3-脱氧-D-阿拉伯庚酮糖-7-磷酸合成酶AroG的结构与功能的研究

3-脱氧-D-阿拉伯庚酮糖-7-磷酸合成酶AroG的结构与功能的研究

胡昌云[1]2003年在《3-脱氧-D-阿拉伯庚酮糖-7-磷酸合成酶AroG的结构与功能的研究》文中指出在细菌和植物中,由公共途径莽草酸途径以及叁个专一性途径分别合成苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸叁种芳香族氨基酸。公共途径第一步反应是公认的限速步骤,由DAHP合成酶的叁种同工酶催化。在大肠杆菌中,aroG基因编码受苯丙氨酸反馈抑制的DAHP合成酶同工酶AroG,催化E4P和PEP反应生成DAHP。本博士论文工作以大肠杆菌K-12来源的AroG为研究对象,通过定点突变、反馈抑制实验和酶学动力学参数的测定,深入地研究了AroG的反馈抑制位点的特性,并对AroG的N-末端在反馈抑制机理和维持稳定四级结构中的作用,以及蛋白质结构的“D2”对称性对酶功能的重要性等进行了具体的研究。 第一部分工作通过氨基酸突变研究确证了从AroG蛋白质晶体结构推测的参与构成反馈抑制位点的各个氨基酸。实验结果表明:在1 mM苯丙氨酸的存在下,1)野生型AroG受到90%以上的反馈抑制;2)Pro150Leu,Leu179Ala,Phe209Ala和Val221Ala这四种点突变在保持与野生型AroG相近的比活的同时,解除了80~100%的反馈抑制;3)点突变Phe144Ala仅解除反馈抑制约30%,同时保持与野生型相当的比活;4)突变体Leu175Ala仅能够解除18%的反馈抑制,Leul75Gln能够解除44%的反馈抑制,Leu175Asp解除了84%的反馈抑制,并且比活都比野生型高。综合前人的研究和本研究工作的实验数据,得出以下结论:1)在AroG的反馈抑制位点供苯丙氨酸结合的疏水口袋由Asp6、Asp7、Ile10、Ile13、Pro150、Gln151、Leu175、Leu179、Ser180、Phe209、Ser211和Val221等12个氨基酸残基构成;2)苯丙氨酸结合的疏水口袋分为两个区域,与苯丙氨酸的苯环发生疏水作用的区域由Ile10、Ile13、Pro150、Leu175、Leu179、Phe209和Val221的侧链构成,而Asp6、Asp7、Gln151和Ser180的侧链构成了与苯丙氨酸的氨基和羧基相互作用的区域。 第二部分工作研究了AorG的N-末端的功能。对N-末端的点突变和缺失突变的研究结果表明:1)在1 mM苯丙氨酸的存在下,点突变I10A和缺失突变△(1-15)能够完全解除反馈抑制,但它们的比活明显降低,Ile10Ala降低了65%,△(1-15)降低90%以上;2)在1 mM苯丙氨酸的存在下,点突变Asn5Lys对仅解除反馈抑制40%,而它的比活与野生型相接近;3)Superose 6凝胶过滤博士论文:3一脱氧一D一阿拉伯庚酮糖一磷酸合成酶AroG的结构与功能的研究层析和W七stem Blot结果均表明野生型户曲G的存在形式有单体、二聚体和四聚体叁种,N一末端巧个氨基酸残基的缺失突变体仅以单体的形式存在。这些结果揭示:1)N一末端在反馈抑制机理中具有重要作用;2)N一末端的缺失使得Ar0G紧密二聚体结构解聚,导致四级结构破坏。N一末端是形成紧密二聚体的必需结构元件。 第叁部分工作研究了户四G结构上的“DZ”对称性在反馈抑制中的作用。对“DZ”对称性相关的氨基酸Leul6、TrpZ15和HisZ17进行点突变和双突变研究结果表明:l)在1 mM苯丙氨酸的存在下,Leul6Ala、TrpZ15Ala和HisZ17Ala能解除35一70%的反馈抑制,T印2巧Ala的比活降低65%以上,其余两者的比活与野生型相近;2)在lmM苯丙氨酸的存在下,导入双点突变TrpZ 1 SAI洲isZ17Ala和Leul6Hi撇isZ17Leu后能够完全解除AroG的反馈抑制,同时保持与野生型相当的比活。这些结果说明“DZ”对称性相关氨基酸残基的点突变和双突变导致了对称性的变化,影响了反馈抑制信号的传递,因此能够部分或完全解除户曲G的反馈抑制。“DZ”对称性结构是AioG正常反馈抑制功能的必要结构形式。 本研究工作通过以上叁个方面对户曲G的反馈抑制机理有了比较深入而系统的了解,明确了户JOG的结构与功能的关系。为芳香族氨基酸合成途径的反馈调控的解除提供了理论基础,对芳香族氨基酸发酵工业的发展具有指导意义。

张远晴, 刘映雪[2]2003年在《踵武前贤 继往开来——访中国人民大学徐悲鸿艺术学院副院长郑晓华》文中研究说明郑晓华现任中国人民大学徐悲鸿艺术学院副院长、教授、博士生导师,为“北京市新世纪百人工程”入选学者,全国青联委员,曾任中国首届“兰亭奖·教育奖”评委、北京市教委高校招生委员会艺术考试评委等职,为中国书法家协会会员。早年学画,后专攻书法,兼及中西艺术史论。主要着作有:《艺术概论》(欧阳中石教授主编)、《古典书学浅探》、《翰逸神飞

梁培先[3]2003年在《愧言传统》文中研究说明当代书坛越来越像是武侠小说中描写的武林了。无论是霍家拳、赵家枪、逍遥派、精武门,还是孔夫子的门徒,张天师的弟子,太白金星的后人,莫不自封为传统的嫡派子孙,拉祖宗以自重。先是大而化之、神而圣之,后是借此占山为王,招摇撞骗。更多的时候则互不服气,以至大打出手、党同伐异,闹得整个书坛人头狗脑四散横飞,好似一幅绝妙的江湖野战图。只是,文无第一,武无第二,写书法的原不似追认武林嫡派一般,可以搞个华山论剑之类的武林大会,打打杀杀一决雌

一舟[4]2003年在《简讯》文中进行了进一步梳理《仰望星光——崔勇波书画评论文集》出版军旅青年书家崔勇波的书画评论专着《仰望星光》近日由中国画报出版社出版发行,书中收录崔勇波近年来撰写发表的各类文本一百六十余篇,二十八万字。该书共分个案研究、人物专访、书评画论、砚池随笔、翰墨因缘五部分,沈鹏先生作序。其中既有对沈鹏、刘炳森、李铎、张道兴、刘大为、杨立舟、冯远等名家,又有对何家英、田黎明、唐勇力、李翔等中青年书画家

郝继文[5]2003年在《莫缘枝节弃大材——第八届国展应对书法作品中的错字有正确态度》文中提出书法作品的错字问题似乎成了新时期有书赛书展以来的古老问题,大展过后,每有人古道热肠,为大家讲解常识,辩明讹误,仿佛潮水过后冲涮出一些痕迹,有了惊喜的发现。《中国书法》今年第五期又刊登了黄舜生、许可久两先生为兰亭奖获奖作者纠错的文章。我看了一下,这两位所挑的毛病都站得住脚,不属于寻岔找事,尤其给管峻的那条小楷,作品集中那么小的字真亏他看得出,始信天下认真严肃的人实在很多,令人佩服。但是请注意,照理按照国展所宣称的惯例,错字问题属于硬伤,应该不客气地拿下的(哪

沈必晟[6]2003年在《关于隶书中波状笔画出现的猜想——对邱振中《关于笔法演变的若干问题》的补充》文中研究表明小引隶书的典型用笔当属波状笔画——横画。平时我们所说的“蚕头雁尾”、“隼尾”等都是对这一笔画的形容。隶书当然是一个通称,~①从秦小篆如《秦律十八种》、《秦语书》或六国诸篆如《效律》、《秦律杂抄》等起始到具有典型用笔及形态的东汉隶书出现,则所谓的隶书波状笔画并不是在在皆有。这里谈到的波状笔画主要是指东汉隶书成熟之后的典型用笔。这是一种较为规范的笔法,它在完善了起、收笔的各种技巧的同时,更为丰富和发展了早期隶书

仇宏斌[7]2003年在《谈苏轼《黄州寒食帖》临习》文中研究表明苏轼,字子瞻,号东坡居士,四川眉山人,生于北宋仁宗景佑叁年(一〇叁六),卒于徽宗建中靖国元年(一一○一),享年六十六岁。苏轼一生多才多艺,工诗、词、书、画,才思敏捷,智力过人,雄视百代。《黄州寒食帖》是苏轼传世的佳作之一,明董其昌将此帖定为苏字第一,赞曰:“余生平见东坡先生真迹不下叁十卷,必以此为甲观。”《黄州寒食帖》书诗二首,共十七行,计一百二十九字,是苏轼被贩黄州

刘小晴[8]2003年在《谈谈发笔、运笔和收笔》文中进行了进一步梳理“积其点画,乃成其字”,其实所有的点画在运笔的过程中都包括了发笔、中间走笔和收笔这叁个部分,是我们研究用笔的重要关键所谓“用笔”实际上包括叁个方面:一是研究执笔和运腕的方法,心能御手,手能御笔,则法在其中矣;二是研究点画的形态及其变化的方法。其实书法艺术最大的特点是点画的形态一直处于变化之中,但这些变化又必须受到理法的制约,必须控制在“度”的范围内,必须遵遁“对比统一”“寓多样于统一”等形式美的基本法则,必须在笔势的管束下进行组合,因此从某种意义上来说,这种变化应该是有节奏的,合乎情理的,不逾越规矩的,顺其自然的,笔调统一的变化即使是楷书中的永

萧高洪[9]2003年在《饮月斋砚赏(续二)》文中研究指明宋绿端石砚为了适应社会文化的发展,端溪砚石的开采在宋代大大推进了一步,不仅坑口在增加,而且石品种类除了紫石之外,还新添了绿石,本篇所介绍的就是一块宋代的绿端砚。砚的造型为长方形平板式,长十五点六厘米、宽八厘米、高一点七厘米。砚堂宽广,由尾向前微倾,砚池深削,与砚堂相通,可承载由砚堂顺流而下的墨汁;砚缘用单刀勒边,可见行刀之走势。砚额着意留有较大块面进行图案装饰,正中刻有一椭圆形下凹水池,池中有水,水波依稀可见,水池中间浮雕有一尾游鱼,十

羊晓君[10]2003年在《来稿点评》文中进行了进一步梳理作品:篆书对联作者:陶秋阳(河南)点评:此篆书行笔从容不迫,毫无懈怠之处。如笔画的起止再严谨一点,少数字和整体布局再讲究一些就好了,篆书也应关注线条的内部变化和质感,避免单调和刻板,两行落款的对称和款字略弱一点均影响了整幅作品的质量。建议在点画的精致上多下功夫,增加其生动活泼和险峻之感并使其相辅相成。作品:《汪道昆望九华诗》隶书作者:陈庆安(安徽)

参考文献:

[1]. 3-脱氧-D-阿拉伯庚酮糖-7-磷酸合成酶AroG的结构与功能的研究[D]. 胡昌云. 复旦大学. 2003

[2]. 踵武前贤 继往开来——访中国人民大学徐悲鸿艺术学院副院长郑晓华[J]. 张远晴, 刘映雪. 书法. 2003

[3]. 愧言传统[J]. 梁培先. 书法. 2003

[4]. 简讯[J]. 一舟. 书法. 2003

[5]. 莫缘枝节弃大材——第八届国展应对书法作品中的错字有正确态度[J]. 郝继文. 书法. 2003

[6]. 关于隶书中波状笔画出现的猜想——对邱振中《关于笔法演变的若干问题》的补充[J]. 沈必晟. 书法. 2003

[7]. 谈苏轼《黄州寒食帖》临习[J]. 仇宏斌. 书法. 2003

[8]. 谈谈发笔、运笔和收笔[J]. 刘小晴. 书法. 2003

[9]. 饮月斋砚赏(续二)[J]. 萧高洪. 书法. 2003

[10]. 来稿点评[J]. 羊晓君. 书法. 2003

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3-脱氧-D-阿拉伯庚酮糖-7-磷酸合成酶AroG的结构与功能的研究
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