湖南省妇幼保健院 湖南长沙 410008
【摘 要】目的：探究PTEN基因突变及mRNA表达和卵巢癌病理生物学特征之间的关系。方法：选取2017年5月至2018年5月期间收入的10例上皮性卵巢囊肿患者、18例卵巢交界性肿瘤患者、120例卵巢癌患者以及10例卵巢正常者，全部以PCR-SSCP法进行PTEN外显子5突变的检测，观察四组研究对象卵巢组织的mRNA表达，并分析PTEN基因突变、mRNA表达和卵巢癌病理生物学特征之间的关系。结果：10例上皮来源卵巢癌的患者被发现有PTEN外显子5突变，卵巢交界性肿瘤、卵巢癌患者在PTEN基因的mRNA表达上低于上皮性卵巢囊肿与正常卵巢，差异有统计学意义（P＜0.05）。PTEN基因的mRNA表达和卵巢癌病理分期之间为负相关联系，与组织分化程度为正相关联系。结论：PTEN外显子5突变与mRNA下调与卵巢癌的病理生物学行为变化有着较为密切的联系，PTEN基因可以用于反映卵巢癌的病理生物学特征，临床可以借此来对卵巢癌进行准确诊断。
【关键词】PTEN；基因突变；mRNA表达；卵巢癌；病理生物学特征；关系
卵巢癌是女性生殖系统三大恶性肿瘤之一，其发病率仅在宫颈癌与子宫癌之后，屈居第三位，可谓是死亡率最高、患者预后最差的女性恶性肿瘤之一。关于卵巢癌的发病机制，目前尚不明确，部分学者认为与抑癌基因突变及mRNA表达下调有关[1]。本文选择2017年5月至2018年5月期间收入的158例研究对象，试探究PTEN基因突变及mRNA表达和卵巢癌病理生物学特征之间的关系。
1 资料与方法
1.1 一般资料
选取2017年5月至2018年5月期间收入的10例上皮性卵巢囊肿患者、18例卵巢交界性肿瘤患者、120例卵巢癌患者以及10例卵巢正常者，所有患者均每人仅取一份标本。各组患者具体资料如下：①上皮性卵巢囊肿患者：年龄25岁~45岁，平均（35.58±8.26）岁；②卵巢交界性肿瘤：年龄26岁~44岁，平均（35.43±8.15）岁；③卵巢癌患者：年龄24岁~46岁，平均（35.53±8.19）岁；④卵巢正常者：年龄23岁~47岁，平均（35.59±8.18）岁。对比四组患者的年龄分布，P＞0.05，差异全无统计学意义，统计学对比可正常进行。
纳入标准：①近期未接受过放疗或化疗的患者；②患者对研究内容知情并签署自愿协议，医院伦理委员会批准[2]。
排除标准：患有免疫系统疾病、代谢性疾病、内分泌疾病的患者。
1.2 方法
为患者切取正常卵巢、卵巢癌、卵巢囊肿的部分组织，置入液氮中进行半小时速冻，随后放入-70℃的冰箱中保存，以便于DNA与mRNA的提取。取部分组织，以10%甲醛进行固定，以石蜡包埋，随后切成4μm厚度的切片，给予HE染色，进行病理诊断。RNA以TRIZOL试剂来提取，DNA则以酚/氯仿/异戊醇法进行提取。
以PCR-SSCP法为DNA进行测序。扩增PTEN基因的外显子5，将3μL扩增产物以1：5的比例与变性剂混匀，在98℃下进行10分钟水浴变性、5分钟冰浴，取15μL作聚丙烯酰胺凝胶电泳，行银染显带，将异常的DNA扩增产物送交测序[3]。
为mRNA使用AMV逆转录酶，使其被逆转录为cDNA，基于β-actin这一定量进行对照，对cDNA产物行PCR扩增。取4μLPCR扩增产物行上文电泳与银染显带操作，以分析仪检测PTEN、β-actin扩增带的平均灰度值，并计算二者之比，以求得PTEN的mRNA表达水平。
1.3 观察指标
观察四组研究对象卵巢组织的mRNA表达，并分析PTEN基因突变、mRNA表达和卵巢癌病理生物学特征之间的关系。
1.4 统计学方法
参与本次研究的所有研究对象的所有数据使用19.0版的统计学软件包SPSS检验。计数资料使用（n，%）的形式表示，检验卡方值。计量资料使用（）的形式表示，检验F值。四组的数据若经统计学计算为P＜0.05，那么则有统计学意义存在于分组结果中。
2 结果
2.1 mRNA表达
10例上皮来源卵巢癌的患者被发现有PTEN外显子5突变。卵巢交界性肿瘤、卵巢癌患者在PTEN基因的mRNA表达上低于上皮性卵巢囊肿与正常卵巢，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。
2.2 相关性
PTEN基因的mRNA表达和卵巢癌病理分期之间为负相关联系，与组织分化程度为正相关联系（P＜0.05）。见表2。
表1 mRNA表达的组间对比（）
注：*F=19.374，P=0.000＜0.05；#F=230.068，P=0.000＜0.05。
3 讨论
PTEN基因即，是当前被发现的首个存在磷酸酶活性的、具有抑癌作用的基因，其定位于10q23.3染色体，其编码产物同源于细胞骨架中存在的张力蛋白及辅助蛋白，其可以脱磷酸化磷酸丝氨酸、苏氨酸、磷酸络氨酸残基，降低FAK酶活性的同时调节细胞的浸润与转移；同时，其还可以诱导CDK抑制剂p27的活性，使细胞周期停留在G1周期，使细胞凋亡[4]。陈颖在其研究中指出，PTEN基因突变与卵巢癌等肿瘤的发展、演变有非常密切的联系，PTEN基因外显子5突变将使基因编码产物结构发生变化，使其功能出现异常[5]。结果中卵巢交界性肿瘤、卵巢癌在PTEN基因的mRNA表达上低于上皮性卵巢囊肿与正常卵巢（P＜0.05）正符合这一点，笔者认为这可能与卵巢肿瘤、卵巢癌患者的早期分子事件有关，此外，PTEN基因突变会引发转录修饰等遗传学变化，使PTEN基因表达下调，因此PTEN基因突变可引发卵巢癌的病理变化。再看PTEN基因突变、mRNA表达与病理生物学特征之间的关系，从结果可知，PTEN基因的mRNA表达和卵巢癌病理分期之间为负相关联系，与组织分化程度为正相关联系（P＜0.05），这意味着临床可以通过对PTEN基因mRNA表达的测定来划分患者的病理分期，判断组织分化程度。
结语：
PTEN基因的mRNA表达和卵巢癌病理分期之间为负相关联系，与组织分化程度为正相关联系。临床可以通过测定PTEN基因mRNA表达，分析其与病理生物学特征之间的关系来实现对卵巢癌的诊断。
参考文献：
[1]柯慧慧，段迎春，胡花，等.HMGB1/TLR4在卵巢癌中的表达及其与临床病理特征的关系[J].中国妇幼保健，2018，33（10）：2349-2353.
[2]张云鹤.抑癌基因PTEN与妇科肿瘤研究进展[J].北京医学，2017，39（04）：390-392+395.
[3]林莉，王金华.肿瘤相关因子在卵巢癌中的表达及其与淋巴结转移相关性研究[J].中国临床药理学杂志，2015，31（22）：2211-2213.
[4]赵岐刚，田小侠，王斌，等.PTEN基因在卵巢癌组织中的表达及其意义[J].山东医药，2004（27）：67-68.
[5]陈颖，郑华川，杨雪飞，等.PTEN基因突变及mRNA表达与卵巢癌病理生物学特征的关系[J].中国肿瘤临床，2004（07）：9-11+15.
论文作者:桑娜
论文发表刊物:《兰大学报（医学版）》2018年5期
论文发表时间:2018/9/20
标签：卵巢癌论文; 病理论文; 卵巢论文; 患者论文; 基因论文; 生物学论文; 肿瘤论文; 《兰大学报（医学版）》2018年5期论文;