(江西卫生职业学院 江西 南昌 330052)
【摘要】 目的:通过MTT法检测羟基脲衍生物的体外抗肿瘤活性，筛选出有体外抗肿瘤作用的羟基脲衍生物。方法:选用Hep-2肿瘤细胞作为模型，然后利用MTT法从六种羟基脲衍生物中筛选出对Hep-2肿瘤细胞有抗肿瘤作用的，并计算其对Hep-2细胞的半数抑制浓度，即IC50值。结果:筛选得到对Hep-2细胞有很好的抗肿瘤活性的衍生物有3种。计算得到的每种羟基脲衍生物对Hep-2细胞的半数抑制浓度IC50值。结论:HY-CN、HX-CN和HX-叔对Hep-2细胞有非常好的抗肿瘤作用。
【关键词】 羟基脲衍生物；MTT；IC50
【中图分类号】R97 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2016）01-0178-02
MTT法被广泛用于大规模抗肿瘤药物的体外筛选[1]和肿瘤放射敏感性的测定等[2]。本实验选用Hep-2细胞进行羟基脲衍生物的体外抗肿瘤活性筛选。
1.实验材料、试剂与仪器
人喉癌上皮细胞Hep-2细胞株（南京凯基生物科技发展有限公司）。
各种自制羟基脲衍生物：2.4－二氯苄氧基脲（HX-Cl）；4－氰苄氧基脲（HX-CN）；4－硝基苄氧基脲（HX-NO2）；4－叔丁基苄氧基脲（HX-叔丁基）；N-（2.4－二氯苄基），N-（2.4－二氯苄氧基）脲（HY-Cl）；N-（4－氰苄基），N-4－氰苄氧基）脲（HY-CN）；阳性对照药物：羟基脲（上海达瑞精细化学品有限公司批号20100612）。阴性对照：含5％的胎牛血清1％二甲亚砜RPMI-1640培养基。RPMI-1640培养基（美国Hyclone试剂公司）；胎牛血清（杭州四季青工程材料有限公司）；四甲基偶氮唑蓝（MTT）。680型酶联免疫检测仪（BIO-RAD公司）；96孔培养板（美国Costar）。
2.方法 ( MTT 法)
(1)调整Hep-2细胞的浓度为5×104个/ml左右，以100μL/孔接种于96孔板中，每组浓度设置5个复孔，同时设对照组、空白组。
(2)将配制好的各浓度的受试羟基脲衍生物和对照物以100μL/孔接种于96孔板中，空白对照组以100μL/孔加入药物稀释液。
(3)将96孔板置于37℃，95%空气和5% CO2培养48h后，每孔加MTT(5g/L)20μL。
(4)继续孵育已加药的Hep-2细胞4h，小心地用枪吸弃孔内的150ul培养液，然后每孔加入150ul DMSO。完成后，将96孔板放置在酶联免疫检测仪的凹槽上，开启酶联免疫检测仪和电脑，用电脑设置波长及震荡10min，使结晶充分地溶解，最后在酶联免疫检测仪490nm处测得各孔的吸光值。
(5)选用空白对照组调零，在波长为490nm处，用酶标仪测定各孔吸光值，计算得细胞生长抑制率，当抑制率≥30%时，细胞对该药敏感。
(6)细胞生长抑制率的计算公式：细胞生长抑制率(%) = (1- 给药组/空白对照组)×100%
(7)重复实验2次。
3.实验结果
羟基脲衍生物作用于Hep-2细胞48h，然后用酶联免疫检测仪，测出甲臜溶液OD值。最后，根据Hep-2肿瘤细胞生长制率公式和IC50计算公式，将所得到的OD值用Excel 2003 进行计算，结果见表1。部分羟基脲衍生物对Hep-2细胞的生长抑制率比对照药物羟基脲的抑制率更加高，有的甚至高达90%以上，如羟基脲衍生物HY-CN。从IC50上看，羟基脲衍生物HY-CN、HX-CN、HX-叔、YB4均比羟基脲的低，证明它们的抗肿瘤细胞Hep-2活性都较强。
以受试羟基脲衍生物浓度作为横坐标，生长抑制率作为纵坐标，分别绘制各羟基脲衍生物作用于Hep-2细胞的生长抑制曲线，羟基脲衍生物对Hep-2细胞的生长抑制率呈正向关系，有浓度依赖。
选用SPSS18.0软件对生长抑制率进行t检验，得P<0.05，因此各羟基脲衍生物和羟基脲对Hep-2细胞的抑制率有显著的差别。
4.讨论
结果证明，部分羟基脲衍生物抗肿瘤活性优于羟基脲，有三种羟基脲衍生物对Hep-2细胞有较好的抗肿瘤活性。在高浓度时，部分羟基脲衍生物对肿瘤细胞的抑制率达到90%以上。这可能是由于羟基脲衍生物脂溶性比羟基脲更强，从而进入细胞内的药物浓度更高，能够更好地和药物靶点结合，提高羟基脲衍生物的生物利用度，因而发挥出更强大的细胞毒性作用，最后诱导肿瘤细胞凋亡。
【参考文献】
[1]吴慧.抗肿瘤药物体外筛选方法[J].医学理论与实践，2005，18（2）：146-148.
[2]秦婷婷，唐东平.MTT方法体外应用新进展 [J]. 现代肿瘤医学，2008，16（10）：1835-1837.
论文作者:刘五梅
论文发表刊物:《医药前沿》2016年1月第1期
论文发表时间:2016/5/12
标签：羟基论文; 衍生物论文; 细胞论文; 抑制论文; 抗肿瘤论文; 浓度论文; 体外论文; 《医药前沿》2016年1月第1期论文;