李建峰[1]2002年在《VEGF在脊髓空洞前状态中的表达及作用机制探讨》文中认为目的：本研究通过枕大池注射Kaolin制作脊髓空洞症的动物模型，应用干湿法测定脊髓空洞前状态中脊髓含水量进行定量研究并观察其变化趋势；应用免疫组织化学、酶联免疫吸附实验(ELISA)，检测脊髓组织和脑脊液中VEGF的表达及变化趋势，探讨VEGF与空洞前状态中脊髓水肿形成之间的关系及其作用机制。 方法：将40只健康、体重1.5-2kg的中国白兔(雌雄不限)，随机分为叁组。其中Kaolin组20只，生理盐水组10只，假手术组10只。家兔在氯胺酮(30mg／kg)耳缘静脉麻醉后，取俯卧颏低位，颈后部备皮常规消毒。按McLaurin法行经皮枕大池穿刺术，缓慢抽出无色透明脑脊液0.6ml后，Kaolin组动物注入37℃25％Kaolin悬浊液0.6ml；依同样方法生理盐水组动物仅注入37℃生理盐水0.6ml；假手术组动物只行枕大池假穿刺，既不注射Kaolin，也不注射生理盐水以作对照。于术后第1、3、7、14、21天，随机选取动物再次麻醉行枕大池穿刺，穿刺针方向朝向第四脑室，缓慢取出CSF0.6ml后断头处死，离心5分钟(2500转／min)取上清液-40℃低温保存，行ELISA检测其中VEGF含量，与动物模型制作时经枕大池穿刺采集的脑脊液进行自身正常对照。动物处死后，迅速完整取出脑和颈髓组织，于C_(1-2)节段取4mm，仔细剔除表 中文摘要面蛛网膜及 Kao i n沉积，滤纸吸除表面水分，用电子大平（分度值O．00019）称取湿重仰，再经no℃恒温烤箱烘烤24 小时后称取干重①厂 应用公式：脊髓含水量恍广仰－D）／W X 100，计算脊髓含水量。其余标本4％多聚甲醛固定48小时，制作蜡块、切片，进行H＆E染色和免疫组织化学染色。用 HPIASq 高清晰度彩色病理图文分析系统对免疫组织化学染色阳性反应物进行定量检测，测定切片中阳性反应物的面积和灰度，数据通过t检验进行统计学处理。观察各组动物脊髓组织中VEGF的表达及变化趋势，并与脊髓水肿变化趋势进行对比。 结果：术后第l上天，Kaolin组动物表现出精神萎靡，嗜睡，厌食；于7八 天症状逐渐加重，出现肢体无力，轻瘫及运动协调性差等神经功能障碍，并伴有明显消瘦，其中2只因处于濒死状态而处死；3周后精神、食欲明显好转，但神经缺失症状无明显改善，且有逐渐加重的趋势。生理盐水组和假手术组动物在观察期间则表观正常。标本肉眼观察，生理盐水组和假手术组动物脑、脊髓、蛛网膜下腔和中央管等外观正常。Kaolin组动物的脑脊髓标本在第1天无明显变化，仅见下位脑干至上颈髓背、腹侧蛛网膜下腔有大量Kaolin沉积，四脑室正中孔和侧孔被不同程度阻塞；第3大除上述变化外，出现脑组织肿胀、脊髓水肿增粗；第7、14天水肿最为明显，枕大池狭窄或闭塞，四脑室轻度扩张；第ZI天水肿较前缓解，但四脑室扩张较前加重，小脑扁桃体轻度下疵；中央管饱满、扩张。Kaolin肉芽肿形成，与蛛网膜下腔和脊髓粘连，不易剥离。干湿法测定脊髓含水量结果显示，假手术组和生理 2 中文摘要 盐水组家兔脊髓含水量无明显统计学差异，其均值分别为 67．66士 0．82O和 67．15士 0．70o；Kaolin组动物脊髓含水 量在术后第1大轻度升高K8．35士0．7％人 第3天水肿明 显力重（72．70士0．88o），第 7、14天达至高峰（72．92士 0．86％、刀．18b 0．55％），第ZI天水肿开始缓解，但仍高 于正常门0．03切．77人 Kaolin组动物脊髓含水量与生理盐 水组和假手术组比较有明显差异。光镜观察，正常和生理 盐水对照组动物脊髓神经元轮廓正常，核及核仁清楚，胞 浆内尼氏体分布均匀，神经元、神经胶质细胞、血管周围 间隙正常。他dn组动物术后第1天，脊髓组织学检查 亦无明显改变；第3天出现细胞、血管周围间隙增宽，表 现为轻度水肿；第7天、14天水肿程度加重，核膜、核 仁稍显模糊，神经元胞体内尼氏体减少，胶质细胞增生， 中央管饱满，中央管室管膜细胞受压变平，管周组织疏松， 呈明显水肿改变，蛛网膜下腔可见 Kao i n沉积，大量炎 性细胞浸润。第ZI大水肿稍显减轻，但持续存在，胞浆 空泡出现，后角细胞数量减少，胶质细胞增生明显，中央 管张力增加，室管膜上皮断裂，可见 Kao i n肉芽肿形成。 免疫组织化学检测，生理盐水组和假手术组动物颈髓灰质 神经元有VEGF弱阳性表达，微血管壁和室管膜上皮 VEGF表达阴性。Kaolin组动物颈髓组织于术后第1天神 经元VEGF表达有明显升高，神经胶质细胞亦可见阳性表 达；第 3大、7天、14天 VEGF在神经元、神经胶质细胞 以及白质中星型胶质细胞呈强阳性表达，胞浆可见粗的棕 黄色颗粒分布，同时可见软膜和髓内血管壁呈VEGF阳性 表达。第 ZI天 VEGF表达明显减弱，仅在神经元和神经
李建峰[2]2005年在《实验性脊髓空洞前状态形成机制的分子生物学研究》文中提出脊髓空洞症(syringomyelia, SM)是一种常见的缓慢进展性脊髓退行性病变。起病隐匿,可由多种病因所致,如Chiari’s 畸形、外伤、肿瘤、炎症等。主要临床表现为肢体瘫痪,分离性感觉障碍及慢性疼痛。随着影像学的发展,其发病率逐年增高,由于其较高的致残率,目前又无远期疗效确切的治疗方法,给家庭和社会造成了极大损失。对本病的发病机制重新认识,探索新的预防和治疗途径显得尤为重要。对其发病机制和治疗方法,国内外学者看法不一,提出了多种学说,如脊髓缺血机制、脑脊液循环障碍机制、脑脊液的脊髓髓质渗透学说等[1]。脊髓空洞形成前的病生理变化于近年引起了国内外学者的注意,张庆俊等称其为脊髓空洞形成前期[2],国外称其为空洞前状态(presyrinx state)。它是脊髓空洞症的最初始改变,对其进行研究,将更清楚地揭示脊髓空洞症形成的病生理机制,同时也为我们超早期采取干预措施逆转其这种初始改变,阻断空洞形成提供可能机会。本研究通过枕大池注入Kaolin,建立实验性兔脊髓空洞症模型,分四部分逐步深入探讨脊髓空洞前状态形成与发展的病生理机制。1 实验性家兔脊髓空洞前状态的血-脊髓屏障形态功能变化研究本部分通过对家兔枕大池注入Kaolin 制作脊髓空洞症模型,观察脊髓空洞形成前期血脊髓屏障的功能和结构变化,并对其发生机制进行探讨。将56 只体重1.5-2kg 的中国白兔随机分为叁组(n=8),其中Kaolin 组40只,分五个时间点,生理盐水组和假手术组各8 只。按McLaurin 法,行经皮枕大池穿刺,缓慢抽出无色透明脑脊液0.6ml 后(有血性CSF 者弃去不用),Kaolin 组动物注入37 ℃25% Kaolin 悬浊液0.6ml;生理盐水组动物注入37℃生理盐水0.6ml;假手术组动物仅行枕大池假穿刺以作对照。于术后第1、3、7、14、21 天,随机选取动物处死,取动物上颈髓组织做标本处理。通过干湿法测定脊髓含水量、伊文氏蓝(Evansblue)法定量测定血脊髓屏障功能、电镜观察空洞前状态脊髓组织的超微结构变化,结合神经电生理和神经功能评分动态观察动物神经功能变化,在脊髓
李建峰, 张庆俊[3]2004年在《血管内皮生长因子在脊髓空洞前状态中的表达及作用机制探讨》文中提出目的 通过观察脊髓空洞前状态中脊髓水肿程度和组织学变化 ,测定血管内皮生长因子的表达并探讨其作用机制。方法 常规组织学及电镜观察 ,应用干湿法测定脊髓空洞前状态中脊髓含水量 ,ELISA和免疫组织化学测定脑脊液和脊髓中VEGF表达含量。结果 组织学观察发现 ,Kaolin组动物在术后 2周内出现脊髓水肿且随时间延长逐渐加重 ,2 1d出现髓鞘和轴索损伤 ;脊髓含水量较对照组在术后第 1天轻度升高 (68.3 5± 0 .70 ) % ,第 3天水肿明显加重 (72 .70± 0 .88) % ,第 7、14天达到高峰 [(72 .92± 0 .86) %、(72 .18± 0 .5 5 ) % ] ,第 2 1天水肿开始缓解 ,但仍高于正常 (70 .0 3± 0 .77) %。Kaolin组动物脊髓、脑脊液中VEGF表达较正常对照明显增高 ,其强度变化趋势与脊髓水肿和组织学变化程度一致。结论 在实验性脊髓空洞症模型中 ,缺血水肿 ,组织含水量增高构成脊髓空洞前状态的主要表现 ;VEGF高表达在脊髓空洞前状态中的水肿形成中起重要作用。
李建峰, 孙国柱, 刘海英, 张庆俊[4]2007年在《VEGF对实验性脊髓空洞前状态的血-脊髓屏障功能的调节作用》文中研究表明目的:通过建立兔脊髓空洞症模型,观察脊髓空洞前状态中血脊髓屏障功能变化和脊髓水肿程度,以及脊髓组织中VEGF蛋白、mRNA表达水平,并探讨VEGF表达在脊髓空洞前状态形成和发展中的作用。方法:应用干湿法测定脊髓空洞前状态中脊髓含水量,Evansblue法测定血脊髓屏障功能,应用免疫组织化学和RT-PCR测定脊髓组织中VEGF蛋白和mRNA的表达含量。结果:Kaolin组于术后第1天VEGFmRNA(0.31±0.02)表达有明显升高,第3天(0.44±0.03)、7天(0.66±0.02)、14天(0.56±0.01)呈强阳性表达,第21天(0.35±0.04)表达明显减弱;VEGF蛋白表达也呈现相同的变化趋势。同时Kaolin组动物在术后2周内出现脊髓水肿且随时间延长逐渐加重;组织中Evansblue含量在术后第3天有开始增高(2.79±0.42μg/ml),第7天达到高峰(3.53±0.45μg/ml),持续到第14天(3.45±0.35μg/ml),第21天有好转(3.36±0.27μg/ml)但仍高于正常。统计学分析结果显示VEGF高表达和脊髓空洞前状态中血脊髓屏障功能变化和脊髓水肿程度存在明显正相关。结论:在脊髓空洞前状态中,VEGF高表达对脊髓组织中血脊髓屏障功能和结构的破坏存在重要影响,在脊髓水肿和空洞形成、发展中起着重要作用。
李建峰, 张庆俊[5]2004年在《NF-κB、IκB、GFAP在脊髓空洞前状态中的表达和作用》文中提出目的:脊髓空洞前状态主要表现为脊髓缺血缺氧性水肿,为了探讨其发生的分子生物学机制,观察脊髓组织中的NF-κB、IκB、VEGF、GFAP的表达,探讨它们之间的相互关系。方法:通过枕大池注射Kaolin制作家兔的脊髓空洞症模型,应用免疫组织化学的方法测定不同时间点的脊髓组织中NF-κB、IκB、VEGF、GFAP的表达。结果:Kaolin组动物颈髓组织中,NF—κB表达在术后第1天明显升高,第3天达到高峰,两周时基本恢复正常;IκB各时间点的表达变化与NF-κB成负相关,术后第1天开始明显下降,维持低水平表达至第7天;VEGF主要表达于神经元,神经胶质和血管内皮细胞的胞浆中,术后第1天表达明显增高,第7天达到高峰且维持两周,第3周表达明显减弱,但仍高于正常。GFAP则主要表达于神经胶质细胞,于术后第1天开始升高,但高峰期较VEGF向后延迟至两周并维持到叁周仍呈较高水平。结论:在脊髓空洞前状态中,VEGF表达增高,影响BBB的完整性,产生脊髓水肿:GFAP表达增高,代表脊髓组织增强的神经胶质反应。他们二者的高表达同时受NF—κB/IκBα的活性的调节。
李建峰, 孙国柱, 张庆俊[6]2007年在《紧密连接蛋白ZO-1在兔脊髓空洞前状态中的表达》文中提出目的观察紧密连接蛋白ZO-1在实验性兔脊髓空洞前状态中的表达及变化规律。方法通过Kaolin枕大池注射,建立兔脊髓空洞模型,分别在术后第1、3、7、14、21天,应用Evans- blue法、免疫组织化学和Western blot测定60只(实验组40只,对照组20只)中国白兔血脊髓屏障功能、上颈髓中ZO-1表达含量,并探讨其内在相关性。结果与对照组比较,实验组动物脊髓组织中Evansblue含量在术后第3天开始增高(2.79±0.42)mg/L,7 d达到高峰(3.53±0.45)mg/L,持续到14 d(3.45±0.35)mg/L,21 d好转(3.36±0.27)mg/L。Western blot结果显示,ZO-1表达含量在第3天开始减弱(195.32±23.50),第7天(126.28±27.40)、14 d(119.36±18.70)表达最弱,21 d(165.70±21.20)部分恢复。同时免疫组织化学测定ZO-1表达变化趋势和Western blot结果一致。统计学分析表明,ZO-1表达与Evansblue含量在空洞前状态中的时相变化具有明显相关性(r=-0.9502,P<0.01)。结论ZO-1的表达强度变化趋势与实验性兔脊髓空洞前状态中的血脊髓屏障功能破坏程度变化相一致,ZO-1表达下降是形成实验性脊髓空洞前状态病理改变的重要因素。
申庆丰[7]2004年在《MMP-9的表达变化与脊髓空洞前状态的关系》文中指出目的：脊髓空洞症是缓慢进展的退行性疾病，迄今为止对其形成机理尚不完全清楚。脊髓空洞前状态是近几年在研究脊髓空洞症发病机制中提出的一个新的概念，由于它反映了脊髓空洞症发病的早期表现，而且可以被逆转，所以对脊髓空洞症的预防和治疗具有重要意义。 我们先前实验显示，脊髓空洞前状态的病理变化主要为缺血水肿样改变。这种水肿为血管源性水肿，主要与血管内皮通透性增加和血脑脊液脊髓屏障的损害有关。基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase 9，MMP-9)可以降解Ⅳ型，Ⅴ型胶原，纤维连接蛋白，弹性蛋白和变性后的基质胶原，内皮细胞间的紧密连接以及构成血脑脊液脊髓屏障的主要成分基质层，故它可以破坏血管内皮和血脑脊液脊髓屏障使二者通透性增加，造成血管源性水肿。本实验拟通过观察家兔脊髓空洞症模型的空洞形成前期脊髓的组织学变化，测定脊髓含水量，应用 western blot 和免疫组织化学方法对MMP-9 的表达进行研究，并应用 Doxycycline 进行干预治疗旨在探讨 MMP-9 在脊髓空洞前状态形成中的作用，为临床防治脊髓空洞症提供理论依据。 方法：将 96 只健康、体重 1.5-2kg 的中国白兔，随机分为四组，其中 Kaolin 组 30 只，Doxycycline 治疗组 30 只，生理盐水组 30 只和正常对照组 6 只。家兔在氯胺酮（30mg/kg）耳缘静脉麻醉，氯丙嗪（30mg/kg）肌注辅助──────────────────────────────────────── 1<WP=4>中 文 摘 要麻醉后，取俯卧颏低位，，颈项部手术区常规消毒，按McLaurin 法，用 4 号针头行经皮枕大池穿刺术，缓慢抽出无色透明脑脊液 0.6ml 后，脊髓空洞症模型组（Kaolin 组）和 Doxycycline 治疗组动物注入 37℃25% Kaolin 悬浊液0.6ml；依同样方法生理盐水组仅注入 37℃生理盐水 0.6ml。Doxycycline 组动物给予 Doxycycline 25mg/kg.d 胃管内注入。正常对照组麻醉后处死。在第 1、3、7、10、14 天，各时间点随机抽取 Kaolin 组，Doxycycline 组动物和生理盐水组各 6 只，处死后采集颈髓组织标本。各组动物分别在不同时间分批用氯胺酮 50mg/kg 快速推注，断头处死。将动物脑和颈髓组织迅速取出，于 C1-2 节段截取 4mm，仔细剔除表面蛛网膜及 Kaolin 沉积，滤纸吸除表面水分，立即应用于脊髓含水量的测定，置电子天平（分度值 0.0001g）称取湿重(W)，再经 110℃ 恒温烤箱烘烤 24 小时后称取干重(D)，应用公式：脊髓含水量(%)=(W – D)/ W × 100 ，计算出脊髓含水量；截取C2-3节段标本置4%多聚甲醛固定48小时后，常规脱水，石蜡包埋，制作 5μm 厚连续切片。进行 H&E染色和免疫组织化学染色观察组织病变程度及 MMP-9 表达水平；截取 C3-4节段标本迅速放入液氮中 2 分钟，-70℃冰箱保存，应用 Western blot 测定胞浆 MMP-9 活性。统计学分析应用 SPSS10.0 软件包进行方差分析检验比较各 kaolin组、doycycline 组及生理盐水组和正常对照组间的 MMP-9活性的差异，数据以均数±标准差表示。 结果 ：术后第 1-3 天，Kaolin 组动物表现出精神萎靡，嗜睡，厌食；于 7-14 天症状逐渐加重，且出现肢体无力，轻瘫及运动协调性差等神经功能障碍，并伴有明显消瘦，其中──────────────────────────────────────── 2<WP=5>中 文 摘 要1 只因处于濒死状态而处死。生理盐水组和正常对照组动物在观察期间则表现正常。Doxycycline 组动物也有精神萎靡，嗜睡，厌食等表现但仅有 8 只出现肢体无力和轻瘫。应用干湿法测定观察，生理盐水组各时间点测定的脊髓含水量和正常对照组家兔相比均无明显统计学差异；Kaolin 组各时间点动物脊髓含水量与生理盐水组各时间点和正常对照组比较有明显升高；Doxycycline 组动物各时间点动物脊髓含水量与kaolin 组比较有明显降低。肉眼观察生理盐水组和正常对照组动物脑、脊髓、蛛网膜、蛛网膜下腔、中央管外观正常。Kaolin 组动物的脑脊髓标本在第 1 天肉眼观察变化不明显，仅于下位脑干至上颈髓背、腹侧蛛网膜下腔可见大量 Kaolin沉积，四脑室正中孔和侧孔被不同程度阻塞；第 3 天除上述变化外，开始出现脑组织肿胀、脊髓肿胀增粗；第 7、10、14 天水肿最为明显，枕大池狭窄或闭塞，四脑室轻度扩张，Kaolin 肉芽肿形成，与蛛网膜下腔和脊髓粘连，不易剥离。Doxycycline 组动物的脊髓标本第 1、3、7 天均无明显变化，只见下位脑干至上颈髓背、腹侧蛛网膜下腔有大量 Kaolin 沉积，四脑室正中孔和侧孔被不同程度阻塞；第 10、14 天脊髓标本可见轻度肿胀增粗，较 Kaolin 组肿胀轻微，亦有 kaolin肉芽肿形成，与网膜下腔和脊髓粘连，不易剥离。光镜观察生理盐水组和正常对照组动物脊髓神经元轮廓正常，核及核仁清楚，胞浆内尼氏体分布均匀，神经元、神经胶质细胞、血管周围间隙正常。Kaolin 组动物术后第 1 天，脊髓组织学检查亦无明显改变；第 3 天出现细胞、血管?
陆秦楠[8]2016年在《兔BDNF基因过表达和干扰慢病毒载体转染BMSCs与脊髓神经细胞共培养的实验研究》文中研究指明[目的]通过构建脑源性神经营养因子(Brain Derived Neurotrophic Factor, BDNF)基因过表达慢病毒载体,将BDNF载体转染骨髓基质干细胞(bone marrow stromal stem cells,BMSCs),观察与脊髓神经细胞共培养下,BDNF转染的BMSCs中过量表达产物对移植细胞BMSCs体外分化的影响,转染BDNF的BMSCs在体外能否对脊髓神经细胞具有保护作用,探讨转染BDNF的BMSCs体内实验的基础,研究细胞移植替代治疗及基因治疗脊髓疾病的新途径。[方法]一、兔骨髓基质干细胞分离、培养、鉴定1、BMSCs的原代培养、传代培养；2、流式细胞仪鉴定培养的BMSCs,进行CD29、CD34、CD45、CD90染色；二、兔BDNF基因过表达和干扰慢病毒载体构建及转染BMSCs1、从日本大耳兔脊髓中提取RNA,合成cDNA,构建BDNF基因过表达和干扰慢病毒载体并测序、酶切鉴定；2、采用定量PCR、Western blot实验进行BDNF过表达、干扰慢病毒载体最佳质粒筛选；3、BDNF过表达质粒及干扰质粒慢病毒包装,脂质体法转染BMSCs;4、RT-PCR、Western Blotting分别检测转染的BMSCs中BDNF基因、蛋白表达；叁、兔BDNF基因慢病毒载体转染的BMSCs与脊髓神经细胞共培养1、兔脊髓神经细胞的提取、分离、原代培养；2、采用免疫组化法鉴定培养的兔脊髓神经细胞,进行NSE染色；3、共培养实验分为四组：A组：脊髓神经细胞与未转染的BMSCs培养；B组：脊髓神经细胞与转染BDNF过表达基因的BMSCs培养；C组：脊髓神经细胞与转染BDNF干扰基因的BMSCs培养；D组：脊髓神经细胞与转染空病毒载体的BMSCs培养。4、采用Transwell双层培养皿进行转染的BMSC细胞与脊髓神经细胞共培养；5、RT-PCR、Western Blotting分别检测共培养中BDNF基因、蛋白表达；6、采用免疫组化法鉴定共培养中向神经元样细胞分化的BMSCs,进行Nestin. NSE染色；四、结果检测采用SPSS17.0统计软件进行分析,所有数据均以x±s表示,数据组间差异用独立样本t检验分析,组内差异用单因素方差分析,P<0.05具有统计学意义。[结果]1、BMSCs的培养、鉴定BMSCs原代培养后见贴壁生长的细胞数量逐渐增多,细胞形态变为长梭形,可见成纤维样细胞散布于培养瓶底,并有集落形成,细胞围绕中心呈漩涡状排列。细胞融合达80%时即可再次传代,BMSC细胞传至第3代时进行流式细胞仪鉴定,基本不表达造血干细胞的表面标志CD34、CD45,但CD29和CD90阳性。2、BDNF基因慢病毒载体构建、鉴定及最佳质粒筛选构建的慢病毒进行测序,以NCBI的基因进行比对,其所有基因均能100%匹配,酶切验证表达重组质粒,PCR验证干扰重组质粒,证实目的基因已插入重组质粒。QPCR、Western blot实验进行最佳质粒筛选,过表达组BDNF明显表达,干扰组BDNF明显减少,与对照组相比具有显着性统计学意义(p<0.01)。3. BDNF基因慢病毒载体转染BMSCs及RT-PCR、Western Blotting检测免疫组化染色显示BDNF基因慢病毒载体成功转染BMSCs, RT-PCR、 Western Blotting检测基因、蛋白的表达显示干扰质粒BDNF表达最少,BDNF过表达基因转染的BMSCs中BDNF明显高于其他组(p<0.01),差异有统计学意义。4、兔脊髓神经细胞的培养、鉴定脊髓神经细胞培养后细胞大部分贴壁,胞体增大,呈圆形或椭圆形,胞体周围的突起伸展并延长,形成单极、双极或多极突起。采用免疫组化法鉴定,培养3天的神经细胞经NSE免疫荧光染色,阳性率达86%以上。5、BDNF基因慢病毒载体转染的BMSCs与脊髓神经细胞共培养RT-PCR、Western Blotting分别检测共培养中转染的BMSCs BDNF基因、蛋白表达,C组BDNF mRNA及蛋白表达最少,B组BDNF mRNA及蛋白表达明显高于其他组,P<0.05,差异有统计学意义。共培养后,B组大部分BMSCs向神经样细胞分化,而A、C、D组细胞形态变化较小。采用免疫组化法鉴定共培养中分化的BMSCs,定量计数分析B组表达NSE约为(89.49±1.25)%,Nestin约为(91.20±2.50)%,C组极少量表达NSE和Nestin, A组与D组少量表达NSE和Nestin。B组、C组与A组比较P<0.05,差异有统计学意义；D组与A组比较P>0.05,无明显差异。[结论]1、BMSC可以在体外分离、培养、传代、扩增,经流式细胞仪鉴定证实分离培养的细胞为BMSC。2、兔BDNF基因过表达慢病毒载体构建成功,成功转染BMSCs,有效增强BMSCs中BDNF基因的表达,能够稳定表达BDNF蛋白。3、与脊髓神经细胞共培养下,BDNF基因过表达慢病毒载体转染的BMSCs高表达BDNF mRNA,在BMSCs分泌物中BDNF蛋白分泌较多,促进共培养的BMSCs向神经元样细胞分化,促进其突起的形成和生长,对脊髓神经细胞有保护作用。
桂治府[9]2012年在《水通道蛋白4对结肠癌细胞迁移能力的影响》文中研究表明目的和背景：水通道蛋白（aquaporins，AQPs）在多种人肿瘤细胞中都有表达，最新研究显示水通道蛋白参与肿瘤细胞的增殖、迁移，AQPs已经成为肿瘤细胞生物学调节因子之一。本实验旨在探讨水通道蛋白4（aquaporin4，AQP4）对人结肠腺癌细胞增殖、迁移的影响。方法：以血管内皮生长因子（VEGF）与AQP4-siRNA分别上调或下调人结肠癌细胞株LoVo细胞AQP4表达，Western blot检测AQP4表达变化；以细胞划痕试验及CCK-8增殖试验分别检测细胞迁移及增殖能力。结果：VEGF可上调LoVo细胞中AQP4的表达，且呈浓度和时间依赖性；VEGF促进LoVo细胞迁移；AQP4-siRNA干扰下调AQP4后细胞迁移能力明显下降；与VEGF处理组比较，AQP4-siRNA与VEGF联合处理后LoVo细胞迁移能力下降。单独应用VEGF或AQP4-siRNA对细胞增殖能力无明显影响。结论：AQP4对人结肠腺癌细胞迁移能力具有促进作用，提示AQP4可能是结肠癌侵润、转移的重要因素之一。
佚名[10]2004年在《《中国误诊学杂志》2004年第4卷总目次索引》文中进行了进一步梳理处方管理办法 (试行 ) (1 0 ) :1 561…………………………………………专稿当前误诊学研究存在的问题与出路刘振华 张经建 (1 ) :1……………从 SARS误诊论误诊标准的制定李文智 冯亚民 (3) :32 1……………中医急诊的误诊与预防
参考文献：
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