南京军区南京总医院制剂科 210007
摘要：目的：探讨大黄中蒽醌类成分的超声提取工艺研究，以期为大黄资源的开发利用提供一定的参考。方法：采用自建高效液相方法对大黄中五种蒽醌类的含量进行了测定，并采用正交实验法对的蒽醌类成分的超声提取工艺进行优化。超声时间为50min，超声功率为80kw，超声温度为50℃，提取次数为2次，大黄总蒽醌的提取工艺最佳，总量为1.82%。结论：采用正交实验法对大黄中蒽醌类成分的提取工艺进行优化，可以很好的对大黄中蒽醌类成分进行提取，有利于大黄的质量控制和资源的开发利用。
关键词：大黄；蒽醌；提取工艺
大黄药材为蓼科植物掌叶大黄（Rheum palmatum L.）、唐古特大黄（Rheum tanguticum Maxim.ex Balf.）或药用大黄（Rheum officinale Baill.）的干燥根及根茎，具有泻下攻积、泻热通肠、凉血解毒、逐瘀通经等疗效[1]。现代研究也表明，大黄含有蒽醌、鞣质、有机酸、挥发油及多糖等化学成分，具有抗炎、保肝、保护胃黏膜、利尿、改善肾功能、降血压、抗病毒、祛痰和抗肿瘤等功效[2-4]。大黄素和大黄酚作为大黄中蒽醌类成分的代表性成分，中国药典也将大黄素和大黄酚作为大黄质量控制的控制性成分，为更好对大黄的质量控制和资源进行开发利用，自建高效液相方法对大黄中五种蒽醌类的含量进行了测定，并采用正交实验法对的蒽醌类成分的提取工艺进行优化，以期为大黄的开发利用提供一定的参考。
1 材料、试剂与仪器
1.1材料与试剂
大黄购自北京同仁堂药材公司。大黄素对照品（中国食品药品检定研究院，含量：98.7%，批号：110756-201512）；大黄酚对照品（中国食品药品检定研究院，含量：99.5%，批号：110796-201118），大黄酸（成都曼思特生物科技有限公司，含量：98.0%，批号：A0043-201306），芦荟大黄素（中国食品药品检定研究院，含量：97.8%，批号：110795-201308，大黄素甲醚（中国食品药品检定研究院，含量：99.1%，批号：110758-201415），甲醇为色谱纯，购自sigma公司，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。
1.2 仪器
LC-20AT高效液相色谱仪（日本岛津公司），配置四元泵、自动进样器和柱温箱，UV检测器；岛津AUW120D十万分之一电子天平（日本岛津公司）；WH-866型旋涡混匀器（江苏太仓华利达实验室设备公司）；KH-250B型超声仪（昆山禾创超声仪器有限公司）
2 实验方法
2.1 液相条件
色谱柱：Waters symmetry C18（250mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：A相（甲醇）-B相（0.1%高氯酸水溶液）=85：15。检测波长：254nm，流速：0.8 ml/min；柱温：30℃；进样量：20μL。
2.2 线性和范围
分别精密称取大黄素、大黄酚、大黄酸、芦荟大黄素和大黄素甲醚对照品适量，用甲醇溶解并定容至10ml，配制成浓度分别为1.03mg/ml、0.99mg/ml、1.41 mg/ml、1.13 mg/ml和1.24 mg/ml的对照品母液，分别取适量上述对照品溶液各1ml，置10ml量瓶中，用甲醇稀释并定容至刻度，得五种大黄蒽醌类成分对照品混合溶液，并用甲醇稀释成系列对照品溶液。按照“2.1”方法进样对照溶液，记录色谱图及峰面积。以浓度（μg/ml）对峰面积（A）进行线性回归，得到大黄素回归方程为A＝10638.0C+5551.2（r＝0.9995）；大黄素在1.03～103.0μg/mL范围内与峰面积呈良好线性关系；大黄酚回归方程为A＝16880.7C+1805.6（r＝0.9999），大黄酚在0.99～99.0μg/mL范围内与峰面积呈良好线性关系；大黄酸回归方程为A＝11720.7C+2017.6（r＝0.9996），大黄素在1.41～141.0μg/mL范围内与峰面积呈良好线性关系；芦荟大黄素回归方程为A＝23587.7C+3235.2（r＝0.9994），芦荟大黄素在1.13～113.0μg/mL范围内与峰面积呈良好线性关系；大黄素甲醚回归方程为A＝20214.6C+1765.2（r＝0.9996），大黄素甲醚在1.24～124.0μg/mL范围内与峰面积呈良好线性关系。
2.3 样品提取方法
取大黄药材饮片50g，精密称定，置磨口圆底烧瓶中，精密加入乙醇适量，加热回流数小时，放冷，摇匀滤过，精密量取续滤液10ml，其余操作均按照药典方法制备样品。
2.4 正交试验设计
本试验结合预实验结果拟以超声温度、超声功率、超声提取时间和提取次数为考察因素，进行试验正交设计，优化大黄蒽醌类最佳提取工艺，具体参数详见表1。将得到的提取物按照“2.1”方法进样对照溶液，记录色谱图及峰面积，以外标法计算大黄素、大黄酚、大黄酸、芦荟大黄素和大黄素甲醚的含量，并以五种蒽醌类药物的总量作为工艺优化指标。
由表2可知，影响大黄蒽醌类成分提取效果的因素由高到低为A>D>B>C，最佳提取工艺为A3B2C2D3，即超声时间为50min，超声功率为80kw，超声温度为50℃，提取次数为3次，结合实际情况，超声时间为50min，超声功率为80kw，超声温度为50℃，提取次数为2次，作为最佳工艺。
3.2 工艺验证试验
按照确定的工艺条件进行大黄蒽醌类成分的提取，并将得到的提取物按照“2.1”方法进样对照溶液，记录色谱图及峰面积，重复三次。计算大黄素和大黄酚的含量。结果发现，按照最佳工艺大黄蒽醌类成分总量均值为1.82%，RSD值小于2.0%。
4 结论与讨论
大黄中有效成分为大黄总蒽醌，包括大黄酸、大黄素、大黄酚、芦荟大黄素、大黄素甲醚及其苷等[5]。本文采用正交试验结合HPLC方法对大黄中大黄素和大黄酚含量进行测定，结果发现超声时间为50min，超声功率为80kw，超声温度为50℃，提取次数为2次，作为最佳工艺，能达到很好的提取效果。
综上所述，采用超声提取结合正交实验法对大黄中蒽醌类化合物的提取工艺进行优化，可以很好的对大黄蒽醌类化合物进行提取，有利于大黄的质量控制和开发利用。
参考文献：
[1]中国医药科技出版社.中华人民共和国药典一部[S].2010：22.
[2]谭玉柱，童婷婷，谢运飞，等.Plackett-Burman实验设计联用星点设计效应面法优选大黄地上部位蒽醌类成分提取工艺[J].中国药学杂志，2012，47（6）：410-414.
[3]杨骏，郭静.大黄多糖提取工艺的研究上海中医药杂志[J].2012，46（3）：81-84.
[4]崔红花，赵英日，王淑美，等.大黄蒽醌类成分的提取方法筛选及均匀设计优化工艺研究[J].中国药房，2010，20（7）：612-614.
[5]李会丽 杜丽东 史彦斌，等.大黄游离总蒽醌的组合式提取和纯化工艺研究（英文）[J].兰州大学学报（医学版），2014，40（3）：62-70.
论文作者:丁厚伟,于建玉
论文发表刊物:《健康世界》2016年第5期
论文发表时间:2016/6/15
标签：大黄论文; 超声论文; 蒽醌论文; 工艺论文; 成分论文; 黄素论文; 正交论文; 《健康世界》2016年第5期论文;