程芳 姜蕾
（六安市中医院药剂科 安徽 六安 237000）
【摘要】 目的：研究清膈养阴颗粒的含量测定限度确定方法。方法：采用高效液相色谱法对制剂中绿原酸进行含量测定并确定含量限度。结果：绿原酸进样量范围在0.222μg～2.220μg之间峰面积与进样量线性关系良好。平均加样回收率为96.616%，RSD%=1.13% (n=6)。并通过六批样品确定制剂绿原酸的含量限度为1.4mg/g。结论：该方法专属性强，灵敏度高，重复性好，可为该制剂质量标准的制定提供参考。
【关键词】 清膈养阴颗粒；绿原酸；HPLC
【中图分类号】R927.2 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2015）33-0382-02
The content limitation determined for Qinggeyangyin Granules Cheng Fang, JiangLei.
Dept of Pharmacy;The Traditional Hospital of Luan;Anhui Luan 237000,China
【Abstract】Objective To establish the content limitation for Chlorogenic acid in Qinggeyangyin Granules. Methods The content of Chlorogenic acid was determinated by HPLC,and to decide the content limitation of Qinggeyangyin Granules. Results The experiment showed good linear relationship at the ranges of 0.222μg-2.220μg for natural logarithm of peak area and concentration. The average recovery rare of Chlorogenic acid was 96.616%，RSD%=1.13% (n = 6). The content limitation of Chlorogenic acid was determined at 1.4mg/g in Qinggeyangyin Granules by determinating six batch samples . Conclusion The established methods are not only practical but capable of effectively controlling the quality of Qinggeyangyin Granules, to give reference forformulating the quality standard for Qinggeyangyin Granules.
【Key words】Qinggeyangyin Granules;Chlorogenic acid ;HPLC
清膈养阴颗粒是我院的医院制剂，由金银花、芦根、黄芪、白及、甘草等组成，适用于放射性食管炎表现为气阴两虚，或气虚血瘀，或毒伤血络，淤血内阻，甚则热壅肉腐等证。本实验对君药金银花的主要有效成分绿原酸含量限度进行了确定，为清膈养阴颗粒质量标准的建立提供依据。
1.仪器与试药
仪器：安捷伦1200高效液相色谱仪（安捷伦G1316A紫外检测器、安捷伦G1310A 泵）。
试剂：乙腈（色谱纯，TEDIA），甲醇、磷酸（分析纯），纯化水（自制）。
2.方法与结果[1,2]
2.1 色谱条件 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（Agilent TC-C18，4.6×250mm，5um）；乙腈∶0.1%磷酸（13∶87）为流动相；检测波长为327nm；流速：1.0ml/min；柱温：25℃；进样量：10µl；理论板数按绿原酸峰计算应不低于5000。
2.2 溶液的制备 对照品溶液的制备 精密称定绿原酸对照品11.80mg，置25ml棕色容量瓶中，加50%甲醇溶解并稀释至刻度即可，作为储备液，备用。
供试品溶液的制备 取本品适量，研细，取约2g，精密称定，置50ml棕色容量瓶中，精密加入50%甲醇40ml，称定重量，超声处理（功率200W，频率40kHz）30分钟，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，即得。
缺金银花阴性样品的制备 取缺金银花的阴性样品适量，研细，取约2g，精密称定，置50ml棕色容量瓶中，精密加入50%甲醇40ml，称定重量，超声处理（功率200W，频率40kHz）30分钟，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，即得。
2.3方法学的考察
2.3.1缺味金银花阴性对照试验 取供试品溶液、金银花对照品溶液和缺味金银花阴性样品溶液，依法操作，进行液相色谱分析，结果表明，绿原酸含量测定无干扰，专属性强。
2.3.2 线性关系的考察 精密移取绿原酸对照品储备液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml至10ml容量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀。照上述色谱条件，进样10µl，记录峰面积值。以绿原酸进样量为（μg）横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程Y= 2830.5x–76.381 R=0.9998。表明绿原酸苷进样量在0.222μg-2.220μg范围内进样量与峰面积呈良好的线性关系。
2.3.3精密度试验 精密称取绿原酸对照品1.32mg，置10ml棕色容量瓶中，用50%甲醇稀释至刻度，摇匀，过0.45μm滤膜，连续进样6针，记录峰面积，对照品溶液峰面积RSD=0.11% ( n=6 )，表明该方法精密度良好。
2.3.4稳定性试验 分别在0、2、4、6、8、12h精密吸取供试品溶液10µl注入高效液相色谱仪，记录峰面积，供试品溶液的峰面积RSD=0.49% ( n=6 )。结果表明供试品溶液在12小时内稳定性良好。
2.3.5重复性试验 取同一批号样品6份，按供试品溶液制备项下的方法处理，测定，绿原酸平均含量为1.800mg/g，RSD为0.70%。结果表明此方法重复性良好。
2.3.6加样回收率试验 取已知含量的供试品6份，每份约1g，精密称定，分别加绿原酸对照品约1.9mg，按供试品制备方法进行制备。分别进行测定，记录峰面积值，计算回收率（测得量－样品含量)/加入对照品量×%=回收率%），所得回收率平均值为97.786%，RSD%=1.17%。加样回收率试验结果见表1。
2.3.7含量限度试验 取3批小试样品，3批中试样品，按供试品溶液制备项下的方法制备样品溶液，检测结果见表2。
结果：经过对3批小试样品、3批中试样品进行含量测定，结果表明，清膈养阴颗粒中绿原酸的含量为1.543-1.861mg/g。中试生产之前测得所用批次的金银花中绿原酸含量为2.15%，计算得三批小试与三批中试样品绿原酸的平均转移率为24.57%。根据中国药典（2010年版一部第205页“金银花”项下）规定：金银花药材中绿原酸的含量不得少于1.5%，按小试及中试的平均转移率计算，制成制剂后相当于每克不得少于1.227mg，考虑到金银花药材的来源及加工方法，制成本品每克含金银花以绿原酸计，不得少于1.4mg。
2.4 讨论
金银花为方中君药，绿原酸是其主要有效成分，故选择绿原酸含量作为此制剂质量控制指标之一，在摸索实验中，针对不同型号色谱柱和不同流动相进行了比较，最终选择Agilent TC-C18，色谱柱；乙腈∶0.1%磷酸（13∶87）为流动相。
制定含量限度标准时，不是单纯的参考小试或中试样品数据，而是在测定用于投料的饮片中绿原酸含量的基础上计算绿原酸的转移率，选择三批小试样品和三批中试样品进行综合考虑，并考虑到工业化大生产、结合实际制定合理的含量限度，使得含量限度的确定有据可循。
【参考文献】
[1] 何建雄，赖小平，魏刚等.HPLC测定银翘柴桂汤中绿原酸、芍药苷、黄芩苷[J].中国实验方剂学杂志,2011,17(6):49-50.
[2] 冯彬彬，王小翠，张建海等.不同产地金银花与山银花中绿原酸含量的比较研究[J].安徽农业科学,2012,40(2):729-730.
论文作者:程芳,姜蕾
论文发表刊物:《医药前沿》2015年11月第33期
论文发表时间:2016/5/10
标签：含量论文; 溶液论文; 精密论文; 样品论文; 甲醇论文; 限度论文; 回收率论文; 《医药前沿》2015年11月第33期论文;