高长越[1]2002年在《脑缺血再灌注早期氧化应激与神经元DNA损伤的变化》文中指出背景与目的： 脑缺血再灌注后由于氧供的增加，损伤区会迅速产生大量的氧自由基及其毒性产物，通过直接或间接的机制引起神经元DNA损伤。氧化应激引起的DNA损伤主要为碱基损伤以及单、双链的断裂。其中核酸分子的断链可使核酸分子的完整性和构型受到破坏，最终导致神经元死亡。脑缺血再灌注后产生的羟自由基／超氧阴离子，可直接攻击DNA脱氧鸟嘌呤，产生8-羟基氧化鸟嘌呤(8-ohdg)；8-ohdg是DNA氧化损伤的最好标志，其含量的变化可反映脑缺血再灌注后氧自由基作用的强弱。虽然对于氧化DNA损伤是脑缺血再灌注损伤的重要作用机制已取得共识，但还有许多问题有待明确。脑缺血再灌注损伤是一个复杂的动态演进的病理过程，其中氧化应激引起神经元DNA单双链损伤的变化如何?DNA受到损伤后的神经元转归及其作用机制如何?DNA依赖蛋白激酶(DNA-PK)在DNA双链损伤修复中起重要作用。脑缺血再灌注后，作为DNA-PK的调节亚单位Ku蛋白的表达变化以及它与神经元DNA双链断裂的关系怎样?这些问题尚有待进一步探讨。 本实验采用大脑中动脉线栓法建立大鼠脑缺血再灌注模型，利用单细胞凝胶电泳(彗星实验)和原位末端标记法(TUNEL法)观察脑缺血再灌注后不同时相点缺血区神经元DNA单双链损伤损伤的变化特点，用免疫组化法测定缺血区8-ohdg的变化来观察DNA氧化损伤的强弱，免疫组化法对Ku异二聚体的成分之一的Ku70的变化进行了检测，用DNA琼脂糖凝胶电泳对缺血区细胞凋亡进行了检测。深入探讨了脑缺血再灌注早期氧化应激与神经元DNA单双链损伤的变化规律，并对DNA单双链损伤后神经元的转归以及Ku蛋白的表达变化与DNA双链损伤的关系进行了初步探讨，以期为急性缺血性脑卒中的临床治疗提供实验依据。 方法: 实验动物选用体重240一3309健康雄性wistar大鼠，随机分为二组:(l)缺血再灌注组(IR):大鼠经大脑中动脉闭塞2h后，于1、6、12、24、48、72h再灌注:(2)假手术组(F0)。分别用彗星实验和DNA片段末端标记 (TIJNEL法)观察脑缺血再灌注不同时相缺血区神经元DNA单、双链断裂情况;用免疫组化法分别检测了Ku7o、8一。hdg的变化规律;利用DNA琼脂糖凝胶电泳对缺血区细胞凋亡进行了初步检测。并用直线分析的方法对8一ohdg与神经元DNA单双链损伤、神经元DNA双链断裂和Ku7o表达进行了相关性分析。 结果: 1.再灌注后1小时缺血区即有明显8一ohdg阳性神经元出现，至12小时8一。hdg阳性神经元数目达到最高峰，之后逐渐减少，72小时减少至较低水平。24小时后缺血区周围存有8一ohdg阳性神经元。 2.DNA单链损伤在缺血再灌注后1小时即大量发生:而反映DNA单链损伤程度的慧尾长度(即DNA迁移度)和DNA单链损伤的细胞数目于12小时达到最高峰，至72小时缺血区细胞仍有DNA单链损伤发生。 3，基底节区于缺血再灌注后1小时有散在阳性细胞出现，数目极少，而皮层则无表达;再灌注后6h，缺血区皮质和基底节区TtJNEL细胞数量开始升高，皮层和基底节区于24小时TUNEL阳性细胞数均达到高峰，其后逐渐减少，48h后仍有TUNEL阳性细胞;TUNEL阳性细胞主要分布在基底节区及皮质。 4.假手术组及缺血再灌注对侧神经细胞在各个时相点均有Ku7O免疫反应阳性染色;脑缺血再灌注lh时，缺血侧Ku7O阳性细胞数即开始减少，缺血再灌注24小时降至最低水平，缺血再灌注48小时后Ku7O阳性细胞数无明显进一步降低。 5.脑缺血再灌注后1小时，6小时，12小时细胞DNA琼脂糖凝胶电泳未见凋亡特有的阶梯状(Ladder)条带，24小时后则可见到 Ladder条带 Vl出现。 6.经统计学发现氧化应激与缺血侧脑组织DNA单链损伤显着正相关;缺血侧神经元DNA双链断裂与Ku70表达显着负相关。 结论: 1.脑缺血再灌注氧化应激早期即引起神经元DNA损伤，而DNA单双链损伤是一个动态进行的过程，DNA单链损伤较双链损伤发生的为早，基底节区神经元DNA较皮层更易受到损伤。 2.脑缺血再灌注损伤后，持续过量的DNA损伤超过了其修复的能力以及缺血再灌注损伤破坏了DNA的修复系统，造成了神经元DNA不可逆性损伤，进而引起神经元死亡。 3.脑缺血再灌注早期，神经元Ku蛋白表达下降，可能是导致双链断裂的DNA无法得到修复的机制之一。
万群[2]2004年在《大鼠局灶性脑缺血再灌注早期DNA修复蛋白Ku70的表达及意义》文中研究说明脑缺血再灌注早期，损伤区域会迅速产生大量的氧自由基，通过直接或间接的作用引起神经元DNA氧化损伤，包括DNA碱基损伤、单链断裂和双链断裂。这种氧化性DNA损伤可以通过自身DNA修复系统进行修复，但是，如果DNA损伤持久或严重，超出自身修复能力，则诱导神经元死亡。研究表明脑缺血再灌注早期DNA修复酶的表达减少可能与随后发生的细胞死亡有关。神经细胞的死亡是脑缺血后神经功能受损的基础，对DNA损伤修复的研究有可能深入揭示缺血神经元的死亡机制，为缺血性脑血管病的治疗提供新的策略。缺血预处理和中药丹参对于缺血性脑损伤都有显着的神经保护作用，关于二者的脑保护机制已有多方面的探索，但仍未完全明确，是否可能通过调节内源性DNA修复活性而发挥保护作用还有待进一步研究。 本研究采用大脑中动脉线拴法建立大鼠局灶性脑缺血再灌注模型，利用HE染色方法、免疫组织化学方法和原位末端标记法(TUNEL法)，首先观察大脑中动脉阻塞(MCAO)2h再灌注0.5h、2h、6h、12h、24h、48h后缺血区额顶叶皮质和尾壳核DNA修复蛋白Ku70的表达及神经元凋亡情况，分析二者的变第四军医大学硕士学位论文化在时间上的关系;然后分别观察缺血预处理和中药丹参对脑缺血再灌注后Ku7O表达的影响，初步探讨脑缺血再灌注早期DNA修复酶Ku7O的表达变化规律及其意义，并从DNA损伤修复的角度探讨缺血预处理和中药丹参对抗脑缺血再灌注损伤的分子机制。 实验结果如下: (l)大鼠大脑中动脉阻塞再灌注(MCAO服)后损伤区域主要位于额叶皮质、顶叶皮质和尾壳核。 (2)正常对照组、假手术组及缺血再灌注对侧额顶叶皮质、尾壳核可见Ku70广泛表达，定位于细胞核:MCAOZh、再灌注0.5h，缺血侧尾壳核Ku7O阳性细胞数开始减少(P<0.05)，再灌注Zh，额顶叶皮质Ku70阳性细胞数开始减少(尸<0.05)，于再灌注6h，上述区域Ku70表达水平显着降低(P<0.01)，并持续至再灌注48h;实施缺血预处理或给予腹腔注射丹参后，明显抑制了Ku7O表达水平的降低，各时间点Ku7O阳性细胞数均较相应对照组明显升高(尸<0.01)。 (3)正常对照组、假手术组及缺血再灌注对侧未见TUNEL阳性细胞:‘MCAOZh、再灌注0.sh一2h，缺血区偶见散在的TUNEL阳性细胞:再灌注6h，TUNEL阳性细胞数开始增多(P<0.01)，随着再灌注时间的延长，阳性细胞数不断增高，再灌注24h和48h，TUNEL阳性细胞数达到高峰(尸<0.01):实施缺血预处理或给予丹参腹腔注射，明显抑制了脑缺血再灌注后细胞凋亡的发生，各时间点TUNEL阳性细胞数均较相应对照组显着减少 (P<0 .01)。(4) Ku蛋白在损伤区域内全面减少发生在缺血性神经元凋亡高峰出现之前，二者呈负相关关系。第四军医大学硕士学位论文综上，本研究的初步结论如下: (1)脑缺血再灌注早期，损伤区域Ku蛋白表达下降，可能是导致DNA双链断裂无法得到修复、细胞随之死亡的机制之 (2)缺血预处理可能通过上调DNA修复蛋白Ku的表达或括性而增强DNA修复能力，从而发挥其内源性神经保护作用。 (3)丹参可能通过抑制缺血再灌注后DNA修复蛋白Ku的减少，保护机体自身DNA修复功能免遭破坏而发挥其神经保护作用。
俞英欣[3]2003年在《缺血/再灌注皮质神经元DNA原发损伤与Bax、Noxa蛋白表达的实验研究》文中研究说明脑血管疾病是危害人类健康的叁大疾病之一，其中缺血性脑血管病以其高发病率、高致残率和高死亡率而严重危害着人们的身体健康。脑缺血一旦发生，不仅缺氧和代谢障碍，同时毒性代谢产物蓄积而引起缺血性损伤，甚至细胞死亡。因此，早期再灌注对组织存活十分重要。但再灌注后产生的活性氧等又加重了细胞损伤，即再灌注损伤，促进了细胞的死亡。在缺血或再灌注损伤过程中，均可以引起受损神经元内出现一系列亚细胞和分子水平的病理变化，造成细胞膜、细胞器和DNA损伤，其中DNA损伤可能既是多种致伤因素作用的结果，也是细胞内产生新的变化和损伤的原因，研究表明DNA损伤引起的细胞凋亡在脑缺血再灌注损伤的病理过程中占有十分重要的作用，成为缺血再灌注损伤引起凋亡的主要原因之一，也加重了再灌注引起的损伤。但神经元凋亡是一种可调控的细胞死亡方式，受到一系列蛋白质的调控。因此详细了解缺血再灌注损伤神经元的DNA的损伤情况，凋亡相关蛋白的表达和调控情况，可以为防止神经元凋亡提供有益的思路。目前研究最多的凋亡调控蛋白为Bcl-2家族蛋白，研究发现其促凋亡成员Bax、Noxa与DNA损伤引起的细胞凋亡有密切关系，但在神经元上尚未得到证明。本研究旨在探讨神经元类缺血再灌注损伤早期的DNA损伤形式，探讨参与凋亡的Bcl-2家族的促凋亡成员Bax和Noxa与神经元凋亡的关系，以明确缺血再灌注损伤机制，为缺血再灌注损伤的治疗提供依据。 本次实验采用小鼠大脑皮质神经元类缺血再灌注模型，将培养的皮质神经元分为未经缺血处理的对照组、再灌注0.5h、1h、2h、3h、6h、12h组，采用HE染色方法、DNA聚合酶-ⅠKlenow大片段介导的生物素标记的 第o宫医大学硕士管沾论支一dATP末端标记方法（Klenow法）、脱氧核糖核音酸末端转移酶介导的缺口末端标记法（TUNEL法）、流式细胞仪，免疫电镜等方法，观察各时间点损伤的神经元的形态学变化，检测DNA断裂损伤情况，检测BCI－2家族促凋亡成员Bax、Noxa表达变化情况，并初步观察＼oxa的转位情况。本次实验所得结果如下： （l）HE染色显示：光镜下观察，细胞质呈粉红色，细胞核呈蓝紫色。末经缺血处理组神经元形态正常，胞趴 晰可见，冉灌注Zh损伤区域部分细胞出现形态变化，胞体皱缩或肿胀，随着缺血再灌注时间的延长，神经元胞体变小，胞质浓缩，核染色质；疑集，突起变短，变细，再灌注12h细胞数量明显减少。 （2）Klenow法检测显示：未经缺血处理的对照组神经元经过Kle。ow法染色后，平均灰度检测的结果为 72t4士 1t00，再灌注 Zh达高峰 135．5上1．31，而后又逐渐降低，12h阳性细胞己经明显减少。 （3）TUNEL法检测显示：未经缺血处理的对照组神经元经TUNEL法检测的阳性细胞比率情况为（10．5土 1．29）％，随着再灌注时间的延长，检测的阳性细胞比率明显增加，但在再灌注让 ，Zh和 3h时阳性细胞比率没有显着差别，在再灌注阳性细胞数达到高峰侣6．5士4．7幻％，再灌注12h阳性细胞数减少。 ＊Bax流式细胞仪检测结果显示：未经缺血处理的对照组神经元经流式细胞仪检测的阳性细胞比率情况为（1．6士0．07）％，随着再灌注时间的延长，检测的的阳性细胞比率明显增加，再灌注处理Zh 时阳性细胞数达到高峰门．1士0．20）％，达到未缺血组的6倍，再灌注3、6和12h阳性细胞数减少明显。 （5）Noxa流式细胞仪检测显示：未经缺血处理的对照组神经元经流式细胞仪检测的阳性细胞比率情况为（1．6士0．10）％，随着再灌注时间的延长，检测的的阳性细胞比率明显增加，再灌注lh 阳性细胞率达高峰 门0．6士0．53〕％，而后随着再灌注时间的延长阳性细胞数减少明显。12h与对照己经无显着差别。 ．6－ 第＠宫区夭管硕士管拄论支一 （6）免疫电镜观察 NOX3转位显示：未缺血组和缺血再灌注后 lh，神经元超微结构有明显的变化：对照组，线粒体形状完整，各种细胞器正常，再灌注后lh，一些线粒体可以看到膜增厚，有黑色颗粒样物质位于膜上。 本次实验结论如下： （1）根据 DNA聚合酶 IKlenow大片段的功能和原位杂交的原理，认为本实验中于再灌注Zh达到峰值的Klenow阳性细胞中多数应为DNA单链断裂的细胞。 ①首次在培养的小鼠皮质神经元类缺血再灌注模型上证明 mA单链断裂，且DNA单链断裂可能是队A早期损伤的形式之一，并认为DNA单链断裂可能是由自由基引发的一系列D＼A损伤过程中的一个重要环节。 m根据hx在类缺血再灌注不同时间点的表达情况，推测促凋亡蛋白Bax可能参与DNA损伤引起的神经元凋亡进程。 （4）首次在培养的小鼠皮质神经元缺血再灌注模型上证明促凋亡蛋白Mx。的存在，随着类缺血再灌注时问的不同，Mx。的表达有明显的变化，推测NOXd同样参与DNA损伤引起的神经元凋亡进程。 （5）在类缺血再灌注不同时间，＼oxa分别表达于细胞浆和线粒体外膜，可以认为hx?
王景涛[4]2003年在《GM_1对高血压大鼠脑缺血再灌注后XRCC1及DNA片段化损伤的影响》文中认为缺血性脑血管病(ischemic cerebrovascular diseases，ICVD)因其发病率、死亡率和致残率高而严重危害人类健康。在众多ICVD危险因素中，高血压是最重要和独立的因素。因此采用高血压动物建立的脑缺血再灌注模型能更好的模拟人类ICVD，增强动物实验的临床相关性。 已发现生物体内早期DNA损伤可以通过自身DNA修复系统进行修复，后期的DNA损伤因超出自身修复能力而能够诱导凋亡。有研究表明脑缺血再灌注早期DNA损伤修复蛋白表达的减少可能与随后发生的神经细胞死亡有关。由于神经细胞的死亡是脑缺血再灌注后神经功能损伤的基础，因此对DNA损伤和修复的研究有可能深入揭示ICVD的神经细胞损伤和死亡机制，从而为其治疗提供新策略。单唾液酸神经节苷脂(monosialoganglioside，GM_1)对神经细胞损伤后的修复有明显的促进作用，可以抑制神经元凋亡，但其机制尚不十分清楚。 本实验采用双肾双夹法建立肾性高血压大鼠(renovascular hypertensive rat，RHR)模型，并采用线栓法建立RHR局灶性脑缺血再灌注损伤模型，观察缺血区皮质和海马CA1区DNA损伤修复蛋白—X线修复交叉互补组1(X-ray repair cross complementing group 1，XRCC1的表达、细胞DNA片段化损伤及GM_1对其的影响，从DNA损伤和修复的角度探讨局灶性脑缺血再灌注后神经元凋亡的机制及GM_1对神经元凋亡的作用。 材料与方法 1．健康SD雄性大鼠，体重90-120g，1-2月龄，采用双肾双夹法建立RHR模型。术后2w开始测收缩压，以判断模型是否成功并监测其血压的变化。 郑州大学2003届硕士毕业论文GM:对高血压大鼠脑缺血再灌注后xRccl及。NA片段化损伤的影响 2.取血压稳定升高4个月、收缩压)160nllnHg且无卒中症状的RIJR，采用线栓法建立大脑中动脉闭塞(middle cerebral叭e巧oeelusion，MCAO)模型。假手术组除不用线栓外，余同手术组。术后观察左侧Home;征和右前肢偏瘫征以判断模型是否成功。 3.动物分组:I组(n二24):正常血压假手术组;n组(n二24):高血压假手术组;111组(n=24):高血压MCAo组:IV组(n=24)高血压MCAo+GMI治疗组:于MCAo前12h、smin及术后12h分别腹腔注射GMI(2 Om叭g)。其余叁组均于相同时间、以相同方式和相同剂量给予生理盐水。各组均于缺血lh再灌注3h、6h、12h和24h经心脏灌注取材，每个时间点6只，取脑做石蜡切片。 4.观测指标: (l)缺血再灌注各时间点鼠脑神经细胞XRCCI蛋白的表达:免疫组化染色。 (2)缺血再灌注24h神经细胞的DNA片段化损伤:末端脱氧核普酸转移酶介导的dUTp缺口末端标记(terminal deoxynucleoti即1 transferase一ediated duTPnick end labeling，TtJNEL)检测。 5.统计方法:所有数据均采用(均数士标准差)表示，分别运用重复测量的方差分析、单因素方差分析、t检验和直线相关性分析法进行统计，以Q=0.05作为差别有显着意义的检验标准。结果 1.双肾双夹术后Zw大鼠血压开始升高，并持续到术后16w。说明本实验建立的RHR模型是成功的。 2.nl、IV组大鼠出现左侧Homer征，右侧肢体偏瘫，以前肢为重。I、n组大鼠仅有左侧Homer征。说明MCAO模型是成功的。 3.TtJNEL染色:I、n组大脑皮质和海马CAI区未观察到阳性细胞，川组缺血区皮质和海马CAI区出现较多阳性细胞，IV组两区阳性细胞数明显减少，与m组相比，差异有显着性(均为P<0.05)。说明缺血再灌注24h缺血区皮质和海马CAI区神经细胞发生了明显的DNA片断化损伤，而GM;则减轻了这种损伤。 4.免疫组化染色:I、n组大脑皮质和海马CAI区出现大量的阳性细胞，主要为胞核着色，呈棕黄色;再灌注3h在m组缺血区皮质和海马CAI区观察到阳性细胞数的明显减少和着色强度的降低，且持续到缺血再灌注24h;再灌注3h在 郑州大学2003届硕士毕业论文阳1对高血压大鼠脑缺血再灌注后xRccl及。NA片段化损伤的影响IV组相同区域观察到阳性细胞数的明显增多和着色强度的升高，且持续到再灌注24h。I、n组之间XRCCI灰度值的差异无统计学意义(伶0.05);m组再灌注3h、6h、12h和24h，缺血区皮质和海马CAI区XRCCI灰度值明显升高，与I组和n组相应时间点相比，差异有统计学意义护<0.05);IV组再灌注3h、6h、 12h和24h，海马CAI区与皮质XRCCI灰度值明显降低，与m组、I组和11组相应时间点相比差异有统计学意义(P<0.05)。说明再灌注3h在缺血区皮质和海马CAI区XRCCI表达出现明显减低，且持续到缺血再灌注24h;GM，治疗后XRCCI的表达显着升高，并持续到再灌注24h。 5.m、W组再灌注24h，缺血区皮质TIJNEL阳性细胞数与XRCCI灰度均呈显着性正相关(r分别为0.943和0.986，均为p<0.05)，海马CAI区TIJNEL阳性细胞数与XRCCI灰度也均呈显着性正相关(r分别为0.899和0.943，均为P<O.05)。由于XRCCI的表达强度与其灰度成反比，从而提示脑缺血再灌注后神经细胞XRCCI的表达强度与DNA片断化损伤呈负相关。结论 1.用RHR复制的MCAO模型研究ICVD，具有较强的临床相关性。 2.RHR局灶性脑缺血再灌注后神经细胞XRCCI的表达降低，可能导?
何洪波[5]2003年在《PCNA对大鼠局灶性脑缺血—再灌注后神经元DNA损伤修复影响的实验研究》文中研究表明背景与目的：在局灶性脑缺血－再灌注过程中，神经元DNA损伤－修复机制的失衡可以造成神经元DNA的不可逆损伤，进而导致神经元调亡和死亡，这是急性缺血性脑血管病脑组织损伤的重要过程。脑缺血－再灌注的过程中，氧供及能量代谢受到破坏，会产生氧自由基等毒性物质，对缺血部位神经元造成损伤，进而导致细胞凋亡和坏死。在这些细胞毒性物质中，氧自由基的研究最为充分。氧自由基是局灶性脑缺血－再灌注过程中有氧代谢、花生四烯酸代谢以及脂质过氧化的主要毒性产物，它可以造成DNA碱基损伤, 进而导致DNA单链断裂和双链断裂。在DNA受到损伤的同时，细胞内DNA的修复机制也同时激活并力图修复已经造成的各种DNA损伤以维持细胞基因组的稳定性。如果脑缺血－再灌注造成的DNA损伤不能及时得到修复或者不能完全修复，最后就可能造成整个细胞的不可逆损伤。此外，在脑缺血－再灌注的过程中的重要现象--海马CA1区神经元选择性易损性（Selective vulnerability）和迟发性神经元死亡（Delayed neuronal death，DND）也被证明与DNA损伤及修复有关。越来越多的研究表明，细胞死亡机制中DNA的破坏与修复的失衡是卒中和脑损伤的重要基础。关于DNA修复相关蛋白的表达与脑缺血－再灌注损伤的关系，多数作者主要观察了DNA修复相关蛋白的表达变化与缺血－再灌注后神经细胞凋亡之间存在的时间和空间关系。多数DNA修复相关蛋白在出现明显的细胞凋亡之前，表达明显降低，或其活性降低；采用DNA修复相关蛋白与细胞凋亡标志物进行双标染色（Double-staining），显示DNA修复相关蛋白阳性的细胞，凋亡标志则为阴性，反之，修复蛋白阴性的细胞凋亡标志则为阳性。另一方面，亚致死量的脑缺血或低温脑保护措施则可以诱导DNA修复相关蛋白的表达或增加蛋白活性，或保护蛋白活性不致降低，进而减少神经元的凋亡。这就提示缺血－再灌注损伤在导致DNA损伤的同时，可能还阻碍了DNA修复相关蛋白的转录、表达和蛋白的活性，进而使缺血－再灌注后DNA损伤不能得到有效修复，最后导致细胞凋亡和死亡。增殖细胞核抗原（Proliferating-cell nuclear antigen，PCNA）是一种重要的DNA修复相关蛋白，参与了多种DNA修复过程。Tomasevic等发现，所有脑区的神经元均<WP=9>有PCNA mRNA和蛋白的组织源性表达，常温下脑缺血后CA1区神经元的核PCNA免疫活性在细胞死亡前大大下降，而在低温条件下脑缺血后Western blot显示PCNA蛋白总量没有明显变化。国内徐广润等采用光化学法诱导老龄大鼠局灶性脑缺血，缺血24小时在缺血中心区无PCNA表达，而在神经元受损较轻的缺血周边区则于缺血后4小时即有PCNA表达，24小时时明显增强。这提示在脑缺血－再灌注过程中，PCNA蛋白的变化可以影响ＤＮＡ损伤的修复过程，并可能影响缺血后受损神经元的转归。目前关于局灶性脑缺血－再灌注后DNA损伤及其修复的研究仍存在不少疑问。如上述Tomasevic 和徐广润等的研究仅仅检测了大鼠脑缺血后PCNA mRNA及蛋白表达的动态变化，而未将这一动态变化与DNA损伤的情况以及损伤局灶的病理变化联系起来。因此，我们设想，通过检测大鼠缺血－再灌注后DNA修复相关蛋白PCNA的表达情况和DNA损伤、细胞凋亡的动态变化，就有可能深入了解PCNA在局灶性脑缺血－再灌注过程中对DNA损伤修复机制中的作用，为从DNA损伤修复角度对局灶性脑缺血－再灌注损伤进行干预提供理论依据。实验方法：选择250g-300g健康Wistar大鼠48只，随机分为对照组（CO组）、伪手术组（FO组）和缺血－再灌注组（IR组，大脑中动脉缺血2小时，按照再灌注时间不同分为IR2h、IR4h、IR12h、IR24h、IR48h、IR96h组），共计8组，每组大鼠6只。用刘亢丁等改进Longa的线栓法制作大鼠缺血－再灌注模型。按照不同的再灌注时间处死实验动物，处死前用5分制评分法进行神经功能缺损评分。处死实验动物后立即灌注取脑，常规HE染色观察神经元病理变化。免疫组化法测定8-OH dG和PCNA，TdT介导的dUTP缺口末端标记法（TUNEL法）检测DNA双链损伤。单细胞凝胶电泳检测DNA单链损伤。计量资料进行组间比较采用方差分析（ANOVA），组内比较采用LSD检验（方差齐性）或者Dunnett T3检验（方差不齐性），各手术组与伪手术组（FO）比较采用Dunnett t 检验。对神经功能缺损评分与神经元DNA损伤及PCNA表达的关系进行Logistic回归分析。P＜0.05为有显着统计学意义差异，P＜0.01为有非常显着统计学意义差异。结果：1. 缺血再灌注后24小时至48小时实验动物神经功能缺损最为明显，再灌注96小时后逐渐减轻。<WP=10>2. 再灌注后2h，皮层和海马CA1区DNA碱基损伤开始出现，至12－24小时时达到高峰，此后逐渐下降；至96小时明显下降接近正常水平，与伪手术组(FO)无显着差异。3. DNA单链损伤最早出现在再灌注后2小时，但在随后的再灌注4小时和8小时明显增高，至12小时时达到高峰，此后逐渐下降。4. DNA双链损伤于再灌注后2小时出现，至24－48小时达到高峰，此后逐渐下降，持续至再灌注96小时仍高于FO组；但海马CA1区DNA双链损伤明显加重出现于再灌注12小时，晚于皮层，损伤高峰持续时间也长于皮层（48小时
文婉玲[6]2017年在《腹腔注射地米那嗪对大鼠局灶性脑缺血/再灌注早期损伤的影响及机制》文中研究说明急性缺血性卒中后功能障碍给社会经济造成了严重负担。及时开通闭塞的血管是有效的治疗方法。然而即使经过严格筛选,仅12~34%的患者可但复流脑组织的进行性损伤却是大量患者存在持续的神经功能缺损。随着早期再通治疗的逐步推广,根据疾病发展规律有针对性地寻找减轻再通治疗后脑组织缺血/再灌注损伤的方法是进一步降低缺血性卒中相关残障的重要任务。血管紧张素Ⅱ(AngiotensinⅡ,AngⅡ)普遍存在于机体组织,是介导氧化应激、促进炎症反应的重要物质。AngⅡ高表达小鼠脑缺血/再灌注损伤程度更为严重;阻断血管紧张素1型受体可减轻脑缺血/再灌注损伤。这些证据均表明血管紧张素系统可能在脑梗死病理生理过程中具有重要作用。近年来发现的血管紧张素转化酶2(Angiotensin converting enzyme 2,ACE2)可将AngⅡ转化为在功能上与之拮抗的血管紧张素1-7(Ang(1-7)),被认为对缺血性卒中具有保护作用。地米那嗪(Diminazene aceturate,DIZE)是一种潜在的ACE2激动剂。有研究发现,在内皮素诱导一过性局灶性脑缺血(transient focal ischemia)后对大鼠腹腔注射DIZE可显着缩小脑梗死体积并改善神经功能,但机制不详。由于这种给药途径和给药时间具有极高的临床转化价值,本研究目的在于利用更符合临床大动脉急性闭塞再通的线栓模型验证腹腔注射DIZE对不同类型脑缺血/再灌注早期损伤的保护作用,并初步探索可能的机制,为进一步明确其最佳适应证奠定基础。第一部分大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤模型的建立与评价目的:通过腔内线栓法构建大鼠局灶性缺血/再灌注损伤模型,探索缺血时间与再灌注脑损伤程度及主要方式的关系。方法:1、缺血时间与再灌注脑组织损伤程度的关系将32只实验大鼠随机分为两组,分别建立大脑中动脉一过性闭塞1小时或2小时模型,于再灌注后24小时观察神经功能并取材检测如下指标:(1)建模成功大鼠24小时内死亡率(n=16/组);(2)大鼠神经功能损伤程度评分(NSS)(n=16/组);(3)通过ttc染色评价两组梗死体积的差异(n=10/组);(4)通过he染色及tunnel染色反映脑组织病理特征(n=6/组);2、不同缺血时间下再灌注脑组织mda水平变化趋势将24只实验大鼠随机分为四组,同样建立大脑中动脉短暂闭塞1小时或2小时模型,两组分别于再灌注后6小时或24小时处死并取脑检测缺血区域mda含量;另设立空白组(6只)作为mda基线水平。结果:1、缺血时间与再灌注脑组织损伤程度的关系(1)实际使用大鼠68只(7只造模失败),缺血1小时组24小时内无死亡,缺血2小时组中5只于24小时内死亡,死亡率17.8%;(2)缺血1小时组nss评分显着低于缺血2小时组(4.0[3.5,5.0]v.s.10.5[8.5,11.5],p<0.001);(3)ttc显示缺血1小时及2小时组梗死体积百分比分别为11.0±5.2,13.4±3.8,两组间无统计学意义;(4)缺血2小时组tunel阳性细胞比例高于缺血1小时组;2、不同缺血时间下再灌注脑组织mda水平变化趋势缺血1小时组24小时缺血区域皮层mda水平显着高于6小时;缺血2小时组24小时mda水平较6小时降低。结论:在本研究条件下,一过性缺血1小时/2小时模型中氧化应激损伤发展速度存在显着差异,缺血1小时再灌注后脂质氧化程度高峰出现于再灌注第6小时后。第二部分腹腔注射dize对大鼠脑缺血/再灌注损伤的影响目的:采用不同缺血时间的大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,评价腹腔注射dize对再灌注脑组织损伤的影响。方法:1、腹腔注射dize对缺血1小时再灌注损伤的影响将成年雄性sd大鼠随机分为5组:a、假手术(颈动脉分叉部分离);b、缺血1小时+腹腔注射生理盐水;c、缺血1小时+腹腔注射生理dize1.0mg/kg;d、缺血1小时+腹腔注射生理dize5.0mg/kg;e、缺血1小时+腹腔注射生理dize15.0mg/kg。以术后24小时为研究终点,通过nss评分评估五组神经功能缺损情况;通过ttc染色评价后四组梗死范围(%)(n=10)。进一步以保护效应最显着的最低剂量作为实验剂量,以假手术组及生理盐水为阴性对照及阳性对照;通过tunel染色检测缺血脑组织中不可逆损害细胞比例(n=6/组);通过生化试剂盒检测梗死周围组织丙二醛(mda)浓度反映氧化应激水平(n=6/组);westernblot检测caspase3活化水平(n=6/组)。2、腹腔注射dize对缺血2小时再灌注损伤的影响将成年雄性sd大鼠随机分为3组:a、假手术(颈动脉分叉部分离);b、缺血1小时+腹腔注射生理盐水;c、缺血1小时+腹腔注射生理dize5.0mg/kg。以术后24小时为研究终点,通过nss评分评估叁组神经功能缺损程度;通过ttc染色评价后两组梗死范围(%);通过检测缺血脑组织mda水平反映脂质氧化程度。3、腹腔注射dize对ace2活性、angⅡ及ang(1-7)水平的影响取空白组、缺血1小时再灌注第24小时大鼠血浆及脑组织,通过elisa检测脑组织及血浆ace2活性、angⅡ及ang(1-7)水平(n=6)。结果:1、对于缺血1小时再灌注模型,腹腔注射dize5.0mg/kg组nss评分及梗死范围显着低于生理盐水对照组,剂量与保护效应呈u形趋势;腹腔注射dize5.0mg/kg组mda水平显着低于生理盐水对照组;tunel染色显示腹腔注射dize组阳性细胞比例显着低于生理盐水对照组,且伴随caspase3水平下降;2、对于缺血2小时再灌注模型,腹腔注射dize5.0mg/kg组nss评分、梗死范围及mda水平均未见与生理盐水对照组间存在显着差别;3、从血浆浓度差异来看,dize组血浆ang(1-7)浓度显着高于生理盐水组(1.260±0.449,0.861±0.401ng/ml,p<0.01),其余指标在两组间均无显着差异;而脑组织中dize处理组及生理盐水对照组间叁指标均未见显着差异。结论:1、再灌注时腹腔注射dize5.0mg/kg可减轻大鼠缺血1小时再灌注后氧化应激程度及细胞凋亡;2、腹腔注射dize可显着上调24小时血浆ang(1-7)水平。第叁部分DIZE对神经元糖氧剥夺/再灌注后细胞凋亡的影响目的:建立原代神经元糖氧剥夺/再灌注(OGD/R)诱导细胞凋亡模型,评价DIZE是否具有ACE2非依赖性保护作用。方法:1、获取、分离、培养新生大鼠皮层原代神经元并进行纯化,通过尼氏染色鉴定神经元比例;2、DIZE对原代神经元OGD/R损伤的影响。将神经元分为5组,分别予以:(1)正常培养;(2)OGD/R+正常培养;(3)OGD/R+DIZE 0.1μM;(4)OGD/R+DIZE 1.0μM;(5)OGD/R+DIZE 10.0μM,于24小时后通过AnnexinⅤ-PI双染流式细胞学评估细胞凋亡程度;通过western blot检测各组cl-caspase 3水平;每项指标设置3个平行重复。结果:1、尼氏染色显示神经元比例约为83.9±5.2%;2、与阴性对照组相比,OGD/R处理后细胞凋亡显着,流式细胞学显示DIZE 1.0及10.0μM组凋亡程度显着低于空白对照组。Western blot显示空白处理组cl-caspase 3水平显着高于正常培养组。结论:DIZE可抑制原代神经元糖氧剥夺/再灌注后细胞凋亡。
黄巧[7]2017年在《NADPH和NAD~+联合用药在脑缺血再灌注损伤中发挥更好的神经保护作用》文中进行了进一步梳理目的:研究还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)和氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD~+)联合用药对缺血性脑卒中的保护作用并探讨其发挥保护作用的可能机制。方法:采用体外培养原代皮层神经元缺糖缺氧再复糖复氧(oxygen and glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R)模型和体内小鼠短暂性大脑中动脉阻塞再灌注(transient middle cerebral artery occlusion/reperfusion,tMCAO/R)模型造模。使用NAD~+/NADH试剂盒检测细胞、大脑皮层NAD~+的含量。用荧光显微镜直接观察NAD~+对细胞形态的影响。MTT法、LDH检测指标选择细胞上适宜的NAD~+浓度和作用时间。通过缺血再灌24 h后小鼠脑梗死体积、神经行为学评分、脑水肿含量等指标选择动物模型上合适的NAD~+剂量和作用时间。运用DHE探针标记检测细胞、大脑皮层ROS的变化及rGSH、SOD、MDA、ATP、LD试剂盒检测细胞、大脑皮层氧化还原能力和能量代谢水平的变化。采用MTT法、DHE探针标记及rGSH、MDA、ATP试剂盒检测NADPH和NAD~+联合用药对OGD/R诱导的细胞损伤的影响。通过脑梗死体积指标观察NADPH和NAD~+在不同剂量、不同时间配比时对缺血再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)诱导的脑损伤程度的影响。通过缺血再灌28天后小鼠生存曲线、脑萎缩体积检测及平衡木、转子杆、Y迷宫等行为学测试的一系列指标,观察联合用药对小鼠脑缺血再灌注的长期影响。彗星实验检测细胞DNA损伤情况。Westernblot方法检测缺血复灌后指定时间给予不同药物对大脑皮层中氧化损伤、凋亡相关蛋白表达的影响。结果:NAD~+可以穿过细胞膜进入细胞,对细胞生存和形态没有影响,结果显示NAD~+对OGD/R诱导的细胞损伤的保护作用呈浓度和时间依赖性,据此我们选择在复糖复氧0 h加入15 mM的NAD~+作用于OGD/R模型。NAD~+可以透过血脑屏障进入脑内,结果显示NAD~+对I/R诱导的细胞损伤的保护作用有剂量和时间依赖性,50mg/kg的NAD~+仅在再灌2 h内能显着减少tMCAO/R模型小鼠脑梗死体积,降低脑含水量,改善行为学症状。在小鼠脑缺血再灌注的体内外模型中,给予NAD~+可显着抑制OGD/R或I/R诱导的细胞内ROS、MDA、LD水平的上升及rGSH、SOD、ATP水平的下降。在脑缺血再灌注的体外模型中,NADPH和NAD~+联合用药比NADPH或NAD~+单独用药更有效地抑制OGD/R诱导的细胞死亡和细胞内ROS、MDA水平的上升及GSH、ATP水平的下降。在脑缺血再灌注的体内模型中,NADPH(2.5 mg/kg或7.5 mg/kg)和NAD~+(50 mg/kg)联合用药比NADPH或NAD~+单独用药更有效地减少缺血小鼠脑梗死体积,且两者合用让NAD~+在再灌4 h仍可减少缺血小鼠脑梗死体积,但在再灌5 h后无明显作用。在小鼠脑缺血再灌注后进行长期观察,结果显示NADPH(7.5 mg/kg)和NAD~+(50 mg/kg)联合用药比NADPH或NAD~+单独用药更有效地提高缺血小鼠长期生存率、减少脑萎缩体积并促进神经功能恢复。在小鼠脑缺血再灌注的体内模型中,脂质体氧化、DNA损伤、凋亡等相关蛋白的变化在复灌后16 h达到峰值,给予NADPH或NAD~+后可明显抑制它们的改变,且两者联合用药可更显着地抑制大部分蛋白的表达改变情况。结论:外源性NAD~+对小鼠脑缺血再灌注损伤具有保护作用,而NADPH与NAD~+联合用药有增效作用,NADPH可以延长NAD~+的治疗窗,NAD~+可以降低NADPH的使用量,其作用机制可能与改善细胞代谢应激,抑制多条细胞死亡途径有关。以上结果提示NADPH与NAD~+联合用药可能为缺血性脑卒中的临床治疗提供新思路。
曹丽娟[8]2015年在《小鼠脑内TIGAR水平与缺血复灌损伤耐受的相关性研究》文中提出目的:观察TIGAR在小鼠脑各区域的表达差异性、细胞定位以及在发育和成熟不同阶段小鼠脑皮层内表达的变化,比较TIGAR表达量与小鼠对脑缺血损伤耐受性的关系。方法:采用小鼠短暂性大脑中动脉阻塞再灌注(transient middle cerebral artery occlusion/reperfusion,MCAO/R)模型和体外培养原代神经元缺糖缺氧/复糖复氧(oxygen glucose dripivation/reoxygenation,OGD/R)模型。在动物脑组织中,使用免疫荧光法和Western blot检测TIGAR表达含量的差异性。使用免疫电镜检测TIGAR在亚细胞内的定位变化。以脑梗死体积,行为学症状评分和存活率等指标比较TIGAR不同表达量和脑缺血损伤耐受性的关系。在培养原代神经元中,用Western Blot检测不同胎龄神经元在H2O2处理后TIGAR表达的变化;使用CCK-8检测TIGAR不同表达量的神经元对H2O2损伤的耐受性差异。用DHE探针标记检测神经元的ROS变化。运用NADPH/NADP+,GSH/GSSG和LD试剂盒检测脑皮层和神经元内NADPH,GSH和LD表达水平。Western Blot和免疫荧光法检测γ-H2A.X的含量变化,彗星实验进一步比较DNA损伤变化。Western Blot和免疫荧光法检测细胞色素C在不同年龄小鼠和不同胎龄神经元内的逸出变化,从而比较线粒体损伤变化。结果:TIGAR在小鼠各脑区均有表达,并且在嗅球,皮层及海马等脑区表达含量尤为显着。免疫荧光检测发现TIGAR在神经元和胶质细胞均有表达,但在神经元内表达量更高。免疫电镜检测发现,TIGAR在线粒体,内质网,胞浆,细胞核等亚细胞结构均有表达,而缺血复灌3 h后,TIGAR在线粒体以及内质网上的表达水平显着增多。在小鼠的整个发育过程中,TIGAR在胚胎期的表达含量显着高于其它时期,在整个胚胎发育阶段,表达量呈下降趋势,并在出生后下降至最低。在1-7天的新生鼠脑皮层内,TIGAR表达量逐渐回升。但在新生第7天后开始逐渐下降,在之后的发育过程中,TIGAR表达量逐渐下降,并在3 M后,TIGAR维持在较低水平。脑缺血复灌损伤后,TIGAR在发育不同时程动物体内调节具有差异性。1 M小鼠在脑缺血复灌后,TIGAR表达水平下降;2 M和3 M龄小鼠脑缺血复灌后,TIGAR表达上调,但在复灌3 h后,1 M,2 M和3 M小鼠TIGAR表达调节至相似水平,这可能与TIGAR在脑缺血复灌损伤中起到的保护作用机制有关。除此以外,在TTC染色脑缺血复灌后的小鼠脑片中,3 M小鼠比1 M小鼠具有更大的脑梗死面积。脑缺血复灌损伤后,3 M小鼠比1 M和2 M小鼠有更严重的神经行为学损伤和和更高的死亡率。同样地,在胚胎小鼠脑皮层培养的神经元中,TIGAR调节与在体实验结果一致。并且在OGD复灌24 h后,E 12胚胎神经元存活率高于E 16和E 20胚胎神经元。在使用NADPH给予治疗OGD复灌损伤后,E 12,E 16和E 20胚胎神经元的存活率都有所升高。在胚胎神经元中加入H2O2后,E 20胚胎神经元细胞内ROS含量显着高于E 12胚胎神经元。在动物和细胞缺血模型中,TIGAR通过抑制糖酵解,增加磷酸戊糖途径,从而增加细胞内NADPH,GSH水平,降低LD水平。在缺血复灌后,3 M小鼠(E 20胚胎神经元)比1 M小鼠(E 12原代神经元)DNA和线粒体损伤更严重。结论:TIGAR对小鼠脑缺血再灌注损伤具有保护作用,且具有高表达量的青年小鼠和早期胚胎神经元对脑缺血有更强的耐受性,其作用机制可能与产生更多内源性抗氧化剂NADPH,降低神经元细胞内ROS含量,从而抑制神经细胞凋亡有关。外源性给予NADPH对胚胎神经元OGD诱导的损伤具有保护作用。
方传勤[9]2004年在《脑缺血再灌注DNA损伤与XRCC1的修复及褪黑素干预作用》文中指出在脑缺血再灌注过程中,产生氧自由基等毒性产物攻击DNA和DNA损伤修复系统,两者共同参与脑缺血再灌注损伤的病理过程,保护DNA通常可以减轻脑缺血再灌注损伤。脑缺血再灌注可扰乱脑的氧供和能量代谢,并在早期产生多种毒性产物,造成DNA损伤。如DNA碱基氧化和DNA断裂。DNA断裂包括DNA单链断裂和DNA双链断裂,DNA双链断裂是凋亡的特征,DNA单链断裂是可逆的,其转归是决定受损细胞命运的“门槛”。因此研究在脑缺血再灌注情况下的DNA单链损伤的修复机制具有重要的理论和实践意义。脑缺血再灌注后DNA损伤因子同时也是DNA修复蛋白的破坏因子,从而破坏保护DNA的“第二道防线”。如在缺血再灌注早期APE/Ref-1、Ku70、Ku80迅速下降。提高DNA修复相关蛋白的水平可以减轻DNA的损伤。以上研究表明脑缺血再灌注DNA修复相关蛋白的表达下降是DNA损伤无法修复以至细胞死亡的重要机制。DNA蛋白X线修复交叉互补组1(XRCC1)是DNA单链损伤修复重要的蛋白,在脑缺血再灌注中XRCC1与DNA单链损伤的关系未见研究。氧化应激在脑缺血再灌注DNA损伤与修复中发挥重要作用。研究表明抗氧化干预能够减轻脑缺血再灌注损伤的程度。褪黑素(melatonin Mel)主要在松果体内产生,是体内抗氧化能力非常强的物质,为高效的自由基清除剂和间接的抗氧化剂。近来研究发现褪黑素可能还参与DNA损伤修复,褪黑素干预治疗对于脑缺血再灌注XRCC1表达的影响情况尚不清楚,明确这些问题有利于丰富褪黑素对于脑缺血再灌注保护机制的认识,以便为临床应用提供实验依据。方法:选用250-300g健康雄性Wister大鼠,随机分为叁组:(1)假手术组(FO组),5只动物;(2)缺血再灌注组(IR组,大脑中动脉缺血2小时,按再灌注时间不同分为IR10min、1h、4h、12h、24h、48h组),每时相点5只动物;(3)褪黑素干预组(Mel组),每时相点5只动物。采用免疫组化和Western Blot检测XRCC1的蛋白水平;利用单细胞凝胶电泳<WP=9>检测DNA单链断裂;用流式细胞仪检测神经细胞凋亡;透射电子显微镜观察褪黑素干预对脑缺血再灌注后超微结构的影响。计量资料均以均数±标准差表示,组间比较采用方差分析t检验,采用SPSS10.0软件进行统计分析。结果:(一)脑缺血再灌注DNA单链断裂与XRCC1的修复作用1.脑缺血再灌注10min 后,皮质和基底节区DNA单链断裂细胞轻度增加,12h 达到高峰,一直到48h 仍维持在较高的水平;基底节区DNA单链断裂多于皮质区。2.脑缺血再灌注10min 后,即出现凋亡细胞增多,之后持续增加,24h 达到高峰,48h 仍较多;皮质区凋亡细胞少于基底节区。3.脑缺血再灌注10min 基底节区XRCC1轻微下降,1h 后在皮质和基底节区XRCC1明显下降,一直到48h 仍维持在低水平。脑缺血再灌注各时相点皮质区XRCC1多于基底节区。假手术组在皮质、基底节、海马均有明显表达。(二)褪黑素对脑缺血再灌注DNA单链断裂和XRCC1的影响1.单细胞凝胶电泳观察:褪黑素干预组在脑缺血再灌注各时相点DNA单链断裂程度轻于脑缺血再灌注组,但是没有改变原变化趋势。2.用流式细胞仪检测细胞凋亡:与脑缺血再灌注组相比,褪黑素干预减轻脑缺血再灌注神经细胞凋亡的程度。3.用免疫组化和West Blot方法结果显示:与脑缺血再灌注组相比,褪黑素干预减少了XRCC蛋白下降的幅度。4.透射电子显微镜观察:脑缺血再灌注组核膜皱缩,线粒体肿胀空泡样变、髓鞘不规则,分层样改变,胶质细胞增生、有神经细胞“被噬”现象。褪黑素干预神经细胞细胞核膜轻度凹陷,整个核染色质疏松,核周基质较疏松,线粒体增生肿胀,病理改变较缺血组减轻。结论:1.脑缺血再灌注可以导致DNA单链断裂,大量DNA单链断裂诱发细胞凋亡。2.脑缺血再灌注后XRCC1蛋白表达降低,使DNA单链断裂修复功能下降。3.褪黑素干预可以减轻脑缺血再灌注DNA单链断裂的程度。4.褪黑素减少了脑缺血再灌注XRCC1蛋白水平的降低,使DNA单链断裂修复能力增强。
高长越, 周华东, 方传勤, 何洪波[10]2009年在《脑缺血/再灌注后神经元Ku蛋白的表达与DNA双链损伤的变化》文中研究说明目的:探讨脑缺血/再灌注后早期神经元Ku蛋白的表达与DNA双链损伤的变化及其与神经元转归的关系。方法:56只大鼠随机分为脑缺血/再灌注组(大脑中动脉线栓法制备缺血/再灌注模型)和假手术组,分别于术后1、6、12、24、48、72h6个时相点取脑组织,免疫组化法测定缺血/再灌注区Ku异二聚体的成分之一Ku70的表达,原位末端标记法(TUNEL法)观察脑缺血/再灌注后不同时相点缺血/再灌注区神经元DNA双链损伤的变化,DNA琼脂糖凝胶电泳检测缺血/再灌注区细胞凋亡。结果:脑缺血/再灌注1h时,缺血侧Ku70阳性细胞数即开始减少,缺血/再灌注24h降至最低水平;缺血/再灌注6h,缺血区TUNEL细胞数量开始升高,于24hTUNEL阳性细胞数均达到高峰,其后逐渐减少;24h后细胞DNA琼脂糖凝胶电泳始见凋亡特有的阶梯状(Ladder)条带。结论:脑缺血/再灌注早期,神经元Ku蛋白表达下降,可能是导致双链断裂的DNA无法得到修复造成神经元DNA不可逆性损伤,进而引起神经元死亡的原因。
参考文献：
[1]. 脑缺血再灌注早期氧化应激与神经元DNA损伤的变化[D]. 高长越. 第叁军医大学. 2002
[2]. 大鼠局灶性脑缺血再灌注早期DNA修复蛋白Ku70的表达及意义[D]. 万群. 第四军医大学. 2004
[3]. 缺血/再灌注皮质神经元DNA原发损伤与Bax、Noxa蛋白表达的实验研究[D]. 俞英欣. 中国人民解放军第四军医大学. 2003
[4]. GM_1对高血压大鼠脑缺血再灌注后XRCC1及DNA片段化损伤的影响[D]. 王景涛. 郑州大学. 2003
[5]. PCNA对大鼠局灶性脑缺血—再灌注后神经元DNA损伤修复影响的实验研究[D]. 何洪波. 第叁军医大学. 2003
[6]. 腹腔注射地米那嗪对大鼠局灶性脑缺血/再灌注早期损伤的影响及机制[D]. 文婉玲. 第二军医大学. 2017
[7]. NADPH和NAD~+联合用药在脑缺血再灌注损伤中发挥更好的神经保护作用[D]. 黄巧. 苏州大学. 2017
[8]. 小鼠脑内TIGAR水平与缺血复灌损伤耐受的相关性研究[D]. 曹丽娟. 苏州大学. 2015
[9]. 脑缺血再灌注DNA损伤与XRCC1的修复及褪黑素干预作用[D]. 方传勤. 第叁军医大学. 2004
[10]. 脑缺血/再灌注后神经元Ku蛋白的表达与DNA双链损伤的变化[J]. 高长越, 周华东, 方传勤, 何洪波. 感染.炎症.修复. 2009
标签：神经病学论文; 缺血再灌注论文; 脑缺血论文; 脑组织论文; dna论文; 神经元细胞论文; 氧化应激论文; 细胞凋亡论文; dna修复论文;