河北省迁安市人民医院神经外科，河北唐山064400
Δ通讯作者：穆永茂，1977年生，性别：男；民族：汉；籍贯：山西朔州；学历：硕士学位；职称：主治医师；单位及科室：河北省迁安市人民医院重症医学科；主要研究方向：脑血管病的基础研究；邮箱：2810590540@qq.com
摘要：目的：观察不同时间应用血府逐瘀汤对急性一氧化碳中毒大鼠模型中海马细胞脑红蛋白表达及神经元细胞凋亡的影响。方法：腹腔注射纯CO制备急性一氧化碳中毒的大鼠模型，分别于造模后0.5h、2h、6h、12h、24h予血府逐瘀汤液24g(6m1)／(kg•d)灌胃，于造模后7d处死，断头取脑组织，采取免疫组化染色结合阳性细胞记数的方法观察各组大鼠海马区脑细胞脑红蛋白的表达的变化，用原位细胞凋亡法测定海马区凋亡阳性细胞数。对所得数据进行统计学分析。结果：与模型组相比，各组大鼠海马脑红蛋白阳性神经元数目明显升高，与模型组相比差异有统计学意义(P<0.O1)；海马区凋亡细胞数目明显减少，与模型组相比差异有统计学意义(P<0.O1)。结论：早期应用血府逐瘀汤可增强急性一氧化碳中毒大鼠海马区脑红蛋白表达，减少细胞凋亡，可能对一氧化碳中毒后神经细胞保护方面起重要作用，对预防一氧化碳中毒迟发性脑病提供治疗思路。
关键词：血府逐瘀汤；一氧化碳中毒；一氧化碳中毒迟发性脑病；脑红蛋白；凋亡
急性CO中毒迟发性脑病（DEACMP）是急一氧化碳中毒(carbon monoxide poisoning)后最严重的并发症之一。其发病机制可能与缺血缺氧、细胞凋亡等有关。脑红蛋白(neuroglobin，NGB)是体内第三类重要的携氧蛋白，主要在脑组织中表达，在缺血缺氧性损伤中对神经元的保护作用。本课题组已经研究血府逐瘀汤可以上调一氧化碳中毒大鼠模型海马细胞脑红蛋白的表达，故本研究拟通过观察不同时间应用血府逐瘀汤对在大鼠模型中海马细胞脑红蛋白表达变化及神经元细胞凋亡的影响，以期探讨对DEACMP的治疗的新策略。
2结果
2.1脑海马区NGB免疫组化染色结果：
NGB阳性细胞呈棕色，阳性细胞位于神经元的细胞质中。染毒后免疫组化阳性神经细胞数目：一氧化碳中毒组大鼠海马脑红蛋白阳性神经元数目下降，细胞凋亡明显，与对照组相比差异有统计学意义(P<0.O1)；经血府逐瘀汤治疗后，与中毒组相比脑红蛋白的表达明显增多，细胞凋亡细胞数减少，与中毒组相比差异有统计学意义(P<0.O5)，其中以治疗组A（造模后0.5h予血府逐瘀汤）脑红蛋白表达明显增多，凋亡细胞数最少。
注：与对照组相比，aP<0.O5；bP<0.O1；与模型组相比cP<0.O5；dP<0.O1；与治疗组A相比eP<0.O5；fP<0.O1；
3讨论
急性重度CO中毒的患者经及时治疗，多数可以痊愈．但大约有10％～30％的患者于急性中毒恢复后，经过2～60d的“假愈期”可再次出现一系列神经精神症状，称为CO中毒迟发性脑病。近年来, 对一氧化碳中毒迟发性脑病发病的病理生理机制陆续提出缺血缺氧、氧自由基损伤、细胞凋亡、一氧化氮等主要学说，这些学说都对DEACMP机制的研究产生了积极的推动作用。脑红蛋白（neuroglobin,NGB）是主要位于脑内神经元的携氧球蛋白，其主要在神经元细胞质中表达，是一种在神经组织中携氧，转运氧气，供氧的特异性蛋白，与神经组织微循环有关，使其成为一种备受关注的神经元修复介质。我们实验结果显示：一氧化碳中毒组大鼠海马脑红蛋白阳性神经元数目下降，细胞凋亡明显，与对照组相比差异有统计学意义(P<0.O1)；经血府逐瘀汤治疗后，与中毒组相比脑红蛋白的表达明显增多，细胞凋亡细胞数减少，与中毒组相比差异有统计学意义(P<0.O5)，其中以血府逐瘀汤治疗组A脑红蛋白表达明显增多，凋亡细胞数最少。我们考虑机制为：一氧化碳中毒后，海马区脑红蛋白反应性高表达以促进氧向神经组织的释放及在神经组织中的转运，从而在一定程度上延缓了神经细胞的死亡。随着缺氧时间的增加，当缺氧程度超过机体的代偿能力时，脑红蛋白表达迅速下降，脑细胞发生不可逆死亡。传统中医认为：一氧化碳中毒属中医戾气中毒之类，此病之发，脑首受其扰。一氧化碳中毒迟发性脑病是由于机体正气不足，加之外邪入侵，阻碍气化，津液凝结成痰，痰成之后，流于体内，随气升降，无处不到，或蒙心窍，或扰心神，或流窜经络脏腑而发[4]。血府逐瘀汤系清代名医王清任所创活血化瘀诸方中颇具代表性的一首方剂，其主要功效为行气活血立法、对各种原因引起的“血淤证”都有较好的治疗效果，被誉为活血化淤第一方 。现代药理学研究证明：当归具有清除氧自由基，提高超氧化物歧化酶的活性，抑制脂质过氧化反应。红花、桃仁、赤芍有抑制血小板和红细胞的聚集、稳定红细胞吗、降低血粘度，改善血液流变性的作用。本研究中，我们发现经血府逐瘀汤治疗后，海马区脑红蛋白表达增多，提示早期予血府逐瘀汤可能预防DEACMP的发生。
【参考文献】
1孙寒静,黎同明,等. 血府逐瘀汤对大鼠局灶性脑缺血模型的保护作用.中医学报,2013, 28(128): 981-983.
2王耀宏,赵金垣等. 急性一氧化碳中毒迟发性脑病的动物模型制备研究.中国职业医学.2004, 31(1): 5-10.
论文作者:张前进,穆永茂,王艳丽,李晓玲,李建民,王敏
论文发表刊物:《健康世界》2015年6期
论文发表时间:2015/9/28
标签：氧化碳论文; 细胞论文; 蛋白论文; 神经元论文; 凋亡论文; 阳性论文; 大鼠论文; 《健康世界》2015年6期论文;