开放检测系统中检测血清总蛋白的性能验证论文_陈春妍

陈春妍

(广东省惠州市惠东县人民医院检验科 广东 惠州 516300)

【摘要】 目的:建立自配总蛋白试剂测定血清总蛋白含量在开放检测系统中的性能验证和实验方法。方法:参考美国临床和实验室标准化协会系列文件和相关文献[1],结合实际工作,设计实验方案[2]。对在Roche公司的 Modular P的开放检测系统中测定血清总蛋白的精密度、准确度、线性范围、回收试验等进行性能验证[3]。结果:自配总蛋白试剂在检测低、高浓度质控血清的变异系数均符合原配试剂的相关标准;准确度试验结果在允许范围内;线性范围试验中实测值与理论值呈高度相关;回收率在90%~110%范围内。结论:在Roche公司的 Modular P中利用开放检测系统使用自配总蛋白试剂测定血清总蛋白含量达到质量要求的标准,对降低检测成本有重要意义。

【关键词】 自配总蛋白试剂;开放检测系统;性能验证

【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752(2015)20-0367-02

Roche公司的 Modular P生化分析仪操作简便、检测快速、试剂稳定性好、重复性佳,无污染等优点,是实验室重中之重的仪器之一。而Roche公司的 Modular P除了封闭系统必须使用配套的原装试剂以外,其还设置了少量开放系统可以使用其他厂家的试剂。这对与一般实验室来说无疑也是一大优点,因为这就意味着可以降低检测成本。可是其他的试剂能否符合质量的要求还有待实验来验证。

国际标准化组织于2003年颁布的《医学实验室质量和能力的专用要求》作为医学实验室认可的标准,该标准要求申请的实验室应对检测系统的主要分析性能进行验证,证实其能够达到所要求的性能标准。因此我们结合工作的实际,对自配总蛋白试剂测定血清总蛋白含量在Roche公司的 Modular P生化分析仪的开放检测系统中进行精密度、准确度、线性范围、回收试验等性能验证。

1.材料与方法

1.1 材料

1.1.1仪器 Roche公司的 Modular P生化分析仪。

1.1.2检测试剂、校准品及质控品 依照Roche 原装配套试剂的试剂说明书中所含的试剂成份,再按照全国临床检验操作规程(第三版)中双缩脲试剂的配制方法[4],在实验室里自配总蛋白试剂R1和R2。校准品及质控品均为Roche 配套产品。

1.1.3标本来源 符合要求的本院门诊及住院送检标本。

1.2 方法

1.2.1精密度试验 严格按照标准操作规程对Roche公司的 Modular P生化分析仪进行日常维护保养、校准及质量控制,选择低值和高值两个浓度的质控品,按照标本检测程序进行测定。选择低、中、高三水平新鲜、无溶血、无黄疸、无脂浊的血清标本,用原装试剂和自配试剂分别连续重复测定每个水平血清5次,计算每个水平平均值(X)、标准差(s)、变异系数(CV%)。临床可接受水平:CV%≤1/2美国CILA'88允许总误差(Tea)。

1.2.2准确度试验(日常评估) 具有量值溯源的检测系统赋值校准检测系统,选择广东省临检中心、卫生部临检中心或其他厂家提供高、中、低3个水平室内质控品进行检测,每个水平测定5次,计算平均值作为“靶值”,监测、评估准确度。通过与具有量值溯源的检测系统比对新鲜血清,计算相对偏倚(SE%)。临床可接受水平:SE%≤1/4美国CILA'88允许总误差(Tea)。

1.2.3线性范围 选择一个高值的样本,按比例配制成9个系列浓度样本,每个样本重复检测3次,每个系列检测结果如均未超过5%,检测结果可用于线性评价,计算线性方程(P<0.05)。结合分析灵敏度,确认线性范围。

1.2.4回收试验 稀释回收率=(实测值/理论值)×100%。选择高浓度样本3份,用0.9% NaCl分别作系列稀释,线性范围高值/低值越大,系列稀释倍数越大。回收率在90%~110%结果为可接受。结合分析灵敏度、最大稀释度确定临床可报告范围。

2.结果

2.1 精密度试验结果

精密度试验结果显示,原装试剂检测血清总蛋白浓度变异系数在0.18%~0.70%,自配试剂在0.42%~0.73%。两者实测CV均小于10%。在厂家说明书给定的允许范围之内(见表1)。

2.2 准确度试验结果

准确度试验结果显示,用原装试剂检测结果与靶值的偏倚为-0.30%~0.36%,在规定的偏倚±20%之间;同时用自配试剂检测结果表明,偏倚为-1.74%~0.45%(见表2),也在允许范围之内。

2.3线性范围试验结果

以原装试剂测得的血清总蛋白为理论值(x),自配试剂测得的为实测值(Y),将所有结果作X-Y散点图,计算回归方程:Y=a+bx。若相关系数R2≥0.975,b在0.97~1.03范围内,a接近于0。则结果可接受。根据试验结果可得到回归方程Y=0.2476+1.0022x,R2=0.999,P<0.001。实测值与理论值呈良好的线性关系(见图1)。

2.4 回收试验结果

同理以原装试剂测得的血清总蛋白为理论值,自配试剂测得的为实测值,根据公式:回收率=(实测值/理论值)×100%。得到的回收率在97.59%~100.56%之间(见表3),也在允许范围之内。

3.讨论

本实验的结果显示用自配总蛋白试剂在开放检测系统中检测血清总蛋白变异系数(CV)为0.42%~0.73%。小于厂家CV <10%的要求,而且原装试剂与自配试剂检测结果无显著性差异(P>0.05),由此说明自配试剂的重复性良好。按照ISO 15189文件对准确度的评价要求,可以通过参加室间质评活动进行考核。我科用自配试剂参加卫生部临检中心的室间质量评价活动,均取得良好的成绩。在准确度的结果中表明,自配试剂检测结果与靶值的偏倚为-1.74%~0.45%,也在允许范围之内。由此说明自配试剂的准确度符合要求。线性范围试验结果得到回归方程Y=0.2476+1.0022x,R2和b值均在允许的范围之内,实测值与理论值呈高度相关,自配试剂测得的结果在坐标图上呈良好的线性趋势。回收试验结果表明,自配试剂的回收率为在90%~110%的范围内,符合要求。

对自配试剂的各项指标评价表明[5]:自配试剂检测血清总蛋白的重复性,准确度,线性范围和回收率均符合相关的实验要求,说明自配试剂的性能稳定,质量可靠,可以在Roche公司的 Modular P生化分析仪上使用。而且原料的成本远低于厂家配套试剂,因此使用自配试剂可以降低检测成本,提高经济效益。

在工作中我们发现敞开盖子的试剂瓶在仪器上的使用时间不长,根据全国临床检验操作规程(第三版)中双缩脲试剂的配制方法和原厂家说明书中试剂的保存要求:配好的试剂应置与塑料瓶中,密封加塞,放入4~8℃冰箱中保存。开瓶前可保存4~6个月,上机保存为10天。这是因为敞开的试剂瓶会吸收空气中的CO2,以及温度的变化和试剂水分的蒸发都会影响到试剂的稳定性。因此试剂盒还需要使用一种带有色的试剂罩,从而减少试剂对于CO2的吸收。

【参考文献】

[1] 魏昊,丛玉隆.医学实验室质量管理与认可指南.中国计量出版社,2004,59-75.

[2] 毕波,吕元.定量检测方法学性能验证的系统设计.中华检验医学杂志,2007,30:143-145.

[3] 张葵.定量检测系统方法学性能验证实验的基本方法[J].临床检验杂志,2009,27(5):321-323.

[4] 中华人民共和国卫生部医政司编.全国临床检验操作规程(第三版),南京:东南大学出版社,2006,337.

[5] 张丹,王玲,董振南等.Cobas6000 自动生化分析仪临床检验性能评价[J].分析仪器,2009,(1):128-129.

论文作者:陈春妍

论文发表刊物:《医药前沿》2015年第20期供稿

论文发表时间:2015/10/9

标签:;  ;  ;  ;  ;  ;  ;  ;  

开放检测系统中检测血清总蛋白的性能验证论文_陈春妍
下载Doc文档

猜你喜欢