马英花，杨桂清，曹银光
聊城市人民医院，252000
【摘 要】目的：调查分析聊城市神经外科ICU病房109株鲍曼不动杆菌耐药性及β-内酰胺酶基因型。方法：用K-B法测定临床分离的109株鲍曼不动杆菌对13种抗菌药物的耐药性，采用PCR法检测β-内酰胺酶耐药基因型。结果：除IMP外，109株鲍曼不动杆菌对其余13种抗菌药物的耐药率均超过50%，PCR扩增对IMP中介或耐药的53株鲍曼不动杆菌有11株扩增到blaOXA-23，产ESBLs组29株中有5株扩增出blasHv、blaCTX-M-14、blaCTX-M-3，2株出现blaSHV、blaCTX-M-1。结论：聊城市神经外科ICU病房鲍曼不动杆菌多重耐药常见，β-内酰胺酶产生率高，碳青霉烯酶以blaOXA-23型为主，ESBLs、AmpC酶两种β-内酰胺酶基因的多重PCR阳性率均低。
【关键词】鲍曼不动杆菌；β-内酰胺酶；基因型
【中图分类号】R446.5【文献标识码】A【文章编号】2096-0867（2016）-03-049-02
不动杆菌是近年来医院感染中分离率增长非常快的菌种，其中鲍曼不动杆菌最为常见[1]。鲍曼不动杆菌是一类不发酵糖类、氧化酶阴性、没有动力的革兰阴性细菌,是目前引起院内感染的重要的条件致病菌,随着广谱抗生素的广泛使用及介入性操作的使用,鲍曼不动杆菌在非发酵菌中分离率仅次于铜绿假单胞菌而位居第二,而在不动杆菌属中分离率最高。该菌在医院环境中分布很广且可以长期存活，极易造成危重患者的感染，因此常从被感染患者的血、体液、脓液及呼吸道分泌物等标本中分离出，在非发酵菌中感染仅次于假单胞菌[2]。本研究对2009年1月-2014年6月，109株鲍曼不动杆菌耐药的表型和常见的β-内酰胺酶基因类型进行了检测，现报告如下。
1材料与方法
1.1菌株来源：2009年1月-2014年6月间共从聊城市人民医院神经外科ICU住院病人送检标本中分离出鲍曼不动杆菌109株，标本类型包括痰液、创面分泌物、血液、导管等，全部菌株均分别使用法国梅里埃VETEC2COMPACT进行细菌鉴定试验。使用的标准菌株为大肠埃希菌ATCC25922和铜绿假单胞菌ATCC27853。
1.2药敏试验：采用K-B法测定13种抗菌药物的敏感性。本实验采用的方法和判读标准均按照美国CLSI2014的规定进行。
1.3AmpC粗提酶液制备与三维试验：参照文献操作[3]
1.4基因检测：均为PCR法:β-内酰胺酶基因检测本研究共进行了18种β-内酰胺酶、氨基糖苷类修饰酶基因检测，引物和产物见表1；
表1靶基因PCR引物序列
Note：blaADCgene,wholegeneamplificationsequencingfoward primer：5’-ATGCGATTTAAAAAAATTTCTTGTC/T TA-3’, re verseprimer：5’-TTATTTCTTTATTGCATTC-AGCAC AA/GC-3’.PCR-productis1152bp.
2结果
我们对聊城市人民医院神经外科ICU病房培养的109株鲍鳗不动杆菌采用K-B法进行了13种抗菌药物敏感性试验，用PCR检测了β-内酰胺酶耐药基因型，结果如下：
2.1 2009年1月-2014年6月神经外科ICU鲍曼不动杆菌对13种抗菌药物的药敏结果（表2）
表2 鲍曼不动杆菌对13种抗菌药物的耐药率和敏感率(%)
2.2 ESBLs基因的多重PCR结果为：71株鲍曼不动杆菌对CTX/CAZ均耐药，对该71株菌中的每一株均进行了SHV、CTX-M-3和CTX-M-14基因PCR的电泳分析，结果表明，29株菌中共有5株扩增出条带（该29株菌均来自三维试验产ESBLs组），其中3株表现为大小不等的3条单一条带，分别约150bp、300bp、450bp，分别是blaSHV、blaCTX-M-14、blaCTX-M-3；5株扩增条带中的另外2株出现大小一致的双条带，均约为150bp、300bp大小，考虑同时存在blaSHV、blaCTX-M-1两种基因型(图2)。42株鲍曼不动杆菌（该42株菌均来自三维试验不产生ESBLs组）的PCR扩增电泳结果均没有条带出现。
3讨论
鲍曼不动杆菌感染的治疗一直是临床上很大的难题，因为鲍曼不动杆菌极易对各种消毒剂和抗菌药物产生耐药性，对重症患者、ICU病房的患者等威胁很大。多重耐药鲍曼不动杆菌、泛耐药鲍曼不动杆菌、耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌等的广泛传播更是成了医生和患者的噩梦。鲍曼不动杆菌是医院感染重要的条件致病菌,其环境释放能力强，传播速度快，已成为呼吸道院内感染的主要致病菌，也可引发菌血症、尿道感染、继发性脑膜炎等。鲍曼不动杆菌的环境生存能力强、耐药率高，近年来已成为重要的院内感染条件致病菌，其在医院环境中广泛分布且可长期存活，易老弱危重及免疫力低下的人群中爆发流行[4-5]。本研究检测了脑外科鲍曼不动杆菌的耐药性、AmpC酶、β-内酰胺酶基因，报告如下：
本研究发现，鲍曼不动杆菌对β-内酰胺类抗生素耐药率均在27.9%-77.9%（IPM除外）。耐药率相对较低的包括头孢哌酮/舒巴坦及氨苄西林/舒巴坦,这可能是β-内酰胺酶能够被舒巴坦可抑制,又可通过作用于细菌的青霉素结合蛋白，增加了其抗药活性[6]。阿米卡星耐药率较低(29.5%),但临床用药后的反馈证明该药单独使用疗效不佳。左旋氧氟沙星耐药率已经达到39.3%,这可能与近年来临床广泛使用这类抗生素有关。该研究表明，鲍曼不动杆菌对IPM的耐药率最低(<3.6%),可能与该药对多数β-内酰胺酶稳定有关。从表2可以看出鲍曼不动杆菌已经出现泛耐药菌株，109株鲍曼不动杆菌耐药率除亚胺培南外，其余药物耐药率均在73.40%以上，并且呈上升趋势，对亚胺培南耐药率已达到34.5%。
本研究实验对IPM中介或耐药的136株鲍曼不动杆菌的基因，采用了引物OXA-23、OXA-24进行PCR扩增，结果是blaoxa-23阳性，b1aoxa-24阴性。但感染携带blaoxa-23基因的鲍曼不动杆菌（33株）者，择其临床资料完整的25例，其中有23例被诊断为医院感染，这说明存在对IPM耐药的鲍曼不动杆菌医院感染流行，且基因型为blaoxa-23。结合临床使用药物情况分析，鲍曼不动杆菌对IPM、美罗培南等碳青霉烯类药物耐药由于产生了0XA-23型和0XA-6型碳青霉烯酶[7]。
本研究多重PCR检测了鲍曼不动杆菌的ESBLs、AmpC酶，在13株鲍曼不动杆菌中，有3株ESBLs基因型阳性，2株AmpC酶基因型阳性，两者阳性率均低。该结果说明这些基因型在鲍曼不动杆菌中没有大量出现，可能属于散发，故推测可能与耐药鲍曼不动杆菌医院感染流行无关。然而，这些基因型在鲍曼不动杆菌中发生率虽然不高，似乎与医院感染的传播关系不大，但该结果提示质粒的水平传递已经存在。这应引起临床医生的足够重视，严格按照抗生素使用规定，合理使用抗生素，减少或防止院内感染耐药菌的传播。
参考文献:
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论文作者:马英花，杨桂清，曹银光
论文发表刊物:《中西医结合护理》2016年第2卷第3期
论文发表时间:2016/6/7
标签：不动论文; 杆菌论文; 基因论文; 耐药性论文; 聊城市论文; 内酰胺论文; 医院论文; 《中西医结合护理》2016年第2卷第3期论文;