陆春光
（黑龙江省中医药科学院 黑龙江哈尔滨市 150036）
【摘要】目的：探讨大肠埃希菌的微生物检验。方法：对大肠埃希菌采集培养及操作步骤进行分析。结果：大肠杆菌常引起各种肠内外感染，是腹泻和泌尿道感染的主要病原菌。结论：革兰阴性杆菌很多是条件致病菌，且有许多细菌对很多抗生素天然耐药。有些细菌是医院感染的常见细菌。
【关键词】大肠埃希菌；细菌检验；操作方法
【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】1007-8231（2015）16-0235-02
大肠埃希菌俗称大肠杆菌，属肠杆菌科埃希菌属的一个种。本菌是人类和动物肠道正常菌群的主要成员。每克粪便中约含109个大肠杆菌。因其广泛分布于自然界(水、土壤、食品、牛乳等)，故卫生学上将其作为卫生监督的指示菌。从对肠道的作用来看，可将其分为致病性与非致病性两大类[1]。其血清分群用O：K：H表示。O抗原(菌体抗原)迄今已有171种，是血清分型群的基础；K抗原(荚膜抗原)，有99种；H抗原(鞭毛抗原)有60种。一些血清型对肠道生理起着重要作用，另一些血清型能引起不同特征性腹泻和肠道外感染。主要致病的有肠致病性大肠杆菌、肠道聚集一粘附性大肠杆菌、产肠毒素性大肠杆菌、肠侵袭性大肠杆菌、肠出血性大肠杆菌，兼性厌氧。现对大肠埃希菌操作分析如下。
1.大肠埃希菌主要特征
1.1 形态特征
大肠埃希菌大小为1.1～1.4μm×2.0～6.0μm(活菌)或0.4～0.7μm×1.0～3.0μm(干菌和染色菌)，多数有周身鞭毛，能运动，周身还有菌毛，无芽孢，某些菌株有包膜，单个存在，少数成对。
1.2 培养特征
最适生长温度为37℃，pH为7.4～7.6，普通培养液上生长良好，形成直径2～3mm、圆形、凸起、湿润、光滑、灰白色、半透明、边缘整齐的菌落。在血琼脂平板上，某些菌株可产生β-溶血环。在伊红-亚甲蓝琼脂平板上，菌落呈蓝紫色，在中国蓝琼脂平板上为蓝色。在SS琼脂平板上多数被抑制，生长菌落为红色，在营养肉汤内均匀浑浊生长。
2.检查方法
2.1 普通大肠埃希菌检查
2.1.1标本采集 以无菌操作采取血液、脑脊液、尿液、胆汁、脓液、痰及分泌物、水等。
2.1.2分离培养 血液标本先接种于肉浸汤内增菌后(细菌生长，肉汤浑浊)，移种血琼脂平板和伊红-亚甲蓝琼脂平板上。
期刊文章分类查询,尽在期刊图书馆体液标本取离心沉淀物，脓液、痰、分泌物等直接划线接种于以上培养液上，35～37℃培养18～24h后，观察菌落形态。尿液除做分离培养外，尚需同时做尿中细菌总数测定。
2.1.3菌种鉴定 初步鉴定根据菌落形态涂片染色并做氧化酶、触酶、硝酸盐等生化反应。可初步定为大肠埃希菌[2]。最简便的方法是采用肠杆菌科试剂盒，根据反应结果编码后作出最后鉴定。
2.2肠道感染细菌学检查 引起肠道感染(腹泻)的大肠埃希菌主要有三组：产毒素型大肠杆菌、肠致病性大肠埃希菌及肠侵袭性大肠埃希菌。它们的生物学特性与普通大肠杆菌相同，但具有特殊的血清型或肠毒素。
2.2.1不耐热肠毒素(LT)检测
2.2.1.1兔肠段结扎法 用2kg左右的健康家兔，禁食2d后麻醉剖腹取出小肠，自回肠末端开始结扎，每段5cm共6段，其中一段为阳性对照，另一段为阴性对照，余4段注入试验菌的肠毒素液(培养的上清液)1ml，然后将小肠放回原处，缝合腹壁，24h后计算每厘米肠段中肠液蓄存量，如阴性对照肠段未见肠内有液体，阳性对照肠内充满液体(可达2ml/cm3)，实验肠段液体≥1ml/cm3者为阳性反应，表示被检菌能产生LT。
2.2.1.2皮肤毛细血管通透性亢进试验 将兔背部或豚鼠腹部剃毛后，皮内注射被检菌培养上清液0.1ml，24h后，耳静脉内注射伊文蓝液(50g/L的色素溶于4.5g/L的NaCl溶液中)，每kg体重注入1.2ml，1h后，量取注射部位蓝色斑的直径。测量时再根据蓝色斑的深浅分成1～8度，判定结果，以蓝色斑的深浅度乘以蓝色斑的直径值表示之。
2.2.1.3琼脂扩散法(Elek法) 取已分纯并鉴定为大肠埃希菌者移种于艾立克琼脂平板上，均匀涂布呈椭圆形，35℃培养48h后，将浸有2万U/ml的多黏菌素纸片贴于菌落上，35℃培养5～6h后，在中心离菌苔4～5mm处开约直径4mm孔，放入已提纯并已稀释的LT抗血清20～30ml。同时在各菌苔外缘挑取7mm直径的琼脂块各4个，浸泡于0.5ml pH 7.0，0.01mol/LPBS中，放冰箱过夜用ST测定[3]。然后将平板置35℃培养15～20h，观察结果，凡与LT抗血清产生沉淀线的试验菌为LT阳性。
2.2.2耐热肠毒素检查
2.2.2.1乳鼠灌胃法(ST检测法) 取已制备好的ST浸泡液(见Elek法)或被试菌培养滤液0.1ml，经口饲喂1～3d龄的瑞士种乳鼠，4h后取出全部肠管秤重，再计算肠重与剩余体重的比值，比值在0.09以上为阳性，<0.07为阴性。此法简便、快速，易于重复，效果较好。
2.2.2.2 EPEC检验 主要依据血清学试验和生化反应鉴定。
2.2.2.3 EIEC检验 程序基本与EPEC相同。将分纯的菌株做生化反应和血清学鉴定及致病性测定。
2.2.2.4致病性测定 以被检菌液接种于豚鼠结膜囊内，可产生典型角膜一结膜炎，在角膜上皮细胞内可见大量本菌。
3.讨论
大肠埃希菌是组成食品及水中大肠菌群成员之一，其数目多少代表粪便污染的程度。本菌属条件致病菌，但目前已成为医院内感染的主要致病菌。其耐药性已受到广泛关注。大肠埃希菌致病因素，菌毛能帮助细菌黏附于黏膜表面，有利于大肠埃希菌的定植。K抗原能抗吞噬，并有抵抗补体和抗体的作用。大肠埃希菌与其他革兰阴性杆菌产生的内毒素一样，具有相似的病理生理作用，如导致发热、休克、弥散性血管内凝血等。大肠埃希菌产生两种外毒素，一种是不耐热肠毒素(LT)，加热至65℃保持30min即被破坏；另一种是耐热肠毒素(ST)，100℃保持10～20min不被破坏。两者可使细胞内cAMP或cGMP水平增高，使肠液大量分泌而导致腹泻。肠道外感染大肠埃希菌多为机会感染，大肠埃希菌是医院感染的常见菌种。可引起各种类型的感染，以泌尿系统感染和化脓性感染最为常见。婴幼儿、老年人或免疫力低下者可引起败血症。有些大肠埃希菌菌株能引起轻微腹泻至霍乱样严重腹泻，并能引起致死性并发症，如溶血性尿毒综合征。根据不同的血清型、毒力和所致临床症状的不同。
【参考文献】
[1]谌志强，段惠莉，王新为等.大肠埃希菌O157:H7的胶体金免疫渗滤法检测[J].中国公共卫生. 2005(6):705-706.
[2]韩文权，孙瑛，竺琳.尿路感染患者大肠埃希菌检测及耐药性分析 [J].检验医学与临床.2011， 08(17):2105-2107.
[3]朱碧红，徐叶进，张慧芳等.156例尿路感染大肠埃希菌耐药性分析[J].中国微生态学杂志.2007.19(5):461-462.
论文作者:陆春光
论文发表刊物:《心理医生》2015年16期供稿
论文发表时间:2016/5/11
标签：大肠论文; 琼脂论文; 大肠杆菌论文; 肠道论文; 抗原论文; 毒素论文; 菌落论文; 《心理医生》2015年16期供稿论文;