吉林省现代中药工程研究中心有限公司 吉林 长春 130000
【摘 要】目的：对伤湿祛痛膏进行质量标准提升研究，以提高产品质量标准，保证产品质量。方法：气相色谱条件：聚乙二醇20000（PEG-20M）毛细管柱（柱长为30m，柱内径为0.25mm，膜厚度为0.25um），柱温130℃，检测器250℃，载气流速4.0，分流比30:1。结果冰片、樟脑、薄荷脑和水杨酸甲酯峰形良好，专属性强；液相色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-水（78:22）为流动相，流速1.0ml/min，检测波长300nm。结果：水杨酸甲酯在0.4548-2.274ug范围内线性良好，平均回收率为103.03%，RSD为1.59%。结论：该方法准确、灵敏、重现性好，专属性强，操作简单，可作为伤湿祛痛膏质量标准提升的依据。
【关键词】伤湿祛痛膏；冰片；樟脑；薄荷脑；水杨酸甲酯
【Abstract】Objective to select shangshiqutong plaster borneol, camphor, menthol and methyl salicylate quality evaluation index, in order to improve the quality standard of shangshiqutong plaster, to ensure the quality of the products. Methods gas chromatography conditions: polyethylene glycol 20000 (PEG-20M) capillary column (column length is 30m, the diameter of the column is 0.25mm, the film thickness is 0.25um), the column temperature is 130 degrees Celsius, the detector 250 degrees C, the carrier gas flow rate 4, the split ratio 30:1. Results borneol, camphor, menthol and methyl salicylate in good shape, strong specificity; liquid chromatographic conditions: with Octadecyl silane bond silica gel as a filler, with methanol water (78:22) as mobile phase, at a flow rate of 1.0ml/min. The detection wavelength of 300 nm. Results the relationship between the 0.4548-2.274ug and the range was good, the average recovery rate was 103.03%, and the RSD was 1.59%. Conclusion the method is accurate, sensitive, reproducible, strong specificity, simple operation, as to enhance shangshiqutong plaster quality standard basis.
【Key Words】Shangshiqutong plaster; Borneol; camphor; menthol; methyl salicylate
【中图分类号】R283【文献标识码】A【文章编号】2096-0867（2016）-2-018-04
伤湿祛痛膏由生川乌、草乌、当归、冰片、水杨酸甲酯等组成，经药材提取、加工后而制成的外用橡胶膏剂，具有祛风湿、止痛的功效，主要用于头痛，风湿痛，神经痛，扭伤及肌肉酸痛等症。原标准收载于《卫生部药品标准中药成方制剂》第十册，标准编号：（WS3-B-1534-93），原质量标准中仅有性状、鉴别和检查项，没有含量测定项，所以产品质量可控性较差，为确保产品质量，本文对其进行了质量标准提升研究。
1仪器与试药
1.1仪器：HH-2数显水浴锅、GC1120气相色谱仪（上海舜宇恒平科学仪器有限公司）、GA-2000A低噪音空气泵；GH-300高纯氢发生器；JQ-1气体净化器；戴安Uitimate 3000型高效液相色谱仪；戴安Uitimate 3000紫外检测器；美国安捷伦1260型液相色谱仪；美国安捷伦1260紫外检测器（DAD）；RIGOL L-3000液相色谱仪，RIGOL L-3500紫外检测器；MS-METTLER TOLEDO（梅特勒仪器有限公司）。
1.2试剂：乙酸乙酯
冰片对照品（批号：111688-200501）、薄荷脑对照品（批号：110728-200506）、樟脑对照品(批号：747-200106)、水杨酸甲酯对照品（批号110707-201413）、水杨酸甲酯对照品（批号110707-201413）购自中国食品药品检定研究院。
1.3试验材料：伤湿止痛膏由修正药业集团提供样品，批号为150401、150402、150403。
2方法与结果
2.1冰片、樟脑、薄荷、水杨酸甲酯气相色谱鉴别[1]
2.1.1色谱条件：聚乙二醇20000（PEG-20M）毛细管柱（柱长为30m，柱内径为0.25mm，膜厚度为0.25um），柱温130℃，检测器250℃，载气流速4.0，分流比30:1。
2.1.2对照品溶液的制备：取冰片对照品、薄荷脑对照片、樟脑对照品及水杨酸甲酯对照片适量，加乙酸乙酯制成每1ml含冰片、薄荷脑各10mg，樟脑6mg，水杨酸甲酯5mg的溶液，作为对照品溶液。
2.1.3供试品溶液的制备：取本品5片，剪成小块，除去盖衬，置圆底烧瓶中，照挥发油测定法（中国药典2010年版一部附录X D）试验，连接挥发油测定器，自测定器上端加蒸馏水400ml使充满刻度部分，并溢流入烧瓶时为止，加乙酸乙酯5ml至测定器中，加热回流2小时，冷却，分取乙酸乙酯层于10ml容量瓶中，加乙酸乙酯定容至刻度，混匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液，作为供试品溶液。分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各2ul，注入气相色谱仪。
2.1.4色谱条件耐用性试验：分别考察色谱条件即检测器温度的变化±5℃、柱温变化±5℃、载气流速变化±0.2，分流比20:1和30:1，试验结果见下表1。
表1 耐用性试验结果
图1樟脑对照品
图4 水杨酸甲酯对照品
图6 阴性样品
2.2水杨酸甲酯含量测定[2-4]
2.2.1色谱条件与系统适用性：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水（78:22）为流动相；检测波长300nm，流速1.0ml/min，理论板数按水杨酸甲酯(C8H8O3)峰计算应不低于8000。
2.2.2对照片溶液的制备：取水杨酸甲酯对照品适量，精密称定，加乙酸乙酯制成每1ml含0.4mg的溶液，即得。
2.2.3供试品溶液的制备：取本品2片，剪成小块，除去衬盖，置圆底烧瓶中，连接挥发油测定器，照挥发油测定法（中国药典2010年版一部附录X D）试验，自测定器上端加蒸馏水200ml使充满刻度部分，并溢流入烧瓶时为止，精密吸取5ml乙酸乙酯至测定器中，加热回流2小时，冷却，分取乙酸乙酯层至100ml容量瓶中，用少量乙酸乙酯洗涤测定器数次，洗液并入容量瓶中，加乙酸乙酯定容至刻度，混匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
2.2.4标准曲线的制备：精密称取水杨酸甲酯对照品适量，加乙酸乙酯制成浓度为0.2274mg/ml的对照品溶液，分别精密吸取上述对照品溶液2、4、6、8、10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。以峰面积为纵坐标(Y)，以水杨酸甲酯进样量为横坐标(X)，绘制标准曲线，得Y=27.39X+0.004，R2=0.9999，试验结果表明:水杨酸甲酯在0.4548～2.274μg范围内呈良好的线性关系。结果见表2，附图7。
图7 水杨酸甲酯标准曲线
2.2.5专属性试验：按处方比例制备缺水杨酸甲酯的阴性样品，照供试品溶液制备方法制备阴性对照溶液，按含量测定项下色谱条件，分别吸取水杨酸甲酯对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液和溶剂各5ul注入液相色谱仪，记录色谱图。结果阴性对照样品的色谱图中，在水杨酸甲酯吸收峰保留时间的相应位置上，无吸收峰出现，表明阴性对照无干扰，此方法专属性强，结果见附图8-11。
图10 伤湿祛痛膏样品-DAD图
图11 阴性-DAD图
2.2.6精密度试验：取供试品溶液，在相同液相条件下，连续进样6次，记录峰面积，以供试品溶液中水杨酸甲酯吸收峰面积的变化，考察仪器精密度，结果表明：该仪器精密度良好。见表3：
表3 精密度试验结果
2.2.8中间精密度试验：取本品（批号：150401），由不同人员、不同时间、使用不同高效液相色谱仪，按含量测定项下方法操作，测定水杨酸甲酯含量。试验结果表明： ＝12.4745 RSD＝2.49%该方法中间精密度良好。见表5。
表5 中间精密度试验结果
2.2.10回收率试验：取已知含量样品（批号：150401批，含水杨酸甲酯13.0788/片）1片，共6份，分别置于圆底烧瓶中，分别精密加入对照品溶液（浓度为13.1892mg/ml）1ml，连接挥发油测定器，照挥发油测定法（中国药典2010年版一部附录X D）试验，自测定器上端加蒸馏水200ml使充满刻度部分，并溢流入烧瓶时为止，精密吸取5ml乙酸乙酯至测定器中，加热回流2小时，冷却，分取乙酸乙酯层至100ml容量瓶中，用少量乙酸乙酯清洗测定器，洗液并入容量瓶中，加乙酸乙酯定容至刻度，混匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。试验结果表明：供试品中水杨酸甲酯的平均回收率为103.03%，RSD＝1.59%，此方法准确可行。见表7。
表7 回收率试验结果
2.2.11耐用性试验
分别考察色谱条件检测波长的变化±2nm、柱温变化±5℃、流动相比例的变化±2，流速变化±0.2，不同色谱柱，每个条件下各测试两次，结论：在上述试验条件变化时，色谱图中水杨酸甲酯与其它杂质峰的分离度均符合规定，RSD%值为2.65%。试验结果表明当色谱条件有小的变动时，对测定结果的影响不大，故本方法有很好的耐用性。见下表8。
3结果与讨论
3.1伤湿祛痛膏由9味中药经提取后和4种化药混合制成，原标准中只有一个中药--当归的薄层鉴别，没有含量测定项。众所周知，挥发性成分是伤湿祛痛膏主要止痛消炎的有效成分，所以选定冰片、樟脑、薄荷脑及水杨酸甲酯作为评价伤湿祛痛膏的质量提升的检测指标。
3.2采用气相色谱法对冰片、樟脑、薄荷脑及水杨酸甲酯进行定性鉴别，与常规的薄层鉴别相比优势明显，该方法操作简单，节约时间，且专属性强；采用高效液相色谱法对水杨酸甲酯进行含量测定，与常规气相色谱法测定相比，无需校正因子，操作简单、成本低、时间短，专属性强，准确度高。
3.3在供试品的制备过程中，刘翔[5]等采用无水硫酸钠的漏斗滤过，以得到无水的乙酸乙酯层提取液。本文将两种方法进行对比后，发现用无水硫酸钠过滤得到的样品含量较本法低约30%，原因与成分的易挥发性以及不可避免的过滤损失有关。而本文采用长吸管从上自下吸取乙酸乙酯层，操作简便、快速、含量高，重现性好。
3.4本文对伤湿祛痛膏进行质量标准提升，建立用气相色谱法进行定性鉴别，用高效液相色谱法进行水杨酸甲酯含量测定，方法灵敏、准确、重现性好。可作为伤湿祛痛膏的质量标准提升的参考依据，以提高产品质量水平。
参考文献
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[4]游佳清,余新启. 麝香壮骨膏中樟脑和水杨酸甲酯含量的测定[J].黄石理工学院学报，2006，22（1）：12-144.
[5]刘翔，孙飞.气相法测定麝香壮骨膏中樟脑、薄荷脑、冰片、水杨酸甲酯含量[J].中成药，2009，31(2):231-234.
作者简介：
王孝方，女，1986年生，本科毕业于吉林农业大学中药学专业，硕士毕业于长春中医药大学中药制剂方向。现工作于吉林修正药业子公司-吉林省现代中药工程研究中心有限公司，就职研发员，从事中药及保健品研发方向。
论文作者:王孝方,姜文月,侯,宝,曲佳乐
论文发表刊物:《系统医学》2016年第2期
论文发表时间:2016/4/12
标签：水杨酸论文; 乙酸乙酯论文; 甲酯论文; 溶液论文; 色谱论文; 樟脑论文; 冰片论文; 《系统医学》2016年第2期论文;