1．唐山市工人医院集团第八医院 药剂科 河北唐山 063000
摘要：目的：建立多波长HPLC同时测定黄连上清片中三种成分含量的方法。方法：采用Eclipse XDB-C18色谱柱（5 μm，150 mm×4.6 mm），以A（0.1%磷酸水溶液（0.1%三乙胺））-B（甲醇）为流动相进行梯度洗脱；检测波长分别为238 nm、230 nm、278 nm。结果：栀子苷、盐酸小檗碱、黄芩苷质量浓度分别在各自浓度与峰面积线性关系良好；结论：该方法准确可靠，可用于该制剂的质量控制。
关键词：多波长HPLC；栀子苷；盐酸小檗碱；黄芩苷；含量测定
材料与方法
1 仪器与试药
1.1 仪器 Agilent 1200系列高效液相色谱仪；真空抽滤泵（大连依利特公司）；涡旋混合器（XW-80A上海医科大学仪器厂）；Sartorius CP225D电子天平（德国Sartorius公司）；数控系列超声处理器FS-150N（上海生析超声仪器有限公司）。
1.2试药 栀子苷对照品（97.5%，批号：110749-201316）；盐酸小檗碱对照品（98.1%，批号：110713-200208）；黄芩苷对照品（批号：110715-200514），来源都是中国食品药品检定研究院；色谱纯甲醇（天津市协和昊鹏色谱科技有限公司）；磷酸（分析纯）；三乙胺（分析纯）
2 色谱条件
2.1色谱柱 Eclipse XDB-C18（5 μm，150 mm×4.6 mm）；流动相为A（0.1%磷酸水溶液（0.1%三乙胺））-B（甲醇）；梯度洗脱（0 ～ 6 min，70% A；6 ～ 15 min，70% A ～60% A；15 ～ 25 min，60% A；25 ～ 30 min，60% A ～70% A）；流动相体积流量1.0 mL/min，柱温30 ℃，进样量5 μL；检测波长为230 nm（小檗碱）、238 nm（栀子苷）、278 nm（黄芩苷）。
2.2溶液的制备
2.2.1对照品混合溶液的制备 分别称取栀子苷、盐酸小檗碱、黄芩苷适量于50 mL容量瓶中，加甲醇溶解，定容至刻度，制成对照品贮备液。再分别精密量取上述贮备液各2 mL置于同一10 mL量瓶中，加甲醇定容至刻度，制成质量浓度为31.24 μg/mL的栀子苷、20.00 μg/mL的小檗碱、50.00 μg/mL的黄芩苷对照品混合溶液。色谱图见图1。
2.2.2供试品溶液的制备 取本品细粉，约0.3 g，精密称定后置于50 mL容量瓶中，加甲醇溶解，超声处理（80 W，20 kHz）30 min，每10 min停1 min，放置室温，加甲醇至刻度，摇匀，用0.45 μm微孔滤膜过滤，取续滤液即得样品溶液。色谱图见图2。
2.3方法学考察
2.3.1线性关系考察 分别精密吸取各对照品储备液0.125 mL、0.5 mL、1 mL、4 mL、8 mL，分别置于10mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，配制成7个浓度的对照品溶液。分别精密吸取5 μL注入液相色谱仪，记录色谱。将峰面积（Y）对标准品浓度（X）进行线性回归，得栀子苷回归方程为Y=7.667 3X+1.857 6（r =0.999 9，n=5），在1.95～124.96 μg/mL范围内呈良好的线性关系；盐酸小檗碱回归方程为Y=12.078X+0.292 6（r =0.999 9，n=5），在1.25～80.00 μg/mL范围内呈良好的线性关系；黄芩苷回归方程为Y=15.121X+1.259 1（r=0.999 9，n=5），在3.125～200.00 μg/mL范围内呈良好的线性关系。
2.3.2 精密度试验 精密吸取同一对照品溶液5 μL，重复进样5次，栀子苷、盐酸小檗碱、黄芩苷峰面积的RSD分别为0.74%、0.80%、0.73%。表明仪器精密度良好。
2.3.3 稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液（河南百年康鑫药业有限公司，批号20131202）5 μL，分别于第0 h、2h、4 h、8 h、12 h、24 h进样，测定峰面积。栀子苷、盐酸小檗碱、黄芩苷峰面积的RSD分别为0.76%、0.43%、0.30%。表明供试品溶液室温放置24h内稳定。
2.3.4重复性试验 取同一批样品（河南百年康鑫药业有限公司，批号20131202）6份，按2.2.2项下方法处理，依法测定峰面积，每份测定3次，外标法计算含量栀子苷、盐酸小檗碱、黄芩苷平均含量分别为每克含3.666 mg（RSD=0.22%）、2.704 mg（RSD=0.24%）、4.7885 mg（RSD= 0.40%）表明本方法重现性良好。
2.3.5加样回收率试验 精密称取已知含量的同一批（河南百年康鑫药业有限公司，批号20131202）供试品共9份，分成3组，分别精密加入栀子苷对照品储备液6 mL、8 mL、10 mL，盐酸小檗碱对照品储备液溶液6 mL、8 mL、10 mL，黄芩苷对照品储备液溶液5 mL、6 mL、7mL。按2.2.2 项下方法制备供试品溶液，测定，计算回收率，结果在98.3%和101.5%之间。
2.3.6 检测限 以色谱峰峰高为基线嗓音3倍计算，栀子苷、盐酸小檗碱、黄芩苷的最低检测限分别为0.305 ng、0.097 8 ng、0.976 3 ng，满足分析方法的要求。
2.3.8样品含量测定 取黄连上清片样品，按2.2.2 项下方法制备供试品溶液，精密吸取供试品溶液5 μL，注入色谱仪，记录色谱峰面积，按外标法计算含量，栀子苷、盐酸小檗碱、黄芩苷含量分别为3.666mg/g，2.704mg/g，4.7885mg/g。
结 果
根据油水分配系数的不同，水溶性大的栀子苷先被洗脱，其次是盐酸小檗碱，最后是脂溶性大的黄芩苷。三个色谱峰分离度好，而且样品图中不受其他峰干扰。
参考文献：
[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[M].北京：中国医药科技出版社，2010：1067-1068.
[2]张淑芬.RP-HPLC法测定黄连上清片中黄芩苷和盐酸小檗碱的含量[J].中国民族民间医药，2010，18：36-37.
[3]师永清，师永花.双波长RP-HPLC同时测定黄连上清片中栀子苷和黄芩苷的含量[J].中国现代应用药学，2011，28（11）：1041-1044.
[4]刘永路，容淑盈.高效液相色谱法测定黄连上清片中黄芩苷含量[J].中国药业，2007，16（12）：43-44.
论文作者:郗洋1,张熙洁2
论文发表刊物:《健康世界》2015年11期供稿
论文发表时间:2016/2/2
标签：黄芩论文; 栀子论文; 溶液论文; 盐酸论文; 色谱论文; 小檗论文; 精密论文; 《健康世界》2015年11期供稿论文;