山东省交通医院 山东济南 250031
摘要：目的：探讨TFF1在胃黏膜保护作用的分子生物学机制及其在胃癌的发生、发展中的作用。方法：选取我院于2012年12月至2014年6月收治的120例行胃镜检查的患者为研究对象，使用Western blotting法检测TFF1在正常胃粘膜中存在的分子形式，采用免疫组化法检测TFF1在胃癌、正常、肠化胃粘膜、不典型增生、食管癌等不同癌变中的表达情况。结果：TFF1在正常胃粘膜中存在的分子形式主要分为单聚体、二聚体和TFF1复合物，其中TFF1复合物的含量最高；TFF1在胃癌旁组织和不典型增生中的表达比正常胃粘膜高，结果具有统计学意义（P<0.05）；肠化旁组织的TFF1表达比正常胃粘膜高，中、高分化胃癌的TFF1表达低于正常胃粘膜，结果均无统计学意义（P＞0.05）；TFF1在低分化胃癌、肠化、食道癌及其旁组织上无TFF1表达。结论：TFF1在正常胃粘膜中主要存在的分子形式是TFF1复合物，对胃粘膜有良好的保护和修复作用，与癌症的抑制和分化机制相关。
关键词：三叶因子；胃黏膜；分子形式；癌变
【 abstract 】 objective：To study the The molecular biology protection mechanism of TFF1 in gastric mucosa and its role in the occurrence and development of gastric cancer. Methods：From December 2012 to June 2014，the 120 patients underwent gastroscopy as the research object in our hospital，using Western blotting method to detect TFF1 in normal gastric mucosa molecules that exist in the form，using immunohistochemical method to detect TFF1 in stomach，normal，intestinal mucosa，atypical hyperplasia and esophageal canceration of expression. Results：TFF1 in normal gastric mucosa exists in the form of molecules are divided into single dimer，dimers and TFF1 compounds，among them the highest content of TFF1 complexes；TFF1 expression in gastric cancer adjacent tissues and atypical hyperplasia is higher than the normal gastric mucosa，the results have statistical significance（P < 0.05）；Intestinal adjacent tissues of TFF1 expression is higher than the normal gastric mucosa，expression of TFF1 and high differentiation of gastric cancer in below the normal gastric mucosa，the results had no statistical significance（P > 0.05）；TFF1 in poorly differentiated cancer of the stomach，intestine，esophageal cancer and its organizational TFF1 expression. Conclusion：TFF1 in normal gastric mucosa TFF1 is the main existence form of molecular compounds，has good protection and restoration effect to gastric mucosa，related to the inhibition of cancer and the differentiation mechanism.
【 key words 】 trilobites factor；Gastric mucosa；The molecular forms；cancerous
三叶因子家族（refoil factor family，TFF）是一群小分子多肽，主要由胃肠道黏液细胞分泌而成[1]。三叶草因子肽（TFF1 TFF2和TFF3）是稳定的分泌蛋白表达在胃肠道（胃粘膜），参与胃肠道粘膜防御和修复。TFF1是一个重要的蛋白质，参与正常窦的分化和幽门胃粘膜，对胃肠道肿瘤抑制基因具有特殊的功能。TFF1作为三叶因子家族中的重要组成，其在正常组织是是对胃体和胃窦粘膜上皮表面细胞的表达。如果胃肠道黏膜被损或发生病变后TFF1就可能整个受损的胃肠粘膜部表达，表达与正常黏膜更明显。本文旨在探讨三叶因子1（TFF1）在正常胃粘膜中存在的分子形式和TFF1与不同癌变的关系，具体操作如下。
1资料与方法
1.1一般资料
选取我院于2012年12月至2014年6月收治的120例行胃镜检查的患者为研究对象，所有患者均因腹胀、腹痛进行胃镜检查，年龄分布在36-72岁之间，平均年龄为（53.9±2.0）岁。其中24例正常胃窦粘膜患者均给予胃镜检查其胃、十二指肠和食管，检查结果显示正常；胃癌和胃癌旁组织患者有26例，肠化胃粘膜患者有30例，食管癌和食管癌旁组织患者有18例，不典型增生患者有22例。所有患者对研究知情，并同意临床资料用于研究分析。
1.2试剂
Western blotting reagents（Amersham 公司），免疫组化用、DAB 显色试剂盒、S-P 超敏试剂盒（福州迈新生物技术开发公司），-mercaptoethanol、SDS、EDTA（Sigma 公司），羊一抗和羊二抗（北京中杉金桥生物技术有限公司），N-甲叉双丙烯酰胺、丙烯酰胺、蛋白测定液（Bio-Rad 公司）。
1.3方法
Western blotting法：把4℃预冷的匀浆缓冲液加到正常胃粘膜组织内，均匀搅拌后提取总蛋白，并确定蛋白浓度。匀浆缓冲液的构成如下：EDTA 1.5mmol/L、Tris 10mmol/L、1%的DTT和PMSF、-mercaptoethanol 20 mmol/L、蔗糖0.2mmol/L。蛋白浓度确定后，在每个样品内提取120克的蛋白质，并分别加入体积一样的加样缓冲液，沸点煮5分钟，使用聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白，凝胶由20%的分离胶和5%的积层胶构成。其中电泳的时间控制在5h左右，分离胶电压控制在120V，积层胶电压控制在70V。在冰浴中使用湿式转移法以电流250mA进行1h30min的电转移。电转移结束后，把NC膜放入紧闭液中封闭半小时，然后在一抗中孵育3小时，进行PBS-T洗膜，再加入14000二抗孵育3小时，再次进行PBS-T洗膜，在暗室中使用ECL曝光显影。
免疫组化法：先使用10％的甲醛固定患者胃癌、正常胃粘膜组织、不典型增生、肠化胃粘膜，然后把常规脱蜡至水，染色先用SP法，再用苏木素第二次染色，最后吹干。
不同胃粘膜病变中TFFI蛋白的表达情况观察：应用链霉菌素一生物素免疫组化染色（S一P）法。抗TFF1蛋白抗体为鼠抗人单克隆抗体（MAB一0231），免疫组化试剂盒（Kit一9710）为福州迈新生物技术开发公司产品。0.01MOL/LTBS（PH7.4）替代一抗作为每次染色的空白对照，参照SP试剂盒（福州迈新公司）说明书进行免疫组化染色。
1.4统计学分析
通过SPSS19.0软件实现了数据库的录入及统计分析，其组构成比较用卡方检验，组间疗效比较用等级资料的秩和检验分析，计量资料以均数标准差表示，P<0.05，表示具有统计学意义。
2.结果
2.1TFF1在正常胃粘膜中存在的分子形式
利用Western blotting进行检测后，TFF1在正常胃粘膜中存在的分子形式主要包括三种，分为单聚体、二聚体和TFF1和某种分子结合而成的复合物（亦称为TFF1复合物）。含量上，TFF1复合物的含量最高，单聚体含量最低，见图1。
3.讨论
三叶因子家族作为一种小分子多肽，主要发现了三种三叶肽，分别为解痉多肤、乳癌相关肤和肠三叶因子[2-3]。这三种三叶肽都是由一种特殊的P结构域组成，三个三叶肽中的二硫键是由38个左右的氨基酸利用6个高度保守的半胱氨酸残基连接而成的，以促使整个肽链折叠后形成三叶状。TFF1是三叶因子家族的主要成员，每个TFF1都是由60个氨基酸构成的，在对保护和修复胃肠道粘膜起着重要作用[5-6]。
当前国内外开始重视胃癌与胃癌癌前病变发生的关系，尤其是胃癌与胃粘膜肠化和不典型增生这两种较为常见的胃癌癌前病变[7]。本研究结果显示，三叶因子在正常胃粘膜中存在的分子形式主要有单聚体、二聚体和TFF1复合物，TFF1复合物的含量是最高的，此后依次是二聚体、单聚体，这说明了三叶因子生物活动性能否激活以及同源二聚体能否形成与其他蛋白质结合形成的低聚体有一定关联。林辉等在对TFF1在正常及损伤胃黏膜中的表达改变研究中表明，TFF1对胃腺癌细胞系AGS的增生有一定的抑制作用，且剂量越大，抑制作用会越强[8]。本研究结果显示，胃癌旁组织、不典型增生、肠化旁组织的胃粘膜阳性表达均高于正常胃粘膜，且胃癌旁组织和不典型增生的表达与正常胃粘膜相比具有统计学意义（P<0.05）；低分化胃癌、肠化食道癌及其旁组织上无TFF1阳性表达。这表明TFF1在人胃癌旁黏膜、消化性溃疡、不典型增生溃疡黏膜中的表达与正常相比有所升高，TFF1与癌症的抑制和分化机制相关。本研究结果与以往文献数据相符[4，9]。
综上所述，三叶因子作为一种肿瘤抑制因子，在正常胃粘膜中存在的主要分子形式是TFF1复合物，二聚体和单聚体也是常见的分子形式，且三叶因子与癌症的抑制和分化机制相关，能很好的保护和修复胃粘膜。
参考文献：
[1] 任建林，罗金燕，卢雅丕，等.三叶因子在正常胃黏膜中存在的分子形式及其与癌变的关系[J].南方医科大学学报.2006，（08）：1234-1236.
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[9] 薛翔，聂时南.肠三叶因子对胃肠道保护作用的研究进展[J].医学研究生学报.2014，（04）：439-443.
作者简介：田文玲，1980年，女，山东省临沂市 山东省交通医院 护师，普外科疾病的临床及护理 250031
王宏，1979年，男，山东省淄博市，主治医师，学士学位，胃肠及肛肠外科各类疾病的内镜、手术及综合治疗。
论文作者:田文玲,王宏
论文发表刊物:《健康世界》2015年28期供稿
论文发表时间:2016/4/7
标签：胃癌论文; 胃粘膜论文; 因子论文; 三叶论文; 复合物论文; 分子论文; 形式论文; 《健康世界》2015年28期供稿论文;