（江苏丰县人民医院检验科 江苏 徐州 221700）
【摘要】目的：探讨乙型肝炎病毒大蛋白(LHBs)诊断乙型肝炎的应用价值。方法：采ELISAfa法检测乙型肝炎病毒大蛋白(LHBs)、HBeAg及乙肝病毒前S1抗原(PreS1)，采用荧光定量PCR方法检测HBV DNA。结果：HBeAg阳性样本中乙型肝炎病毒大蛋白与HBV?DNA的检出无显著性差异(P>0.05)；乙肝病毒前S1与HBV?DNA的检出有显著性差异(P<0.01)；乙型肝炎病毒大蛋白吸光度值(OD值)与HBV?DNA拷贝数相关系数r=0.913，P<0.05。在HBeAg阴性样本中LHBs的吸光度均值和阳性率均增加，Pre S1 OD值以及阳性率与HBV?DNA拷贝数均不相关（P>0.05）。结论：乙型肝炎病毒大蛋白(LHBs)可反映临床乙肝病毒复制水平。
【关键词】乙型肝炎病毒；大蛋白；酶联免疫吸附测定；聚合酶链反应
【中图分类号】R446.6;R512.62 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2018）32-0221-03
Hepatitis?B?virus?large?protein?in?diagnosis?of?Hepatitis?B
Wang Shuguang,Teng Yijian,Wang Fang.
【Abstract】Objective To?evaluate ?the?value?of?hepatitis?B?virus?large?protein(HBVLP)?in?diagnosis?of?hepatitis?B.Methods?HBVLP HBeAg?and?HBV?PreS1?were?detected?by?ELISA,?and?HBV?DNA?was?detected?by?fluorescence?quantitative?polymerase?chain?reaction(PCR).?Results No?significant?difference?was?found?in?HBVLP?and?HBV?DNA(P>0.05)?while?a?significant?difference?was?observed?in?HBV?PreS1?and?HBV?DNA(?P<0.01)?in?HBeAg?positive?samples.?The?OD?value?was?closely?correlated?with?the?copies?of?HBV?DNA?(r=0.913,?P<0.05).?The?mean?OD?value?and?positive?rate?for?HBVLP?were?increased?in?HBeAg?negative?samples.?However,?the?mean?OD?value?and?positive?rate?for?HBV?PreS1?were?not?related?the?copies?of?HBV?DNA(P>0.05).?Conclusion HBV?LP?can?show?a?HBV?replication?level.
【Key words】Hepatitis?B?virus;Large?protein;Enzyme-linked?immunosorbent?assay;Polymerase?chain?reaction
目前临床对HBV感染患者,通常采用血清学指标如乙肝二对半、HBV-DNA和肝功能检测,来监测HBV感染者的病情轻重、传染性大小及评价抗病毒药物疗效等，但是由于e抗原敏感性较差，使得检测结果很难真实反应患者乙肝病毒活跃程度，而HBV-DNA检测又受一定条件限制，也很难大规模开展。近年随着对HBV大蛋白(large sueface protein LP)在检测HBV感染与复制及用于制备重组疫苗、药物等方面的探究，使其作为新的和更有价值的、可靠的乙型肝炎抗病毒治疗监测的血清免疫学指标之一，受到临床广泛关注，现各大医院已常规开展检测,我科目前也已开展该项检测。
1.材料与方法
1.1 一般资料
收集2015年1月—2016年12月在我院就诊者，共120例慢性乙肝病毒患者，诊断标准符合2005年中华医学会肝病分会、中华医学会传染病分会联合制定的《慢性乙型肝炎防治指南》的慢性肝炎诊断标准。其中男68例、女42例，年龄19～77岁之间。所有选择对象留取血清2ml，-80℃冻存备用。
1.2 主要仪器与试剂
检测仪器包括美国伯乐的洗板机和酶标仪，厦门安普利荧光定量PCR仪，日立7600生化分析仪等。乙肝两对半试剂由上海科华生物工程有限公司提供，厦门英科新创公司提供HBV-LP抗原与PreS1抗原检测试剂，HBV-DNA定量检测试剂由厦门安普利科技有限公司生产，肝功能检测试剂购自上海科华生物工程有限公司。
1.3 检测方法
乙肝两对半检测采用ELISA法，HBV-LP采用酶标定性检查,Pre-S1抗原采用 ELIS双抗体夹心法检测。以上检测均严格按照试剂盒操作说明书进行操作，选择波长450nm通过酶标仪测定，读取各孔OD值，并按说明书要求设Cut off值，测定结果大于Cut off值为阳性。采用荧光定量PCR法测定HBV-DNA，病毒载量单位以copies/ml表示，参考临界值为5*102copies/ml。肝功能项目测定按照要求，用日立7600全自动生化分析仪检测，校准品由试剂厂家提供，质控品为伯乐公司提供。
1.4 结果统计
结果的统计学方法采用SPSS18.0软件进行处理，将所有有效数据输入到Excel表中，计数资料采用卡方检验进行比较组间差异，计量资料采用方差分析进行比较组间差异， 将P<0.05作为具有统计学意义的差异。
2.结果
2.1 120例慢性乙肝患者血清HBV-LP、HBV-DNA、Pre-S1和HBeAg阳性例数与阳性率见表1。
结果分析如下：HBV-LP与HBeAg阳性率之间的差异具有统计学意义(χ2=81.4，P<0.05)；HBV-LP与HBV-DNA之间的结果差异不明显(χ2=1.035，P=0.326)；HBV-LP与Pre-S1阳性率之间的差异具有统计学意义(χ2=35.3，P<0.01)。
表1 慢性乙肝患者HBV.LP、HBV DNA、Pre—S1和HBeAg阳性例数与阳性率比较
3.讨论
乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)是一种传染性病毒，对人类健康危害很大，感染后发展成慢性乙肝以致肝硬化肝的比率很大，因此人们对其重视程度越来越高，对其调查与研究亦日益增多。据报道当前全球范围内有4亿人左右是慢性乙型肝炎病毒携带者，其中75%感染者分布在在亚洲和西太平洋地区。在中国，乙型肝炎是高发区，乙型肝炎病毒的携带率占总人口的10.3％左右 ，另外由于流动性人口的不断增加，乙肝病毒携带者的人数亦不断上升。这其中约有10%的乙肝患者转化为慢性肝炎[1]。而慢性肝炎患者可以从无症状到隐性症状到渐渐变为严重的慢性肝损伤如肝硬化以及肝细胞癌。据报道25％一40％乙肝病毒感染者将发展为肝硬化和肝癌[2]，对患者健康威胁很大乙肝病毒大蛋白（HBV-LP）是病毒形成完整外膜的重要标志，其包含PreS1、PreS2和S三个结构域，与病毒复制密切相关[3]。因此，对乙肝病毒各个项目的检测，及时采取治疗措施具有十分重要的意义。
HBV作为传染性疾病之一，在我国属于危害比较重的一种疾病，目前临床判断乙型肝炎患者病毒是否存在复制的常用指标是Hear以及HBV-DNA，它们反映了人体对乙型肝炎病毒的免疫反映状态以及所秉承的转化过程，也是判断患者传染性及预后情况的传统指标。但临床发现，一部分HBeAg阴性患者依然存在乙肝病毒的大量复制，并且HBV-DNA检测条件要求高，质量控制严格，有的医院并不是每天都检查，这使其检测特别在基层医院难以普及。
研究证明，乙肝病毒大蛋白在病毒复制过程中起着关键作用[4]，它是构建Dane颗粒包膜蛋白和管状颗粒的重要成分。乙肝病毒大蛋白具有双币-拓扑学构像，面向内质网的管腔的Pre-S区可以介导成熟病毒颗粒与细胞吸附，而面向细胞质的Pre-S区在病毒组装中发挥相关功能，同时大蛋白的Pre-S2区具有与蛋白激酶C相互作用启动细胞间信号转导的作用[5]。肝细胞内的乙肝病毒大蛋白积累过多可以导致内质网应急反应，可导致肝细胞损伤，这可能与HBV-LP促进CAPN2、eIF3K及PPP2CB表达促发细胞凋亡有关[6]。肝细胞损伤后释放乙肝病毒颗粒到血液中去，使患者血清中检测到HBV—LP成为可能。本报告研究发现HBV-LP与HBV-DNA有明显相关性，提示HBV—LP的结果表达与病毒的复制有关，这为临床判断病毒复制与否提供新的实验室指标。另外在慢性乙肝患者中，HBV-LP与HBV-DNA两者之间检出结果无明显差异，但明显高于Pre-S1和HBeAg阳性率。由此可知，HBV-LP相比Pre-S1能更加真实地反映出病毒的复制情况，其在临床的应用有更大的价值。
通过对患者的肝功能分析发现，HBV-LP阳性患者的ALT、AST水平高于HBV-LP阴性患者，由于ALT和AST是反映肝细胞损伤极为灵敏的指标，提示HBV-LP的表达与肝细胞损伤有关。
通过进一步的分析发现，慢性乙肝患者的HBV-DNA拷贝数与HBV-LP平均OD值之间具有良好的相关性，说明HBV-LP在基层医院不具备HBV-DNA检测的情况下，可以作为替代检测指标。
总之，HBV-LP检测方法简便易行，且与HBV-DNA检测结果有良好的相关性，同时HBV-LP的表达与肝脏疾病的发生发展密切相关，这表明HBV—LP的检测可称为预测肝脏疾病发生发展的新指标，是慢性乙肝检测指标的有益补充。乙肝两对半与HBV—LP的联合检测对于临床判断病情 选择最佳治疗方案 检测病情变化和观察临床疗效具有重要的意义。
【参考文献】
[1] Zeng G,wen S,wang Z,et al.Geographic distribution,viologic andclinical characteristics of hepatitis B virus genotypes in china [J].Viral Hepeat,2005,12(6):609.
[2] Zhou YH，Wu C，Zhuang H.Vaccination against hepatitis B：the Chinese experience.Chin Med[J].2009。122：98.102.
[3] Wang NY;Zhang D;Zhao W Hepatitis B virus large surface protein in serum as a candidate biomarker for evaluating hepatitis B virus infection 2011(14-15).
[4] Wang NY,Zhang D,Ge YW,et al.Clinical significance of measuring hepatitis B virus largesurface protein in serum[J].zhonghua shi yan He Lin Chuang Bing Du Xue Za Zhi,2010,24(5):349.
论文作者:王曙光,滕义建,王芳
论文发表刊物:《医药前沿》2018年32期
论文发表时间:2018/12/11
标签：乙型肝炎论文; 病毒论文; 蛋白论文; 乙肝病毒论文; 患者论文; 乙肝论文; 差异论文; 《医药前沿》2018年32期论文;