1.宁波美康生物科技股份有限公司 浙江宁波 315100；2.公安海警学院 浙江宁波 315801
【摘 要】 目的利用CLSI EP 10-A2文件初步评价乙醇检测光度计的性能。方法按照美国临床实验室标准化协会（CLSI）颁布的EP10-A2文件，连续5天用乙醇检测光度计按特定顺序测定高、中、低浓度乙醇样本，计算测定结果的偏差、总不精密度，对截距、斜率、非线性、携带污染和漂移进行多元回归分析。结果低、中、高浓度乙醇样本偏差分别为0.1，0.4 和 -0.1 mg/dL；总不精密度分别为3.1%，1.0%和1.0%；截距、斜率、非线性、携带污染、漂移分别为0.300、0.998、0.059、0.000、-0.042，其t值分别为0.532、-0.108、-0.003、-0.098、0.214，差异均无统计学意义（P>0.01）。结论乙醇检测光度计准确度、精密度良好，线性良好，携带污染率较低，稳定性好，能满足乙醇检测的应用要求。
【关键词】乙醇检测光度计；EP 10-A2；初步评价
Preliminary evaluation of Alcohol detection spectrophotometer by CLSI EP10-A2 Document
WO Yanbo1，YAO Xufei2，WANG Ke2
（1.Ningbo Medicalsystem Biotechnology Co.，Ltd，Zhejiang Ningbo，315100；
2. China Maritime Police Academy，Zhejiang Ningbo，315801）
[Abstract] Objective Preliminary evaluation of Alcohol detection spectrophotometer for clinical application performance using Clinical and Laboratory Standards Institute（CLSI）EP 10-A2. Methods According to the CLSI Document EP10-A2，specimens of alcohol at high，medium and low concentrations were measured continuously at a specific order for 5 days by Alcohol detection spectrophotometer. The bias and the total imprecision were calculated，the intercept，slope rate，non linearity，carryover contamination and drift were analyzed by multiple regression analysis. Results The bias of the low，medium and high specimens were 0.1，0.4 and -0.1 mg/dL respectively，the total imprecision of the three concentrations were 3.1％，1.0％ and 1.0％ respectively，the intercept，slope rate，non linearity，carryover contamination and drift was 0.300，0.998，0.059，0.000，-0.042 respectively，the t value was 0.532，-0.108，-0.003，-0.098，0.214 respectively，which did not show significant difference（P>0.01）. Conclusion Alcohol detection spectrophotometer had fine bias，fine precision，fine linearity，low carryover contamination and good stability，can meet clinical application requirement.
Key words：Alcohol detection spectrophotometer；EP 10-A2；Preliminary evaluation
【中图分类号】TP216【文献标志码】A【文章编号】2096-0867（2016）-06-303-02
2011年5月1日《中华人民共和国刑法修正案（八）》正式实施，醉酒驾驶作为危险驾驶罪被追究驾驶人的刑事责任[1]。目前我国对醉酒驾驶的现场检测主要使用呼气式乙醇测定仪，结论不具备法律效力[2，3]。许多国家都以人体血液中的乙醇浓度作为交通肇事案件最终的仲裁依据。本文参照美国临床实验室标准化协会（CLSI）2002年10月颁布的《定量临床检验方法的初步评价：批准指南EP10-A2》文件，对课题组研制的全自动智能型便携式乙醇检测光度计（POCT分析仪）及配套乙醇检测干式微管生物芯片的偏差、总不精密度、截距、斜率、非线性、携带污染和漂移进行了分析，对该仪器及配套试剂的适用性进行了评估[4，5]。
1 分析样本与方法
1.1 分析样本：为购自宁波美康生物科技股份有限公司产的定值质控，低值样本（批号：20150708），靶值为49.0 mg/dL，高值样本（批号：20150708），靶值为200.0 mg/dL。将上述高、低值样本以1：1比例混合，得到中值样本，靶值为 124.5 mg/dL。
1.2 样本测定：根据EP 10- A2文件，连续测定5天，每天按中、高、低、中、中、低、低、高、高、中的顺序测定各浓度样本。每批测定为连续测定，第1个中值仅作为测定起始用，不纳入统计，其余9个数据若任何1个不及格，则该批数据都弃掉，重新测定。
1.3 绘图，数据处理：作偏倚图，以标准品的靶值（X）作为横坐标、实测值与靶值的差值（Y-X）为纵坐标作图；作散点图，以标准品的靶值（X）作为横坐标、实测值（Y）为纵坐标作图；观察有无离群点和线性情况。偏差允许范围设定为靶值的±5%，总不精密度的允许范围设定为5%。
1.4 统计学分析采用Microsoft Excel统计软件进行数据处理，计算偏差、总不精密度，对截距、斜率、非线性、携带污染、漂移作回归分析。其校正回归值作t检验，当t>4.6或t<-4.6时，P<0.01，差异有统计学意义。
2 结果
2.1 绘图、目测离群点和线性
乙醇检测光度计检测结果偏倚图和散点图见图1、2，目测各浓度样本测定结果无离群点，精密度良好，实测值与靶值间线性良好。
注：当t>4.6或t<-4.6时，P<0.01，差异有统计学显著性意义
3 讨论
乙醇的成瘾性和滥用是当今世界范围内最严重的社会经济和公共卫生问题之一，近年来，酒后引起的刑事案件和交通事故案不断上升，2011年5月1日《中华人民共和国刑法修正案（八）》正式实施，醉酒驾驶作为危险驾驶罪被追究驾驶人的刑事责任[1]。目前我国对醉酒驾驶的现场检测主要使用呼气式乙醇测定仪，由于该法是根据驾驶员呼出的气体来测量的，呼气压力的大小直接影响测量结果，并且其还易受温度、湿度、吹气量等因素影响，准确度和稳定性不高。此外，呼出气体乙醇含量探测器是靠空气中乙醇标准气体来校准的，乙醇在常温下是液体且沸点较高，配制乙醇标准气体常会因其挥发或汽化不完全而导致均匀性不理想，使得呼出气体乙醇含量探测器的重复性难以保证，两次检定结果会相差很大，因此呼气式乙醇测定仪只可作为可疑饮酒者的预备检验，结论不具备法律效力[2，3]。许多国家都以人体血液中的乙醇浓度作为交通肇事案件最终的仲裁依据。
血液中乙醇定量测定的参考方法为气相色谱法，虽然该法可以准确定量，但是存在着购买仪器价格昂贵，检测成本高，操作步骤复杂，需专门培训，无法在案发现场快速检测等缺点[2，3]。而乙醇酶法分析法中乙醇脱氢酶对乙醇是相对特异的，不会与甲醇、丙酮或异丙醇等起催化反应，因此准确度和精密度较高，并且其检测速度快，与气相色谱法相关性好，故该法具有很好的应用前景[6]。目前应用大型生化分析仪对乙醇进行检测，大致包括以下几个步骤：由专业人士进行抽血、血液离心、取出血清或血浆、添加试剂进行检测、数据解读与分析。但大型生化分析仪体积庞大、价格昂贵、需足够样品才能上机、报告回复时间长、需专业人员操作、需定期校正并建立标准曲线等缺点，无法满足交警司法部门查禁酒后驾车/船第一线的检测需要。
微流控芯片技术是21世纪最为重要的前沿技术之一，它把生物和化学等领域中所涉及的样品制备、反应、分离、检测及细胞培养、分选、裂解等基本操作单元集成到一块几十平方厘米（甚至更小）的芯片上，由微通道形成网络，以可控流体贯穿整个系统，是用以取代常规生物或化学实验室的各种功能的一种技术[7-9]。微流控芯片系统微型化、集成化和自动化的特点使得它很适合应用于现场和个体分析。利用微流控芯片完成样品的前处理，使以往实验室繁复之全血定量、血球血清分离、血清稀释等步骤于芯片在线自动化作业完成，即可达到无需对样本进行前处理的需求[10]。
本课题组以乙醇酶法分析法为基础，结合微流控芯片技术开发了一款自动化程度高，灵敏度高，特异性好，标本采集后无需经过前处理、即时获得检验结果的全自动智能型便携式乙醇检测光度计（POCT分析仪）及配套乙醇检测干式微管生物芯片，可实现人体血液中的乙醇浓度案发现场快速检测，非常适用于交警司法部门查禁酒后驾车/船第一线的检测需要。我们参照EP10-A2对该仪器及配套试剂进行了初步评估，以探讨其在临床的应用价值，偏差评价结果显示各项目低、中、高浓度的绝对偏差均在允许偏差范围之内，故其偏差可接受，并且多元回归分析结果亦显示其斜率、截距的t值均在-4.6~4.6之间，其差异均无显著统计学意义，说明本课题组开发的乙醇检测光度计测定的准确度较好。对精密度分析结果显示，低、中、高浓度的总不精密度均小于允许总不精密度，说明其精密度也符合临床应用要求。多元回归分析结果显示携带污染、非线性的差异均无统计学意义，说明乙醇检测光度计线性能力良好，携带污染率低。因此，从评估结果可见本课题组开发的乙醇检测光度计准确度、精密度良好，线性良好，携带污染率较低，稳定性好，能初步满足乙醇检测的应用要求。但由于EP10-A2文件的评价方法建立于初步评价的基础之上，忽略了很多影响因素，因此该仪器及配套试剂的性能还有待于应用CLSI的其他文件进行进一步评价[11，12]。
参考文献：
[1] 张欣婷. 血液酒精浓度对驾驶行为的影响研究 [J].交通标准化，2014，42（23）：35-40.
[2] 蔡晓燕. 呼出气体酒精含量探测器检定、常见故障的分析与维护[J].计量与测试技术，2015，42（5）：8-9.
[3] 王冬梅；胡俊；傅冬梅. 两种不同方法同步检测血清中乙醇浓度的对比分析 [J].中国法医学杂志，2013，28（5）：403-405.
[4] NCCLS．Preliminary Evaluation of Quantitative Clinical Laboratory Methods [S]．Approved Guideline EP1 0-A2．2002．
[5] 程明刚，刘香萍，蔡朝民，等．应用NCCLS EPI0-A2文件初步评价定量钙测定的性能[J]．热带医学杂志，2010，10（11）：1289-1292．
[6] 王珂. 改良酶法乙醇测定试剂的研制及性能考察[J].中国人民公安大学学报（自然科学版），2013，1（1）：10-13.
[7] 林炳承. 微流控芯片实验室[M]. 科学出版社，2006.
[8] Karimi A，，Yazdi S，，Ardekani A M. Hydrodynamic mechanisms of cell and particle trapping in microfluidics[J]. Biomicrofluidics，2013，7（2）：21501-21501.
[9] Das T，Chakraborty S. Biomicrofluidics：Recent trends and future challenges[J]. Sadhana，2009，34（4）：573-590.
[10] 戴永辉，陈坦，王战会. 一种离心式微流控生化分析芯片[J]. 集成技术，2015（3）：86-92.
[11] 刘怀平，刘树业．实验室认可中封闭检测系统的性能验证及评价[J]．现代预防医学，2011，38（19）：3981- 3984．
[12] 张葵．定量检测系统方法学性能验证实验的基本方法[J]．临床检验杂志，2009，27（5）：321-323．
作者简介：沃燕波（1980—）女，宁波美康生物科技股份有限公司高级工程师，医学博士，从事体外诊断试剂开发研究，E-mail：peggywyb@yahoo.com.cn。
通讯作者：王珂（1980—），男，汉族，山东人，公安海警学院训练部副 教授，硕士，研究方向：刑事侦查、刑事技术。联系电话：15258155151.邮箱：daxing502@163.com.
基金项目：公安部技术研究计划项目（No 2015JSYJC023）
论文作者:沃燕波,王珂
论文发表刊物:《系统医学》2016年第2卷第6期
论文发表时间:2016/6/20
标签：乙醇论文; 精密度论文; 光度计论文; 样本论文; 偏差论文; 斜率论文; 浓度论文; 《系统医学》2016年第2卷第6期论文;