曲庆海 姜水征 催瑛
[摘 要]目的 本研究探讨免疫组化法检测自拟鼻渊汤对鼻腔粘膜组织中Β细胞基因表达的影响。方法 采用免疫组化方法检测40例鼻腔粘膜组织中Β细胞基因衰老死亡的表达,及15例经自拟鼻渊汤外植块培养后的鼻腔粘膜组织中Β细胞衰老死亡基因表达的变化。结果 鼻腔粘膜组织Β细胞基因中Bc-l2表达5%(2/40),Bax表达65%(26/40),Bcl-xL表达40%(16/40),Fas表达90%(36/40)。与鼻腔两侧黏膜相比,Bax和Fas表达差异有显著性(P<0.05)。经自拟鼻渊汤外植块培养后,鼻腔粘膜组织Β细胞基因中Bax表达明显上调(93.3%,14/15),与单纯用RPMI1640培养者比较差异有显著性(P<0.05),但Bcl- xL和Fas表达差异无显著性。结论 免疫组化法可有效检测Bax的表达，检测表明Bax可能是鼻腔粘膜组织Β细胞衰老死亡抑制机制中最有意义的调控基因,自拟鼻渊汤可增强Bax的表达,是促进Β细胞衰老死亡因素之一。
[关键词]免疫组化法 自拟鼻渊汤 鼻腔粘膜 Β细胞
在我院长期治疗鼻息肉等等鼻部肿瘤疫病的过程中，自拟鼻渊汤治疗效果明显，为此我们进行了基础研究，以往的研究表明自拟鼻渊汤在体外能促进鼻腔粘膜组织中Β细胞的衰老死亡[1]。为了进一步探讨上述结果机制中自拟鼻渊汤的衰老死亡诱导作用与衰老死亡基因的关系, 我们采用外植块培养和免疫组化方法, 对鼻腔粘膜组织Β细胞中B细胞淋巴瘤/白血病( B-cell lymphoma/leukemia, Bcl)家族蛋白中B细胞淋巴瘤/白血病-2(B-cell lymphoma/leukemia-2,Bcl-2)、B细胞淋巴瘤/ 白血病-x 基因长片段(B-cell lymphoma/ leukemia-xLong,Bcl- xL)、Bcl-2相关X蛋白( Bcl- 2-associatedXprotein, Bax)和FS7细胞(人二倍体成纤维细胞) 相关的细胞表面抗原( CD95,FS7-associatedcell surface antigen, Fas/ CD95) / Fas配体( Fasligand, FasL)系统等相关衰老死亡蛋白基因的表达,以及自拟鼻渊汤外植块培养后对这些相关衰老死亡蛋白基因表达的影响做了初步研究, 现报告如下。
1 材料和方法
1.1 鼻腔粘膜标本来源及分组
40例鼻腔粘膜标本, 取自我科鼻腔切除患者(男27例, 女13例, 年龄10~63岁) , 为未培养组。10例鼻腔两侧黏膜标本, 取自鼻中隔偏曲矫正术患者, 为对照组。
1.2 结果判定
鼻腔粘膜组织外植块约4mm×4mm, 经过脱水后组织缩小,切片大小约2mm×2mm, 在400倍显微镜下为4~5个视野, 因此作全片观察计数。Β细胞多散布在上皮下层或血管周围, 计算时将目镜中的标示指针放置视野中央, 每次观察计数移动半个视野, 每次只计数指针一侧的嗜酸性粒细胞, 以避免重复计数。
1.3 统计学处理
采用SSPS8.0for Windows统计软件分析,2组间比较采用非参数检验,以P< 0.05为差异有显著性。
2 结果
未培养组鼻腔粘膜组织和对照组鼻腔两侧黏膜Β细胞的衰老死亡基因表达见表1。从表1可见,鼻腔粘膜组织中Β细胞Fas表达最强( 90%) ,其次是Bax( 65%) 和Bcl-xL(40%),Bcl-2表达最少(5%)。上述各衰老死亡基因在鼻腔粘膜组织Β细胞的表达分别见图1~4。鼻腔两侧黏膜中上述各衰老死亡基因表达均明显较弱或无表达( Bcl-2)。2组上述各衰老死亡基因表达差异有显著性(P<0.05)。
表1 衰老死亡基因未培养组鼻腔粘膜组织与鼻腔两侧黏膜中
嗜酸性粒细胞表达的比较(例)
培养液组鼻腔粘膜组织和未培养组鼻腔粘膜组织Β细胞的衰老死亡基因表达见表2。2组的Bcl- xL、Bax和Fas蛋白表达差异无显著性(P>0.05) 。
自拟鼻渊汤组鼻腔粘膜组织Β细胞和培养液组鼻腔粘膜组织Β细胞的衰老死亡基因表达见表3。从表3可见, 加入自拟鼻渊汤共同培养的鼻腔粘膜组织Β细胞中Bax表达明显上调(93.3%) 。经统计学处理表明, 2组Bax蛋白表达差异有显著性( P<0.05) , Fas和Bcl-xL 蛋白表达差异无显著性(P>0.05) 。
3 讨论
已经明了, 细胞衰老死亡是由基因控制的细胞自主的有序性死亡。因此推论, 鼻腔粘膜组织中Β细胞在衰老死亡抑制或诱导的过程中, 相关的衰老死亡调控基因表达可能会发生变化。Β细胞衰老死亡调节基因主要有Bcl家族蛋白和Fas/FasL系统,前者包括Bcl -2、Bcl- xL、Bcl- xs 和Bcl-2同源的拮抗剂/抑制剂(Bcl-2homologous antagonist/killer)、Bax。Bcl-2和Bcl- xL是近年研究较多的抑制Β细胞衰老死亡基因,Bax和Fas/FasL系统则是促Β细胞衰老死亡基因[ 2, 3]。Dibbert 等[4]检测到健康人外周血Β细胞有Bax和Bcl-x表达,但无Bcl-2表达。Druilhe等的研究亦得出相同结果。Fan等的研究发现变应性鼻炎鼻黏膜Β细胞有Bax表达。刘争等的研究表明鼻腔粘膜组织Β细胞无Bcl- 2表达, 但有一定程度的Bcl- xL 表达。我们的研究发现鼻腔粘膜组织Β细胞Bcl- xL和Bax的表达分别达40%和65%, 与鼻腔两侧黏膜相比差异有显著性( P<0.05),但Bcl-2的表达仅5%,与鼻腔两侧黏膜差异虽然有显著性( P>0.05),但可能意义不大。此结果和上述国内外研究的结果相似。提示Bcl- xL和Bax可能参与了鼻腔粘膜组织中Β细胞衰老死亡的调控,而Bcl- 2可能在这一过程中不起重要作用。
参考文献：
[1]唐隽,李源,许庚等.自拟鼻渊汤对人鼻腔粘膜组织中Β细胞衰老死亡的影响[J].中华耳鼻咽喉科杂志,2009,37:127-129.
[2]Dewson G, Walsh GM, Wardlaw AJ. Expression of Bc-l2 and itshomologues in human eosinophils. Modulation by interleukin-5. AmJRespir CellMol Biol, 2009, 20: 720-728.
[3]DruilheA, Wallaert B, Tsicopoulos A, et al. Apoptosis, proliferation,andexpression of Bc-l2, Fas, andFasligand in bronchial biopsies fromasthmatics. AmJRespir CellMolBiol,
[4]Hebestreit H, YousefiS, Balatti I, et al. Expressionandfunction oftheFasreceptor on human blood and tissue eosinophils. Eur J Immunol,2010, 26: 1775-1780.
作者简介：曲庆海（1974—），男，潍坊市益都中心医院主管检验师，研究方向：临床检验（山东省潍坊市，261000）；
姜水征（1974—），女，潍坊市益都中心医院主管护师，研究方向：临床检验（山东省潍坊市，261000）；
催瑛（1965—），女，潍坊市益都中心医院副主任护师，研究方向：临床检验（山东省潍坊市，261000）。
（收稿：2013-12-12 编辑：陈兵）
论文作者:曲庆海, 姜水征, 催瑛
论文发表刊物:《实用医学杂志》2013年12月供稿
论文发表时间:2014-2-26
标签：鼻腔论文; 粘膜论文; 细胞论文; 衰老论文; 基因论文; 组织论文; 潍坊市论文; 《实用医学杂志》2013年12月供稿论文;