（哈密市第二人民医院检验科 新疆 哈密 839001）
【摘要】 目的：探讨乙肝病毒血清学检验中化学发光免疫分析技术（ECLIA）和酶联免疫吸附（ELISA）试验的应用效果。方法：选取2016年6月—2017年9月我院收治的疑似乙肝患者120例作为研究对象，所有患者分别采用ECLIA、ELISA法进行乙肝病毒血清学检验，对两种检测结果进行观察比较。结果：ELISA方式检验乙肝核心抗体（HBcAb）、乙肝e抗原（HBeAg）、乙肝表面抗体（HBsAb）、乙肝表面抗原（HBsAg）的结果与ECLIA进行比较，差异不明显，无统计学意义(P＞0.05)；但在乙肝e抗体（HBeAb）检验结果比较上，ELISA与ECLIA之间存在统计学意义(P＜0.05)；比较ECLIA、ELISA两种检测方法的重复性，除高浓度乙肝表面抗原（HBsAg）含量差异不明显外(P＞0.05)，ECLIA检测到低浓度、中浓度乙肝表面抗原（HBsAg）含量的重复性与ELISA具有明显的统计学差异(P＜0.05)。结论：ECLIA在乙肝病毒血清学检验中具有较高的诊断价值，其对乙肝表面抗原（HBsAg）的阳性检出率高于ELISA，值得临床优先选择和使用推广。
【关键词】 酶联免疫吸附试验；乙肝病毒；血清学检验；化学发光免疫分析技术
【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2018）10-0352-03
乙肝是临床对乙肝病毒性肝炎的简称，其主要是由乙肝病毒（HBV）导致的，患者主要临床表现为恶心呕吐、厌油、乏力、肝功能异常、肝大等，少数病例还同时会出现黄疸、发热症状。其病程呈现迁延慢性发展的特点，病情严重者会逐渐发展成重型肝炎、肝硬化甚至肝癌。乙型肝炎是一种全球流行性病毒感染性疾病类型，在国内部分地区具有较高的发病率。随着病情的持续发展和恶化，患者的生命安全也会受到严重威胁[1]。目前临床方面尚未寻找到治疗乙肝的特效药物或方法，这在一定程度上增加了患者的精神压力和患者家庭、社会负担。如何在发病初期对乙型肝炎患者做出准确诊断，以便尽快采取针对性治疗和处理是临床诊断工作的重点所在[2]。免疫学和乙型肝炎血清标志物检验是临床检测诊断乙型肝炎的常用方法，为评定ECLIA、ELISA两种检测方式的诊断价值，本文选取2016年6月—2017年9月我院收治的疑似乙肝患者120例作为研究对象，现评析报道如下。
1.资料与方法
1.1 一般资料
选取2016年6月—2017年9月我院收治的疑似乙肝患者120例作为研究对象，入选患者均符合《病毒性肝炎防治方案》（中华医学会传染病、肝病学会、寄生虫病学分会）中乙型肝炎的相关诊断标准[3]。其中男患者83例，女患者37例，患者最小年龄24岁，最大年龄50岁，平均年龄（46.8±5.8）岁，
1.2 方法
要求所有患者均在清晨空腹状态下接受检验，抽取10mL肘部静脉血，进行10min左右的3000r离心处理，将血清分离出来待检。将血清样本均分成2分，采用ELISA、ECLIA先后进行检验，每次检验时都将定值参考比作为质控的标准，涉及到的相关操作均按照试剂盒上的要求进行。
1.2.1 ELISA检验方法的具体操作和标准 选择双抗原夹心法测定血清样本，采用去离子水稀释的方式促使50mL的浓缩洗涤液至1000mL，并将其放置在专门的洗液瓶中，调整酶标试剂达到试剂预顶位置，并对吸光度值等进行读取，临界值为阴性对照平均吸光度（A）值为依据，其中阳性：S/OD（标本OD值和临界OD值的比值）在1.00以上；阴性：S/OD在1.00以下。
1.2.2 ECLIA检验方法的具体操作和标准 选择双抗体夹心法测定血清样本，在预定位置将洗液、吸头、配套反应杯等放置好，使用浓度为75%的酒精棉球对试剂进行擦洗，需共同培育的不仅仅是待测样本，还有经过生物素标记的HBsAb和乙肝表面抗原（HBsAg），然后再与亲和素标记的磁微粒共同进行孵育，通过反复洗涤的方式，分离出游离的抗原、抗体以及复合物等，将三丙胺加入，并将ECL反应启动，依据其激光强度对乙肝表面抗原（HBsAg）浓度进行判定，其中阳性：乙肝表面抗原（HBsAg）在10mIU/mL以上；阴性：乙肝表面抗原（HBsAg）在10mIU/mL以下。
1.2.3重复性检验 选择20份低、中、高浓度的乙肝表面抗原（HBsAg）阳性血清进行冷冻保存处理，每天进行1次测量，选择其中10份对批间重复性进行计算，另外10份则对批内重复性进行计算。
1.3 观察指标
将乙肝核心抗体（HBcAb）、乙肝e抗原（HBeAg）、乙肝表面抗体（HBsAb）、乙肝表面抗原（HBsAg）、乙肝e抗体（HBeAb）作为检测内容。其中的参考上限值为0.15ng/mL，乙肝表面抗体（HBsAb）参考上限值为10mIU/mL，乙肝e抗原（HBeAg）的参考上限值为0.25NCU/mL，乙肝e抗体（HBeAb）参考上限值在3.0NCU/mL以上，乙肝核心抗体（HBcAb）参考值在2.0NCU/mL以上。测定值在参考值上限以上则可确定为阳性[4]。
1.4 统计学处理方法
选择SPSS22.0版本的统计学软件对得到的所有数据进行分析处理，检测结果中的计数资料采用百分率（%）加以描述，对比行χ2检验，如果P＜0.05，则代表差异有统计学意义。
2.结果
2.1 对两种方法的检测结果进行统计比较
在乙肝核心抗体（HBcAb）、乙肝e抗原（HBeAg）、乙肝表面抗体（HBsAb）、乙肝表面抗原（HBsAg）检测结果比较上，ECLIA、ELISA两种检测方法差异不存在统计学意义(P＞0.05)，但在乙肝e抗体（HBeAb）检验结果比较上，ELISA与ECLIA之间差异显著，具有明显的统计学意义(P＜0.05)，详细数据见下表所示。
3.讨论
乙型肝炎病毒是一种在全世界各个地区均广泛存在的一种传染性的多发病，我国属于该病的高发国之一，其中携带乙肝表面抗原（HBsAg）患者的百分比在7%～11%范围内。乙肝表面抗原（HBsAg）主要指的是人体发生乙型病毒性肝炎感染后，针对HBV特点，机体免疫系统自发形成的一种特异性抗体[5]。截止到目前为止，临床方面和相关研究学者尚未寻找到特效治疗药物或方法，故早发现乙肝表面抗原（HBsAg）异常并尽早作出明确诊断具有至关重要的作用。
酶联免疫吸附试验可准确反映出乙型肝炎病毒血清学指标，其显著性特点为操作简单方便，准确率高，但其不存在定量分析的能力，无法动态观察到患者病情变化和临床疗效进展，对乙型肝炎病毒感染复制情况不能进行准确判断[6]。ECLIA属于生物素-亲和素技术之一，通过电化学在电极表面形成特异性化学发放反应，其是当前最为科学先进的一种化学发光免疫测定系统。ECLIA技术使用的载体是一种顺磁性微粒，其是由电磁铁控制的，其可使检测的标准化和自动化转化为现实，从而有效减少人工操作过程中导致的各种误差，实现精准的定量、定性分析，使批内、批间误差大幅度减少。与此同时，还可在一定程度上降低因游离抗体导致的假阴性结果，使ECLIA检测的特异性明显提高[7]。本组研究对照性研究分析了ECLIA、ELISA检验方法，结果显示，两种方式在乙肝核心抗体（HBcAb）、乙肝e抗原（HBeAg）、乙肝表面抗体（HBsAb）、乙肝表面抗原（HBsAg）标志物检测结果上无差异(P＞0.05)，在乙肝e抗原（HBeAg）标志物检测结果上，差异具有明显的统计学意义(P＜0.05)。究其原因：ELISA是基层医院检测乙肝的常用方法，其已经广泛应用于临床中，虽价格低廉且检验迅速，但检测乙肝病毒血清标志物时，定性分析价值尚可，但定量分析还存在一定的不足之处，特别是当血清样本浓度过高的情况下，假阴性现象十分常见，再加上实际的检测过程中，抗体和抗体试剂生产差异性导致的误差，会对检验结果产生影响。而ECLIA主要通过电磁铁对顺磁性微粒进行控制，完全实现了自动化操作检验，可避免人为操作引起的各种失误。与此同时，电磁铁产生的电磁拥有的快速消失性可对抗体和复合抗体分离进行有效游离抵抗，可大大减少游离抗体形成的阳性影响，提高阴性检出率[8]。本组研究还发现，在批内、批间重复性检测中，ECLIA与ELISA检出率的差异在低浓度上进行比较，差异显著(P＜0.05)，但高浓度上比较，差异则不具有统计学意义(P＞0.05)，这充分证明，ELISA对高浓度乙肝表面抗原（HBsAg）的检测结果较为准确，对低浓度乙肝表面抗原（HBsAg）的检测结果则不理想，但ECLIA因为检测方法比较广泛，故检测结果显示其检出率的差异以低浓度最为明显，高浓度不明显(P＞0.05)，这充分说明ELISA在高浓度乙肝表面抗原（HBsAg）中更为适用，ECLIA的检测范围更加广泛，对低浓度乙肝表面抗原（HBsAg）加大检测力度，可对传染源进行更加科学有效的控制[9]。
综合上述分析，ECLIA在乙肝病毒血清学检验中具有较高的诊断价值，其对乙肝表面抗原（HBsAg）的阳性检出率高于ELISA，值得临床优先选择和使用推广。
【参考文献】
[1]程育春.化学发光免疫分析技术和酶联免疫吸附试验在乙肝病毒血清学检验中的应用[J].中国实用医药，2016，11(15):53-54，55.
[2]李平.化学发光免疫分析技术和酶联免疫吸附试验在乙肝病毒血清学检验中的应用分析[J].东方食疗与保健，2016，09(5):9-9.
[3]黄怿箐.化学发光免疫分析技术和酶联免疫吸附试验在乙肝病毒血清学检验中的应用分析[J].基层医学论坛，2017，21(23):3102-3103.
[4]张怡莎.乙肝病毒血清学检验采用化学发光法与酶联免疫法的效果对比[J].中国卫生产业，2014，56(32):32-33.
[5]宁进.化学发光免疫分析技术和酶联免疫吸附试验在乙肝病毒血清学检验中的应用效果[J].中国保健营养，2017，27(19):317.
[6]胡晓丹.目前乙肝病毒不同临床检测方法的对照研究[J].国际病毒学杂志，2015，22(z1):142-143.
[7]王泽民.时间分辨荧光免疫技术在乙肝病毒血清学检测中的研究[J].内蒙古医科大学学报，2013，38(6):455-458.
[8]陈海雁，张桂花，罗锦彬，等.荧光定量PCR法检测乙肝病毒DNA和乙肝病毒标志物检测的临床价值分析[J].国际检验医学杂志，2014，07(16):2216-2217.
[9]段海萍，王侠.化学发光酶免疫分析法在乙肝病毒及核心抗体定性检测中的应用分析[J].国际病毒学杂志，2016，23(1):57-59，63.
论文作者:郭跃文,张勇军,丁超
论文发表刊物:《医药前沿》2018年4月第10期
论文发表时间:2018/3/30
标签：乙肝论文; 抗体论文; 血清学论文; 免疫论文; 乙肝病毒论文; 表面抗原论文; 统计学论文; 《医药前沿》2018年4月第10期论文;