泡5min，3.3mol/L尿素消化20m in，柠檬酸修复，缓冲液浸泡5min，擦干片子后将其置于湿盒内，血清封闭30min；滴加一抗（3μg /ml），4℃条件下冷藏；第二天，取出片子后，37℃恢复30m in，缓冲液浸泡5min*3，滴加二抗，37℃孵育30m in，缓冲液振洗5m in*3；滴加ABC酶复合物，再次于湿盒孵育30m in，缓冲液振洗5min*3；以二氨基联苯胺显色12~20m in，自来水清洗，再以苏木素淡染，蓝化，酒精逐级脱水，透明，封片。癌旁组织和正常组织检测方法同上。
2 结果
2.1 三种标本HMGB1表达程度通过免疫组织化学染色法比较三组标本的染色程度，可见ⅢB期结肠癌组织切片染色最深，其中HMGB1呈强阳性表达，癌旁组织中HMGB1表达较少，正常结肠组织无表达，因此，HMGB1在ⅢB期结肠癌组织中表达较多，可作为诊断的参考指标之一。
图1 三组标本HMGB1表达程度比较
2.2结肠癌细胞淋巴转移情况由表1可知，HMGB1表达越弱，CD3+和CD45RO+细胞浸润密度越偏低，且HMGB1主要在细胞核中表达，少数由核质共同表达，在细胞核中表达的淋巴细胞浸润密度较高，CD3+细胞在大于16细胞 /400 倍视野占比83.6%，CD45RO+细胞在大于24细胞/ 400 倍视野中占比86.9%。总之，淋巴细胞浸润密度与HMGB1表达水平和分布状况有显著相关性，P<0.01，可见HMGB1表达水平和分布状况于淋巴转移有一定联系。
2.3 HMGB1在淋巴细胞中的浸润密度与患者死亡率的相关性分析 统计5年内患者死亡率，可见HMGB1表达水平越高，死亡率越偏低，但差异不明显；而表达部位与患者死亡率具有显著相关性，核质共表达的患者5年内死亡率（56.0%）显著高于核表达组（21.3%），P<0.01。
3 讨论
ⅢB期结肠癌即癌症中晚期，此时已有癌细胞转移，局部淋巴转移较为常见，也导致了结肠癌ⅢB期难以治愈。HMGB1与肿瘤的发生、生长、浸润、转移密切相关，该蛋白参与相关癌基因的转录，分泌到细胞外参与肿瘤细胞浸润性生长，，是目前唯一已知的与肿瘤有关的HMB家族成员。本文拟研究HMGB1在ⅢB期结肠癌组织中的表达水平和部位，及其与患者死亡率的关系，以期为结肠癌治疗和预后提供借鉴。
本文研究结果显示，ⅢB期结肠癌组织切片染色最深，其中HMGB1呈强阳性表达，癌旁组织中HMGB1表达较少，而正常结肠组织无表达，因此可推断因此，HMGB1在ⅢB期结肠癌组织中表达较多，可作为诊断的参考指标之一。表2可看出，HMGB1表达越弱，CD3+和CD45RO+细胞浸润密度越偏低，且HMGB1主要在细胞核中表达，少数由核质共同表达，在细胞核中表达的淋巴细胞浸润密度较高。由于CD3+和CD45RO+细胞为主要淋巴细胞，此现象可看出HMGB1表达与结肠癌细胞淋巴转移过程有密切联系。死亡率统计显示，HMGB1表达水平越高，死亡率越偏低，但差异不明显；而表达部位与患者死亡率具有显著相关性，核质共表达的患者5年内死亡率（56.0%）显著高于核表达组（21.3%），P<0.01。因此，上述证据共同说明。
参考文献：
[1]郑舒.RARα在结肠癌组织中的表达及其临床意义[D].山东大学，2012.
[2]王丹.癌胚基因Cripto-1（CR-1）在原发结肠癌组织中的表达及其临床意义[J].中国保健营养，2012，22（9）：3060.
论文作者:刘艳丽,张丽娜
论文发表刊物:《健康世界》2015年6期供稿
论文发表时间:2015/10/29
标签：组织论文; 死亡率论文; 结肠癌论文; 患者论文; 结肠论文; 细胞论文; 密度论文; 《健康世界》2015年6期供稿论文;