HPLC法测定愈创木酚磺酸钾原料药中有关物质论文_徐伟1,, 高政2

摘要： 目的 HPLC法测定愈创木酚磺酸钾原料药中有关物质。方法 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(4.6 mm×250 mm，5 μm)，以冰醋酸水溶液（每1000ml水中加入5ml冰醋酸，用三乙胺调节pH至3.5）为流动相A，以甲醇为流动相B，梯度洗脱（0～5 min，95%A；5～25 min，95% A→75% A；25～40 min，75% A→60% A；40～40.1 min，60% A→95% A），检测波长为279nm；柱温为30℃；流速为1.20ml/min；进样量20 μL。结果：各杂质平均回收率在90%~110%之间，定量限浓度小于忽略限度（0.05%）。

结论 该方法灵敏度高、准确度好，可用于愈创木酚磺酸钾原料药中有关物质的测定。

关键词： HPLC 愈创木酚磺酸钾原料药 有关物质

愈创木酚磺酸钾为刺激性祛痰药，通过刺激支气管黏膜腺体分泌，使痰液变稀容易咳出，常作为复方祛痰镇咳类口服液的主要成分之一[1]。美国药典 (USP)42版[2]收载的愈创木酚磺酸钾原料药为羟基甲氧基苯磺酸钾半水化合物（C7H7KO5S H2O），未对磺酸钾的取代位置作出规定，JP17版药典[3]中规定愈创木酚磺酸钾为4-羟基-3-甲氧基苯磺酸钾单体。KP X药典中收载的也是4-羟基-3-甲氧基苯磺酸钾单体[4]。本研究将美国药典收载的另一构型（3-羟基-4-甲氧基苯磺酸钾）作为已知杂质研究，同时还考察了愈创木酚（起始物料）、邻苯二酚（愈创木酚的起始物料）。本研究采用普通C18柱，高有机相比例洗脱，延长色谱柱寿命，且方法准确，灵敏度较高。

1 仪器与试药

1.1仪器

Agilent 1260 InfinityII高效液相色谱仪（安捷伦科技有限公司）；Sartorius型电子天平（赛多利斯有限公司），PHS-3C型pH计（上海越平科技仪器有限公司）。

1.2试药

甲醇（色谱纯；TEDIA）；冰醋酸（分析纯；西陇科学股份有限公司）；三乙胺（分析纯；国药集团化学试剂有限公司）；水为纯化水。愈创木酚磺酸钾（批号201909001、201909002、201909003）；江苏慈星药业有限公司）。对照品：愈创木酚磺酸钾（来源：中国药品生物制品检定所；批号100408-201001；4-羟基-3-甲氧基苯磺酸钾74.5%、3-羟基-4-甲氧基苯磺酸钾20.2%）；愈创木酚（来源：中国食品药品检定研究院；批号111510-201804；100%）；邻苯二酚（来源：阿拉丁；批号H1821064；99.84%）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流动相A：冰醋酸水溶液（每1000ml水中加入5ml冰醋酸，用三乙胺调节pH至3.5），流动相B：甲醇；梯度洗脱：（0～5 min，95%A；5～25 min，95% A→75% A；25～40 min，75% A→60% A；40～40.1 min，60% A→95% A）；检测波长：279nm；柱温：30℃；流速：1.0 ml/min；进样量：20 μL。

2.2 溶液的制备

2.2.1稀释剂 甲醇-水（5-95）

2.2.2 供试品溶液 愈创木酚磺酸钾约20mg，置20ml量瓶内，加稀释剂溶解并稀释至刻，即得。

2.2.3 对照品溶液 取愈创木酚与邻苯二酚对照品各约30mg，置不同50ml量瓶，用5ml甲醇溶解，加稀释剂稀释至刻度，作为对照品储备液I（定位溶液）；另取愈创木酚磺酸钾对照品约25mg，置50ml量瓶，加稀释剂溶解并稀释至刻度，作为对照品储备液I；精密量取愈创木酚与邻苯二酚对照品储备液I各1ml与愈创木酚磺酸钾对照品储备液I4ml，置同一100ml量瓶内，加稀释剂稀释至刻度作为对照品储备液II；精密量取对照品储备液II5ml，置20ml量瓶内，加稀释剂稀释至刻度，制成每1ml约含愈创木酚1.5μg、邻苯二酚1.5μg，3-羟基-4-甲氧基苯磺酸钾1μg、愈创木酚磺酸钾3.725μg的溶液，作为对照品溶液；

2.2.4系统适用性溶液 取愈创木酚磺酸钾约20mg，置20ml量瓶内，精密量取对照品储备液II5ml，加稀释剂稀释至刻度，即得。

2.3有关物质方法建立及评价

2.3.1检测波长选择 根据JP收载的色谱条件，配制混合溶液，于DAD检测器上全波长扫描，已知杂质和主成分在279nm处均有吸收，因此确定检测波长为279nm，见图1，出峰顺序依次为邻苯二酚、愈创木酚、愈创木酚磺酸钾、3-羟基-4-甲氧基苯磺酸钾。

图1各化合物紫外吸收图

2.3.2测定方法的选择 在参照文献[1]的色谱条件基础上优化，确定“2.1色谱条件”，精密量取系统适用性溶液20 μL注入液相色谱仪，详见图2。

图2系统适用性溶液色谱图

2.4方法学验证

2.4.1专属性及系统适用性试验 按取“2.2”项方法配制定位溶液及系统适用性溶液，照2.1色谱条件进行研究，杂质峰之间、主成分与杂质峰之间分离度均大于1.5，各化合物依次出峰顺序为愈创木酚磺酸钾、3-羟基-4-甲氧基苯磺酸钾、未知杂质、邻苯二酚、愈创木酚，见图2。

2.4.2定量限试验 取各杂质及愈创木酚磺酸钾对照品适量，用甲醇溶解，加稀释剂制成每1ml约含愈创木酚0.18μg、邻苯二酚0.18μg、愈创木酚磺酸钾0.45μg，3-羟基-4-甲氧基苯磺酸钾0.12μg的溶液，作为定量限溶液，照2.1色谱条件连续进样，各化合物信噪比S/N均不小于10，能满足定量检测要求。

2.4.3线性及范围 取各杂质及愈创木酚磺酸钾对照品适量用稀释剂溶解并稀释制成一系列线性溶液（定量限~限度的600%范围内取7个浓度点），照2.1色谱条件依次进样，各化合物在设定范围内，浓度与峰面积成良好的线性，相关系数均大于0.99，Y轴截距/100%的响应值均小于10%。

2.4.4准确度试验 取各已知杂质对照品适量，按限度的80%~120%加入愈创木酚磺酸钾原料中，照2.1色谱条件进样分析，结果各杂质在3个浓度水平下的回收率均在90%~110%之间，准确度较高。

2.4.5重复性 取愈创木酚、邻苯二酚和愈创木酚磺酸钾对照品适量，用适量甲醇溶解，加稀释剂稀释制成每1ml约含邻苯二酚6ug、愈创木酚6ug、3-羟基-4-甲氧基苯磺酸钾4ug的溶液作为对照品储备液，取愈创木酚磺酸钾6份，每份约20mg，置20ml量瓶内，精密加入对照品储备液5ml，加稀释剂稀释至刻度，作为试品溶液。照2.1对色谱条件进样检测。结果各已知杂质，未知杂质及总杂含量的RSD均不大于10.0%，杂质检出个数相同，重复性良好。

2.5样品中有关物质含量测定

按上述方法对愈创木酚磺酸钾6批样品进行测定，结果见表-1。

表-1多批样品有关物质检测结果

3讨论

色谱柱选择 目前药典收载的有关物质检测方法，色谱柱为氨基硅胶柱；流动相为0.05mol/l磷酸二氢钠缓冲盐-甲醇（20:1），水相比例较高，且氨基柱极不耐水，大大缩短了色谱柱使用寿命，本方法采用普通C18柱，梯度洗脱，普适性较强。

参考文献

[1]魏宁漪.周颖.胡昌勤.愈创木酚磺酸钾的NMR定量测定[J].中国药学工业杂志,2011.6,46（12）：953.

[2]美国药典委员会.美国药典[S]42版：3595.

[3]日本药典委员会.日本药典[S]17版：14369.

[4]韩国药典委员会.韩国药典[S]KP X版：984.

论文作者:徐伟1,, 高政2

论文发表刊物:《科学与技术》2019年第23期

论文发表时间:2020/5/8