摘要：随着当前社会经济的发展和科学技术的发展，马鹿角蛋白酶解工艺也取得了全面的提升，接下来本文将对马鹿角蛋白酶解工艺进行一定分析探讨，并对其做相应整理和总结。
关键词：马鹿角；马路角蛋白；酶解工艺；分析
马鹿角所具有的温肾阳、强筋骨、行血消肿功效使其在医用上具有补肾阳、益精血、抗疲劳及增强机体免疫能力的作用，而马鹿角因其主要成分为蛋白质因此我们可以推断其生物活性作用即马鹿角中的蛋白质；因此可对其蛋白质进行一定酶解方法使其降低蛋白质分子量，以此来提高蛋白质吸收率和保健功能，最大化发挥马鹿角功效价值。
一、酶解工艺特点
酶解工艺具有酶促反应速度快、反应条件温和、专一性强、无氨基酸破坏或消旋现象等特点，其对在进行酶解过程中原料中有效成分保存的完全、无副产物、无有害产物、无环境污染等优势。用这种方法来对马鹿角蛋白进行对应实验分析，具有一定的操作便捷性，同时酶解工艺与酸、碱水解蛋白产物相比较来看，其酶解产物所含有的多肽较之酸、碱水解蛋白产物都更多，而这个过程中所产生的游离氨基酸相对较少，这也进一步体现了酶解工艺的整体安全性较高的特点。接下来本实验将采用复合蛋白酶、风味蛋白酶、中性蛋白酶对马鹿角蛋白进行对应的酶解工艺试验，并通过过程中对其单因素结果分析选取酶解效果较为明显的两种酶，作进一步的全面分析和总结，以此使马鹿角功能性和价值性能够全面且充分的得到发挥。
二、材料与方法
（1）马鹿角、风味蛋白酶、复合蛋白酶、中性蛋白酶；BCA蛋白浓度测定试剂盒；酪蛋白；福林试剂；其它试剂。实验方法则主要是通过对马鹿角酶解物制备方法，马鹿角→清洗→粉碎→水煮提取蛋白→加酶水解→加热灭酶→离心，上清液即为马鹿角蛋白酶解多肽。其中马鹿角蛋白质总量和水提可溶性蛋白质含量的测定马鹿角蛋白质含量测定采用凯氏定氮法，水提可溶性蛋白含量测定采用BCA试剂盒；对蛋白质水解度的测定水解度（DH）采用茚三酮显色法测定。酶活力的测定蛋白酶活力测定采用Folin-酚法。
（2）最佳酶解条件的确定复合蛋白酶、风味蛋白酶、中性蛋白酶分别在不同的pH、酶解时间、酶解温度和加酶量的条件下对配制马鹿角蛋白水溶液进行酶解，在水解过程中用NaOH和HCl调pH，使体系维持所需的pH，酶解后经90℃、10min灭酶，测定其水解度。pH对酶解反应的影响则通过复合蛋白酶、风味蛋白酶和中性蛋白酶分别对浓度为100mg/mL马鹿角蛋白在不同pH条件下进行酶解。复合蛋白酶酶活力1 500U/g，风味蛋白酶250U/g，中性蛋白酶600U/g。酶解温度为50℃，酶解时间为5h，测定在不同pH值条件下的水解度。时间对酶解反应的影响则是以复合蛋白酶在温度50℃、酶活力1 500U/g、pH 6.5时；风味蛋白酶在温度为50℃、酶活力为250U/g、pH 6.5时；中性蛋白酶在温度为50℃、酶活力为600U/g、pH 7.5时，分别对蛋白浓度100mg/mL的马鹿角蛋白进行不同酶解时间的酶解，测定不同酶解时间下的水解度。温度对酶解反应的影响，复合蛋白酶pH 6.5、酶解时间4h、酶活力1 500U/g时；风味蛋白酶在pH6.5、酶解时间3h、酶活力250U/g时；中性蛋白酶在pH 7.5、酶解时间2h、酶活力600U/g时，分别在不同温度下对蛋白浓度100mg/mL的马鹿角蛋白进行酶解，测定在不同酶解温度条件下的水解度。酶量对酶解反应的影响主要根据复合蛋白酶pH 6.5、酶解时间4h、酶解温度50℃时；风味蛋白酶pH 6.5、酶解时间3h、酶解温度40℃时；中性蛋白酶pH 7.5、酶解时间2h、酶解温度60℃时，这个过程中要分别用不同的酶量对蛋白浓度100mg/mL的马鹿角蛋白进行对应酶解工作，以此来测定在不同酶量条件下的水解度。
（3）酶解正交试验设计根据单因素的试验结果，以pH、时间、温度、酶量为因素，分别对酶解效果较好的复合蛋白酶和风味蛋白酶作对应的正交试验。双酶解方案确定采用复合蛋白酶、风味蛋白酶来进行双酶解，以不同的加酶顺序和灭酶方式酶解，比较酶解后的水解度。4种不同加酶方式：按正交试验确定的最适条件先加复合蛋白酶，再加风味蛋白酶；先加风味蛋白酶，再加复合蛋白酶；先加复合蛋白酶灭酶，再加风味蛋白酶；先加风味蛋白酶灭酶，再加复合蛋白酶[1]。
三、结果与分析
马鹿角蛋白质总量、水提可溶性蛋白质含量的分析结果采用凯氏定氮法测得马鹿角中蛋白质总量为37.5%，经水煮提取的可溶性蛋白含量为20.1%。单因素酶解结果下pH对酶解反应的影响由下图（图1）可见，不同的蛋白酶具有不同的最适pH值，在合适pH条件下水解度最大。复合蛋白酶最适pH值为6.5；风味蛋白酶最适pH为6.5；中性蛋白酶最适pH为7.5。
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（图1）
四、双酶实验结果及意义分析
通过上文我们对双酶的选用，从上述四个单方面因素实验结果可以看出，复合蛋白酶和风味蛋白酶这两者水解度相对较大，但同时在这个过程中，风味蛋白酶酶解之后其气味较好。以此为前提我们可以对这两种蛋白酶进行对应的正交试验，以此达到其酶解参数能够全面提升的作用。按照复合蛋白酶影响酶解反应温度大于加酶量大于PH大于时间的主次因素进行对应排列，以此来达到最终马鹿角功效价值发挥至最大化的目的。最终结果表明复合蛋白酶单酶酶解的最佳条件为酶解温度55摄氏度，酶解时间4小时、PH值为7.0、加酶量6500U/g；而风味蛋白酶单酶酶解最佳条件为酶解温度45摄氏度，酶解时间3小时、PH值为7.0、加酶量750U/g。因此采用复合蛋白酶和风味蛋白酶对马鹿角酶解，能够将马鹿角整体功效价值全面发挥出来。
五、马鹿角蛋白酶解工艺意义
马鹿角蛋白酶解工艺作为生物酶解技术下的应用分支，其在一定程度上达到了最大化保留生物活性物质情况下，通过先进的科学技术将其运用于生产中，提升了对应物整体功效效果，促进相关行业的经济发展。马鹿角蛋白酶解工艺所带来的对马鹿角功效质量上的全面提升，使其医用价值得到了进一步的开发，其对我国生物酶解技术的进一步推动和经济建设发展有着极为有益的作用。
结束语
综上所述，通过对马鹿角蛋白酶解工艺表明，当前复合蛋白酶和风味蛋白酶是酶解马鹿角蛋白的最有效酶解条件，与此同时注重对酶解工艺的加强和完善，使其在后续应用范围和实验操作上得以全面提升。
参考文献：
[1]侯潇，高建，李春雨，王铮.马鹿角蛋白酶解物的抗氧化、抗疲劳和免疫活性[J].食品科学，2013，34（09）：305-309.
论文作者:韩宏伟
论文发表刊物:《基层建设》2018年第31期
论文发表时间:2018/12/17
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