黄燕 汪其其
（西安利君方圆制药有限责任公司 陕西 西安 710077）
【摘要】目的：验证通过紫外分光光度法测定对乙酰氨基酚残留的准确性。方法：以0.4mol/LNaOH溶液为溶剂，在257nm处测定吸光度。结果：该检验方法在1ug/ml～8ug/ml范围有较好线性关系，准确度与精密度分别为0.59%、0.3%，检测限与定量限分别为 0.25μg/ml、0.76μg/ml。平均擦拭回收率大于72.17%。结论：用紫外分光光度法测定对乙酰氨基酚的残留灵敏度高，是一种可靠的质量控制手段。
【关键词】 清洁残留；对乙酰氨基酚；紫外分光光度
【中图分类号】R9 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2015）20-0330-03
在药品生产的每道序完成后，对制药设备进行清洗是防止药品污染和交叉污染的必要手段。企业在实际药品生产中很少采用专用生产线，大多数共同采用一条生产线，因此在更换产品时均有可能留有上一批次药品活性的微量残留物，为了最大限度避免上一批次药品影响下一批次药品，根据《制药工艺验证实施手册》的“清洁验证”、评估了该生产线最难清洗的残留物为对乙酰氨基酚，确定标准计算单位面积的残留物限度不大于10PPM，即10μg/ml，擦拭残留物限度不大于4.7μg／cm?，即5.87μg/ml，通过对紫外分光光度法测定对乙酰氨基酚残留物的分析结论的准确性与完整性，是验证的目的。方法的验证是保证验证结论完整可靠的关键
1.仪器与试药
1.1 仪器
TU-1901型双光束紫外-可见分光光度计（北京谱析通用仪器有限责任公司）。TG332A上海天平仪器厂电子天平。
1.2 试剂
氢氧化钠（西安化学试剂有限公司），对乙酰氨基酚标准品（中国食品药品鉴定研究院），批号1009-201305
2.方法与结果
2.1 检测波长的选择
取对乙酰氨基酚标准品约10mg（按纯品计），精密称定，用0.4mol/LNaOH制成10μg/ml的溶液。照紫外分光光度法在210nm～400nm波长范围内扫描，实验结果表明，最大吸收波长为257nm。紫外线吸收图谱见图1
2.2 线性关系与范围
2.2.1验证浓度范围的确定 根据确定的擦拭残留物限度（不大于4.7μg／cm?），验证浓度范围确定为被测残留物限度的50～150%，得出验证浓度范围为1ug/ml～8ug/ml。
2.2.2标准曲线溶液的制备 精密称取乙酰氨基酚对照品约10㎎，置100ml，加 0.1mol/LNaOH溶液稀释至刻度，摇匀，得0.1㎎/ml的标准液，为备用溶液。精密量取备用溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0ml,分别置100ml容量瓶中加 0.1mol/LNaOH溶液稀释至刻度，摇匀，即得每1ml约含1ug、2ug、3ug、4ug、5ug、6ug、7ug、8.0 ug的溶液。
2.2.3标准曲线溶液的绘制 分别取上述8个不同浓度的液体，用1吸收池在波长257nm处测定各浓度的吸光度（A）。以A为纵坐标，浓度（Cμg/ml）为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程Y257＝0.1062X＋0.0081，R2＝0.9984。标准曲线见图2 结果，对乙酰氨基酚的检测浓度1ug/ml～8ug/ml范围，存在良好的线性关系，符合比耳定律。
2.3 精密度
精密量取标准溶液10ml，于6个100ml容量瓶中，加 0.1mol/LNaOH溶液稀释至刻度，摇匀，分别测定吸光度，实测值分别为4.414、4.430、4.422、4.438、4.422ug/ml，其精密度（RSD）为0.3%，接受标准≤5.9%，表明精密度良好。
2.4 准确度
精密量取标准溶液2 ml、3 ml、5ml，于9个100ml容量瓶中（每个浓度配制3个试验样），用模拟清洁后的空白水配制成的0.1mol/LNaOH溶液稀释到刻度，摇匀。在波长257nm处测定上述配制的各浓度溶液的吸光度（A）结果见表1。
从以上测得的结果看，准确度良好。
根据线性回归方程Y257＝0.1062X＋0.0081，计算出检测限和定量限。
2.5 检测限与定量线的确定
检测限和定量限：检测限是指在确定条件下，试样中被测物能被检测出的最小量，定量限是在确定条件下，试样中被测物能被准确测定的最小量，其测定结果具有一定的准确度和精密度。通常检测限是指信噪比为3:1时被分析物的浓度；定量限是指信噪比为10:1时被分析物的浓度。
通过计算得出：检测限 0.25μg/ml，定量限 0.76μg/ml。表明，检测限与定量限都低于对乙酰氨基酚实际残留限度。
2.6 擦拭取样回收率验证
2.6.1对乙酰氨基酚溶液的制备 根据《制药工艺验证实施手册》“清洁验证”
计算出擦拭残留物限度不大于4.7μg／cm?，按擦拭回收率50%计，擦拭回收的溶液的浓度即5.87μg/ml，模拟擦拭回收溶液最低浓度5ug/ml.
精密量取标准溶液2.0、4.0、6.0ml 置100ml容量瓶中，加0.1mol/LNaOH稀释至刻度，制成每ml 2、4、6μg的溶液。精密量取1ml，均匀分布于已清洁的设备5cm×5cm区域上，用0.1mol/NaOH棉签，按擦拭取样规程擦拭取样，每擦一个方块换一根擦拭棉签。擦拭完毕后将棉签分别放入装有10ml 0.1mol/LNaOH溶液的试管中，用洗脱液进行相关试验检测，以棉签空白样为空白，在257nm波长处测定供试溶液的吸收度。3个浓度的溶液同一种方法操作分别取3个样，共9个样品，计算回收率，可接受标准≥50%。取最低值72.17%，即为棉签擦拭法的回收率。见表2。
3.讨论
（1）波长在210nm～400nm范围内，测得对乙酰氨基酚在最257nm处有最大吸收。因此将257作为检测波长。
（2）在1ug/ml～8ug/ml范围有较好线性关系，根据《制药工艺验证实施手册》“清洁验证”，计算出擦拭回收溶液最低浓度为5ug/ml。在线性浓度范围内，表明此方法能有效监控生产过程中已清洁的设备残留有上一批带有活性物质的残留。
（3）检测限与定量限0.25μg/ml、0.76μg/ml，都低于对乙酰氨基酚实际残留限度。
以上实验表明，用紫外分光光度法测定对乙酰氨基酚的残留物灵敏度高，是一种可靠的质量控制手段。
【参考文献】
[1]《药品生产质量管理规范》（2010），国家食品药品监督管理局.
[2]《制药工艺验证实施手册》（2012），化学工业出版社.
[3]《中国药典》2010版二部，国家要点委员会编，中国医药科技出版社.
论文作者:黄燕,汪其其
论文发表刊物:《医药前沿》2015年第20期供稿
论文发表时间:2015/10/9
标签：溶液论文; 乙酰论文; 氨基论文; 浓度论文; 残留物论文; 光度论文; 波长论文; 《医药前沿》2015年第20期供稿论文;