杨胜波1 杨 帆2 牛 刚2 张 建2 黄 敬1
1.贵阳中医学院 550000；2.贵阳中医学院第二附属医院 550000
摘要：目的：观察体外循环（CPB）后大鼠 STAT5表达的活性及龙胆泻肝汤对其的影响情况，探讨龙胆泻肝汤对大鼠体外循环后肝损害的保护机制。方法：将60只SD大鼠，体重480±20g，随机分为2组（对照组A组、龙胆泻肝汤组B组），每组30只大鼠，各组分别在CPB后0h、1h、3h、6h、9h和18h每一时相处死5只大鼠。测定SATA5活性，ELISA 法测定血浆IL-1，并光镜下观察肝脏病理变化。结果：与A组比较，B组各时相肝脏组织SATA5活性明显升高（p<0.05），肝脏组织光镜下炎症明显减轻。结论：龙胆泻肝汤能促进体外循环（CPB）后大鼠肝脏组织中SATA5活性升高，同时调节炎性介质因子减轻大鼠体外循环后的肝损害。
关键词：龙胆泻肝汤；STAT5 信号通路；肝损伤
体外循环（CPB）会对机体产生强刺激，会导致机体产生一系列的应激反应，容易诱发全身炎症反应综合征（SIRS）及多器官功能障碍综合征（MODS）[1-4]，死亡率高，是外科患者术后死亡的主要原因之一。CPB可导致心、脑、肝、肺、肾等众多器官的损伤及衰竭，而对肝脏的损伤尤其严重，一旦发生肝功能障碍，甚至肝功能衰竭，治疗难度升高，往往会导致MODS，治愈率低，为患者体外循环后死亡的主要原因之一。药理学动物实验结果表明龙胆泻肝汤具有清肝胆、利湿热作用，促进胆汁分泌，显著改善肝细胞的变性、坏死等病理变化，并能降低毛细血管通透性，具有较强的抗炎作用，因此，可降低SIRS的发生率，并通过调节STAT5 信号通路降低肝脏损害，但作用机制现仍未明确。本实验通过观察龙胆泻肝汤对大鼠体外循环（CPB）后肝损害的防治作用及机制，报告如下：
1、材料和方法
1.1动物分组及处理：
健康成年雄性清洁级Sprague-Dawley（SD）大鼠（贵阳医学院实验动物中心提供）60只，体重480±20g，动物随机分为2组，即对照组（A组）、龙胆泻肝汤组（B组），A组、B组予以造模成功后，各组再模型制备后0h、1h、3h、6h、9h和18h分为6组，每组5只。
1.2药品：龙胆泻肝汤（贵阳中医学院第二附属医院）
1.3方法
A组术前3周给水喂养，B组术前3周开始灌胃给龙胆泻肝汤（贵阳中医学院第二附属医院），每日4次，按4.5ml/KG给药。术前禁食12h，禁饮6h，术前使用乌拉坦（1mg/kg）腹腔注射麻醉，采用22G静脉留置针经动脉逆行插入作为动脉灌注管；经右颈静脉将18G静脉留置针穿刺直至右心房水为静脉引流管。在贮血器和氧合器之间有旁路管道便于排除气泡（Figure2-2，2-3）。预充液总量14-18 ml，其中氧合器和热交换器共8-10ml，其它管道6-8ml。成分：新鲜的同种大鼠血液（8～12）ml（术前由1只大鼠的颈动脉穿刺抽取并肝素化）、血定安4ml、5％碳酸氢钠2ml、20％甘露醇2ml、肝素钠150IU/kg。各部分连接管道妥善固定后，CPB组打开静脉引流端使得静脉血回流到贮血器，然后动脉灌注管，开始转流。转流开始后停止呼吸机辅助呼吸，氧合器供氧（FiO2 1.0），氧流量与灌注流量比值保持在0.8～1.0，建立并行体外循环，转流时间约120min后停止CPB。
1.4检测指标
各组分别于造模成功后0h、1h、3h、6h、9h和18h小时处死5只大鼠，经下腔静脉无菌取血，肝素抗凝，立即4℃，3000rpm，离心15min，取上清置于﹣70℃冰箱保存，ELISA 法测定血浆IL-1。取部分肝脏组织，EMSA法测SATAT5相对活性，HE染色后光镜观察其病理变化。
1.5统计学处理
利用SPSS17.0统计软件进行统计分析，计量资料均以均数±标准差（x±s）表示，组间比较采用配对t检验进行检测，取α=0.05，P<0.05为差异有统计学意义。
2.结果
A组、B组在CPB后大鼠血浆IL-1含量早期均明显升高，3h后上升到高峰，6h后缓慢上升，与A组比较，B组可抑制CPB后大鼠血浆IL-1的释放，* P<0.05，**P<0.01。
2.3大鼠的肝组织各组间病理学改变情况：A组和B组1h后肝脏组织细胞明显充血血水肿，3h后出现肝细胞坏死，伴有中性粒细胞和单核细胞明显浸润，B组较A组比较病理变化较轻。
讨论
体外循环（CPB）为现在临床中常用手段，对临床手术的成功开展具有重大作用，但它仍有很多相关并发症，不仅会对机体产生强刺激，而且会导致机体产生一系列的应激反应，诱发全身炎症反应综合征及多器官功能障碍综合征，病死率高。在体外循环（CPB）后可导致心、脑、肝、肺、肾等众多器官的损伤及衰竭，而肝脏是所有受累器官中最易损伤的器官，过去对体外循环后肝脏损伤的治疗研究已很多，但均无良好保护作用，体外循环后肝损伤的发生率仍居高不下。
药理学动物实验结果表明：龙胆泻肝汤可以改善肝细胞的变性、坏死等病理变化，对体外循环后肝损害有一定的改善作用，可以降低肝脏因体外循环所损伤的发生率。也曾有研究报道：龙胆泻肝汤能降低毛细血管通透性，具有较强的抗炎作用[5]，通过调控STAT5 信号通路，减少炎性因子IL-1的释放，从而减轻肝脏因体外循环后的损害程度。
STAT5 信号通路具有刺激细胞再生、调节急性期反应和炎性反应、抑制IL-1的释放、抗凋亡免疫调节、促进合成代谢、稳定肠粘膜屏障等功能，具有广泛的生物学效应。
因此，本实验通过龙胆泻肝汤对体外循环后肝损伤大鼠的实验观察，结论如下：在病理切片方面，B组各时相肝脏组织细胞损伤较A组均较轻。与A组比较，B组SATA5相对活性显著上升，由此表明，龙胆泻肝汤可以对肝脏组织中SATA5相对活性有一定调节作用，可能通过控制炎性因子IL-1对机体损害起到对体外循环后肝脏一定程度上的保护功能。
本实验表明：龙胆泻肝汤对体外循环后所导致的大鼠肝脏损伤有一定的保护作用，机制可能与调控SATA5相对活性的表达，降低炎性因子IL-1释放，从而减轻对肝脏的损伤密切相关。
参考文献：
[1]Liakopoulos OJ，Dorge H，Schmitto JD，et al.Effects of preoperative statin therapy oncytokines after cardiac surgery.Thorac Cardiovasc Surg.2006；54（4）：250-254.
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[4]Franke A，Lante W，Fackeldey V，et al.Pro-inflammatory cytokines after different kinds of cardio-thoracic surgical procedures：is what we see what we know?Eur J Cardiothorac Surg.2005；28（2）：569-575.
[5]丁宪群，陈太福，杨胜波。加减龙胆泻肝汤用于梗阻性黄疸术后肾功能改善的临床研究[J].贵阳中医学院学报 2009，4.27-28
论文作者:杨胜波,杨帆,牛刚,张建 黄敬
论文发表刊物:《健康世界》2015年16期供稿
论文发表时间:2015/11/20
标签：体外循环论文; 龙胆论文; 肝脏论文; 大鼠论文; 损伤论文; 中医学院论文; 贵阳论文; 《健康世界》2015年16期供稿论文;