佳木斯大学附属第一医院 黑龙江佳木斯 154003
关键词：骨骼肌放电检测；骨骼肌电压峰值；复合肥剂
本文进一步探讨25%、30%、35%浓度的复合肥剂对实验大鼠骨骼肌放电影响。实验表明一定浓度的复合肥剂对实验大鼠骨骼肌放电可产生一定影响〔1〕，这就引发我们进一步探讨适当增加复合肥剂浓度检测大鼠骨骼肌放电现象，探讨复合肥剂与骨骼肌放电关系。结果：与20%复合肥剂比较，随着复合肥剂浓度适量增加（25%，30%，35%），实验组大鼠前肢或后肢出现不同程度抽搐现象，有肌肉痉挛存在，检测出骨骼肌异常放电。结论：复合肥剂浓度适量增加时，可致大鼠骨骼肌异常放电。
1.材料与方法
1.1.实验动物
选择健康Wistar大鼠，体重（221±2）g，没有外伤，行动灵活，进食无碍。实验动物由佳木斯大学实验动物中心提供。
1.2.主要试剂及检测仪器
环氧树脂812＃为美国公司（Structure Probe.Inc.）生产；锇酸试剂（四氧化锇）为英国公司生产（Johnson Matthey Chemicals Ltd.）；导介质Ten20T M 为美国产（CO 80011 USA.）；醋酸双氧铀、50%戊二醛、丙酮、乙醚及同心电极等为国产；复合肥为国产市售，市场随机采购；多功能诱发电位仪为丹麦制造（Medtronic Function Diagnostics A\S DK-2740 Skevlunde.Denmark型）；透射电子显微镜日本产（JEO-1200EX型）；超薄切片机为上海产（KCQ-2型）。
1.3.方法
将实验动物随机分为4组：对照组（9只）及3个实验组，25%组，30%组及35%组，每组15只大鼠。将对照组动物随机分配到3个实验组，混养（每组3只，有明显标记且不易脱落咬坏）。3个实验组大鼠分别施加不同浓度复合肥剂，经口腔灌食1ml，每周1次，浓度分别设为25%，30%，35%。对照组及实验组动物均在相同条件下常规饲养。
采用多点采集技术检测放电〔6〕。实验阳性表现以肉眼观察到大鼠肢体出现痉挛为标准（跛行、抬腿），可取出检测。25%实验组有5只为阳性，30%组7只为阳性，35%组有4只疑为阳性，对照组动物未见痉挛现象。
麻醉，将有阳性反应动物放置玻璃钟罩内同时放入乙醚棉球，麻醉标准以反抗能力降低为准。达到“麻醉标准”后对实验阳性大鼠肢体固定，痉挛肢进行皮肤处理、置接地电极；同心电极插入区域进行去毛、去脂处理；调正仪器，记录大鼠骨骼肌放电现象。
超微结构检查：肌电检测后，在每组阳性大鼠中随机取出2只，进行组织学超微结构检查。方法：在电极检测区取出骨骼肌组织，3%戊二醛固定液前固定，1%锇酸固定液后固定，丙酮梯度脱水，环氧树脂812＃包埋，醋酸双氧铀染色，超薄切片，透射电镜观察、分析。
2.结果：
对照组实验动物骨骼肌肌电呈静息电位；实验呈阳性现象大鼠均检测出放电波群，波峰高低不一，波群密度也有差异。施加25%复合肥剂实验组，采集3组检测波形，电压峰值较高、时长及波形有相似之处，说明肌肉有放电现象且比较规律（见图1）；施加30%复合肥剂实验组，采集4组检测波形，前2组波形电压峰值较低，时长有相似之处，后2组波形电压峰值出现明显增大，而时长确一致（见图2）；施加35%复合肥剂实验组，肌肉放电现象不明显，偶有波形，电压波幅很小，是否是异常放电不能确定，疑为噪声（图略）。电镜（TEM）检测结果：对照组及实验组阳性大鼠骨骼肌超微结构未见异常，肌丝排列紧密结构清晰，线粒体脂质双层膜、A带清晰可见（图略）。
图2 30%复合肥剂实验组，前2组波形与后2组波形电压峰值差距大，时长相似
适量增加复合肥剂浓度可促使大鼠骨骼肌出现异常放电，从波形看，电压峰值高低不一，波群密度也略有差异；对实验大鼠骨骼肌超微结构改变没有影响。
3.讨论
根据文献得知，一定浓度的复合肥剂对实验大鼠部分器官功能存在一定影响〔1-5〕，本文探讨不同浓度复合肥剂对实验大鼠骨骼肌肉放电影响。我们设计了3个实验条件，分别是25%，30%，35%复合肥剂，每个浓度复合肥剂设定一个实验组。施加实验条件后，40天左右出现不同程度的运动障碍，跛行或提腿，反应出动物骨骼肌出现一定程度肌肉痉挛，但35%实验组并未出现预想结果，即痉挛加剧、阳性反应大鼠数量大增。从阳性动物数量看第一、第二组实验组，即25%，30%组阳性反应明显且数量略高，按理论推测，第三组，即35%组，浓度越高，阳性率也应随之提高，实验结果却不是。我们尚不清楚原因。
三磷肌醇（IP3，细胞膜信使物）影响肌浆Ca2+ 释放，肌肉收缩与舒张与肌浆Ca2+ 浓度高、低相关，是否是复合肥剂影响了IP3功能，进而影响了肌肉收缩，产生异常放电，探究这一复杂机理，需要在分子水平研究。从照片可以看出，25%组，3个波形电压峰值、时长接近，这说明25%的浓度引发的放电比较规律；30%组中，前2组波形相似，后2组波形也相似，但电压峰值与前2组比较，差异明显，与25%组波形比较，也有明显差异。图2显示，动物骨骼肌放电强弱不规律。从机理角度讲，复合肥剂如何影响三磷肌醇，三磷肌醇又如何影响肌浆Ca2+ 释放进而到肌肉收缩，这条作用机理很复杂，我们目前无法探究。对比2张图片，我们可以初步推断，经口腔途径施加实验条件，30%浓度的复合肥剂应该是导致实验动物骨骼肌产生放电现象最适浓度。
存在的问题，样本数量少，有一定局限性。从选取阳性动物反应数量看，每组阳性反应大鼠数量未超过半数，这里存在操作误差，因为选取“标准”是以肉眼感觉为主，很可能漏掉“浅阳性”。
参考文献：
[1]张继泽，于翔辉，潘颖华等.大鼠骨骼肌在复合肥作用下肌电现象变化初探.黑龙江医药科学，2012，35（3）：88-89
[2]韩玉泽，陶佳南，侯丽然等.复合肥生殖细胞—次级精母细胞超微结构的影响对雄性大鼠.黑龙江医药科学，2008，31（2）：21-22
[3]韩玉泽，陶佳南，侯丽然等.复合肥对大鼠肝脏细胞超微结构的影响.黑龙江医药科学，2010，33（5）：94—95
[4]于翔辉，陶佳南.大鼠肾小球在复合肥剂作用下超微结构改变.黑龙江医药科学，2011，34（4）：52
[5]陶佳南，于翔辉.在复合肥剂作用下大鼠心肌超微结构改变.黑龙江医药科学，2011，34（5）：43
[6]卢祖能，曾庆杏，余绍晏.实用肌电图学.人民卫生出版社.北京.2002.439
论文作者:张继泽,潘颖华
论文发表刊物:《健康世界》2015年18期
论文发表时间:2016/3/8
标签：骨骼肌论文; 实验组论文; 复合肥论文; 大鼠论文; 阳性论文; 波形论文; 浓度论文; 《健康世界》2015年18期论文;