谢孝川1 刘清松1 敬敏1 李季2
（1内江市第一人民医院病理科 四川 内江 641000）
（2内江市第一人民医院胸外科 四川 内江 641000）
【摘要】目的：探讨LncRNA RP11-401E9.3在小细胞肺癌（small cell lung cancer,SCLC）患者中的表达及意义。方法：收集96例SCLC组织、30例癌旁组织及40例正常肺组织，采用实时荧光定量PCR法检测LncRNA RP11-401E9.3的表达，分析LncRNA RP11-401E9.3表达与SCLC患者预后的关系。结果：LncRNA RP11-401E9.3在SCLC组织中的表达水平明显高于癌旁组织及正常肺组织（P值均＜0.001）。在化疗耐药患者中LncRNA RP11-401E9.3的表达明显高于化疗敏感者（P＜0.05）；LncRNA RP11-401E9.3表达与患者的性别、年龄无关，而与SCLC患者的疾病分期、淋巴结转移、远处转移、化疗耐药相关（P值均＜0.05）；高表达LncRNA RP11-401E9.3患者的总生存时间及无进展生存时间均较低表达者明显缩短（P值均＜0.001）。单因素及多因素分析发现LncRNA RP11-401E9.3表达、疾病分期、远处转移是SCLC患者独立的预后因素（P值均＜0.05）。结论：LncRNA RP11-401E9.3可能是SCLC患者潜在的化疗敏感性及预后评估生物标志物。
【关键词】小细胞肺癌；RNA；长链非编码；预后
【中图分类号】R734.2 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2018）20-0052-03
The relationship between LncRNA RP11-401E9.3 expression with prognosis and chemotherapy resistance of small cell lung cancer
【Abstract】Objective To investigate the expression of long non-coding RNA RP11-401E9.3 (LncRNA RP11-401E9.3) in small cell lung cancer (SCLC) tissues and its clinical significance. Methods The expression of LncRNA RP11-401E9.3 in SCLC tissues and 30cases para-cancerous tissues and 40 cases normal lung tissues was detected by real-time fluorescent quantitative PCR. The relationship between the expression of LncRNA RP11-401E9.3 and clinicalpathological characteristics and prognosis in patients with SCLC was analyzed. Results The expression level of LncRNA RP11-401E9.3 in SCLC tissues was higher than that in para-cancerous tissues and normal lung tissues (all P<0.001). The expression of LncRNA RP11-401E9.3 was significantly increased in chemoresistance patients than that of chemosensitive patients (P<0.05).LncRNA RP11-401E9.3 expression was positively correlated with disease stage, lymph node metastasis, distant metastasis, chemosensitivity (all P<0.05). The overall survival time and progression-free survival time in patients which high expression level of LncRNA RP11-401E9.3 were shorter than those which low expression level of LncRNA RP11-401E9.3 (all P<0.001). LncRNA RP11-401E9.3 expression, disease stage, distant metastasis and recurrence were independent prognostic features (all P<0.05).Conclusion LncRNA RP11-401E9.3 is involved in the development of SCLC, and may be used as a molecular marker for the evaluate prognosis of SCLC.
【Key words】Small cell lung carcinoma; RNA; Long non-coding; Prognosis
小细胞肺癌（small cell lung cancer，SCLC）占所有肺癌的大约15%，是目前临床治疗中棘手的肿瘤之一[1]。与非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）在靶向治疗方面的飞速发展相比，SCLC发生发展的潜在机制仍未可知，缺乏可用于临床靶向治疗的驱动基因，现有治疗手段仍然以传统的化疗和放疗为主[2]。由于SCLC倍增时间短，虽然其对于化疗敏感，但很快就会出现复发转移，导致治疗失败和死亡[3]。因此，化疗耐药的导致小细胞肺癌治疗失败的重要原因，其具体机制目前尚未完全阐明，可能涉及众多耐药相关基因的调控异常。
LncRNA是指一类长度超过200个核苷酸的RNA分子的总称，是当今分子生物学研究的热点之一[4]。虽然在人类基因组中已经发现了一些LncRNA，但关于其对基因组的调控及具体机制尚不清楚。前期预实验通过LncRNA芯片发现长链非编码RNA AC009336.24在SCLC耐药细胞株中的表达较化疗敏感细胞株明显增高，提示LncRNA AC009336.24可能与SCLC的耐药相关，然而关于LncRNA AC009336.24在SCLC中的表达及意义目前国内外尚未见相关报道。本研究应用实时荧光定量PCR法检测LncRNA AC009336.24在SCLC组织中的表达，分析其表达与患者临床病理特征及化疗敏感性的关系。
1.资料与方法
1.1 病例资料
收集于2012年06月至2017年06月在我院肿瘤科、胸外科及呼吸内科进行手术或穿刺活检或支气管镜活检的SCLC组织标本96例，其中30例手术切除的SCLC的癌旁组织（距离癌组织≥2cm），66例未进行手术治疗的患者的癌组织取自支气管镜或CT引导下的穿刺活检标本。所有患者的病例资料完整，手术前均未接受过放化疗。同期收集40例因各种原因导致肺外伤的正常肺组织标本作为对照组。96例患者均接受以铂类为主的化疗，首先给予一线化疗方案（依托泊苷＋铂类）化疗；出现耐药后，给予二线化疗方案（伊立替康＋铂类）。其中化疗敏感者（化疗4～5个周期后肿瘤缩小30%以上或消失）42例，化疗耐药者（化疗4～5个周期后肿瘤增大30%或以上，或出现新的转移灶）54例；其中54例耐药者给予二线化疗方案治疗。本研究经我院伦理委员会批准，所有研究对象均签署知情同意书。
1.2 随访
所有患者出院后都进行了随访，随访时间为3～58个月，中位随访时间为33个月，随访截止日期为2018年2月1日。至随访结束，存活30例，死亡66例，无失访病例。
1.3 实时荧光定量PCR法检测SCLC组织中LncRNA RP11-401E9.3的表达水平
采用TRIZOL提取总RNA。将提取的总RNA，按如下条件进行逆转录反应：37℃，15min的逆转录反应，98℃，5min的酶失活反应，反转录产物于-20℃保存。Real-time PCR采用2*SYBR Green PCR Master Mix，取适量cDNA 作为摸板进行扩增，以GAPDH作为内参照，以 RQ=2-ΔΔCt 的方法进行分析。
1.4 统计学方法
采用SPSS13.0统计软件分析数据。计量资料采用One way ANOVA或t检验进行分析，采用均数±标准差表示。采用Chi-Square检验分析LncRNA AC010145.4与各临床病理参数之间的关系；采用Kaplan-Meier法分析患者生存时间的关系，单因素及多因素分析影响SCLC预后的因素。以P＜0.05为差异有统计学意义。
2.结果
2.1 LncRNA RP11-401E9.3在SCLC组织中高表达
实时荧光定量PCR检测LncRNA RP11-401E9.3在96例SCLC组织、30例癌旁组织及40例正常肺组织中LncRNA RP11-401E9.3的表达，结果提示， LncRNA RP11-401E9.3在SCLC组织中的平均表达水平（9.678±1.730）显著高于癌旁组织（1.570±0.690）及正常肺组织（1.475±0.450），差异有统计学意义（F=30.10，P＜0.001）。进一步分析发现LncRNA RP11-401E9.3在54例耐药患者中的平均表达（6.902±0.187）明显高于化疗敏感者（12.360±0.221，n=42），差异具有统计学意义（t=17.490，P＜0.001）。
2.2 LncRNA RP11-401E9.3的表达与SCLC患者临床病理特征的关系
患者的基本资料见表1。根据LncRNA A RP11-401E9.3平均表达水平（9.678）将SCLC患者分为LncRNA RP11-401E9.3高表达组（LncRNA RP11-401E9.3≥9.678）50例及低表达组（LncRNA RP11-401E9.3＜9.678）46例。进一步分析LncRNA RP11-401E9.3表达与患者临床病理特征的关系，结果发现，LncRNA RP11-401E9.3表达与患者的年龄、性别（P值均＞0.05）无关；而与疾病分期、淋巴及远处转移、化疗敏感性及患者的生存状态明显相关（P值均＜0.05，见表1）。
。
2.3 SCLC患者生存分析
采用Kaplan-Meier法分析发现LncRNA RP11-401E9.3高表达患者的无进展生存时间[（11.76±1.03）个月]短于低表达者[（21.89±1.64）个月]，差异有统计学意义（χ2=34.12，P＜0.00）；LncRNA RP11-401E9.3高表达患者的总生存时间[（36.64±1.75）个月]短于低表达者[（23.68±1.27）个月]，差异有统计学意义（χ2=30.72，P＜0.001）。
2.4 单因素及多因素分析影响SCLC患者预后的因素
单因素及多因素分析结果显示，疾病分期、远处转移、LncRNA RP11-401E9.3表达是SCLC患者预后的独立影响因素（P值均＜0.05，见表2）。
3.讨论
小细胞肺癌是一种有着高死亡率的侵袭性恶性肿瘤[5]。由于缺乏有效的针对SCLC的靶向药物，目前仍以传统的化疗治疗及放射治疗为主，但疗效差，极易出现复发和转移[6]。因此，临床急需寻找新的生物标志物去早期诊断及预后评估小细胞肺癌。
近年来的研究发现,LncRNA在多种类型肿瘤细胞中表达，有望成为新的肿瘤标志物和肿瘤治疗靶点[7]。研究发现，LncRNA HOTTIP通过富集miR-216a增加BCL-2的表达，诱导小细胞肺癌的化疗抵抗[8]。LncRNA HOTTIP的表达与小细胞肺癌的疾病进展和预后相关[9]。LncRNA HOTAIR通过调节HOXA1的甲基化影响小细胞肺癌的化疗耐药[10]。LncRNA TUG1通过EZH2调节LIMK2b的表达影响小细胞肺癌的细胞增殖和化疗药物耐药[11]。本研究发现SCLC组织中LncRNA RP11-401E9.3的表达水平明显高于癌旁组织及正常肺组织。LncRNA RP11-401E9.3在化疗耐药患者中的表达明显高于化疗敏感者；LncRNA RP11-401E9.3表达与SCLC患者的性别、年龄无关，而与疾病分期、淋巴结转移、远处转移、化疗耐药相关。高表达LncRNA RP11-401E9.3患者的总生存时间及无进展生存时间均短于低表达者。LncRNA RP11-401E9.3表达是SCLC患者独立的预后因素。以上研究结果提示，LncRNA RP11-401E9.3参与调节SCLC的发生和发展，可能作为潜在的SCLC患者疗效及预后评估的生物标志物。然而，影响SCLC预后的分子机制复杂，LncRNA RP11-401E9.3调节SCLC患者预后的具体作用机制及参与的信号通路，尚需进一步研究。
【参考文献】
[1] Gao, H., et al.Identification of DJ-1 as a contributor to multidrug resistance in human small-cell lung cancer using proteomic analysis[J].Int J Exp Pathol,2017;98（2):67-74.
[2] Del Re, M., et al.Resistance to Tyrosine Kinase Inhibitors in Non-Small Cell Lung Cancer: The Role of Cancer Stem Cells[J].2018.
[3] Peng, J., et al.EPHA3 regulates the multidrug resistance of small cell lung cancer via the PI3K/BMX/STAT3 signaling pathway[J].Tumour Biol,2016;37（9):11959-11971.
[4] Meng, M., et al.Long non-coding RNA ENST00462717 suppresses the proliferation, survival, and migration by inhibiting MDM2/MAPK pathway in glioma[J].Biochem Biophys Res Commun,2017.
[5] Tao, H., et al.The impact of coexisting lung diseases on outcomes in patients with pathological Stage I non-small-cell lung cancer[J].Interact Cardiovasc Thorac Surg,2018.
[6] Kim, H., et al.Prognostic Value of Pre- and Post-Treatment FDG PET/CT Parameters in Small Cell Lung Cancer Patients[J].Nucl Med Mol Imaging,2018;52（1):31-38.
[7] Qi, X., et al.Long non-coding RNA SNHG14 promotes microglia activation by regulating miR-145-5p/PLA2G4A in cerebral infarction[J].Neuroscience,2017.
[8] Sun, Y., et al.Long non-coding RNA HOTTIP promotes BCL-2 expression and induces chemoresistance in small cell lung cancer by sponging miR-216a[J].Cell Death Dis,2018;9（2):85.
[9] Sun, Y., et al.A long non-coding RNA HOTTIP expression is associated with disease progression and predicts outcome in small cell lung cancer patients[J].Mol Cancer,2017;16（1):162.
[10] Fang, S., et al.Long noncoding RNA-HOTAIR affects chemoresistance by regulating HOXA1 methylation in small cell lung cancer cells[J].Lab Invest,2016;96（1):60-8.
[11] Niu, Y., et al.Long non-coding RNA TUG1 is involved in cell growth and chemoresistance of small cell lung cancer by regulating LIMK2b via EZH2[J].Mol Cancer,2017;16（1):5.
论文作者:谢孝川1,刘清松1,敬敏1,李季2
论文发表刊物:《医药前沿》2018年7月第20期
论文发表时间:2018/7/27
标签：患者论文; 组织论文; 肺癌论文; 细胞论文; 因素论文; 高于论文; 统计学论文; 《医药前沿》2018年7月第20期论文;