李慧
（长江职业学院和湖北技能型人才培养研究中心 湖北 武汉 430074）
【摘要】 目的：优化右旋兰索拉唑纳米注射液的处方和制备工艺。方法：采用纳米沉淀法制备右旋兰索拉唑PLGA纳米注射液，以粒径和包封率作为评价指标，采用超滤法测定纳米粒的包封率，用高效液相色谱法测定右旋兰索拉唑的含量。结果：最优处方为：药物与PLGA比例为1:2，TPGS浓度为2mg/ml，药物浓度为60mg/ml。制备工艺为：30℃，2400r/min将油相滴注于水相中。结论：纳米沉淀法制备的右旋兰索拉唑纳米粒处方合理，工艺可行，包封率高。
【关键词】右旋兰索拉唑；纳米粒；注射液
【中图分类号】R94 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2016）14-0384-03
纳米载药系统是一种极有发展前途的新型给药系统，它的优势在于：1）纳米药物载体可经过血液循环进入毛细血管，还可透过内皮细胞间隙，进入病灶，被细胞以胞饮的方式吸收，实现靶向用药，提高了药物的生物利用率。2）纳米载体粒径较小，拥有较高的比表面，可以包埋疏水性药物，提高其溶解性，减少常规用药中助溶剂的副作用。3）纳米药物载体经靶向基团修饰后可实现靶向药物给药，可减少用药剂量，降低其副作用，如叶酸修饰载药纳米粒、磁性载药纳米粒等。4）纳米载体可延长药物的消除半衰期（t1/2β），提高有效血药浓度时间，提高药效，降低用药频率，减少其毒副作用。5）纳米载体可透过机体屏障对药物作用的限制，如血脑屏障、血眼屏障及细胞生物膜屏障等，使药物到达病灶，提高药效[1-4]。
本课题研究针对消化系统疾病，以具有良好生物降解性及相容性的天然高分子聚合物乳酸羟基乙酸（PLGA）为载体材料，选取右旋兰索拉唑为药物模型，采用沉淀法制备纳米粒，探讨纳米粒形成机制，优化纳米粒注射液的处方工艺。最终制备出粒径小，包封率高，载药量高，性能稳定的右旋兰索拉唑纳米粒，为后续研究打下基础。
1.仪器与材料
1.1 仪器
岛津高效液相色谱仪（日本岛津），检测器（日本岛津），工作站（Lab Solution），Stirred Cell Systems 超滤（美国 Pall Corporation），PF-101T集热式恒温磁力搅拌器（巩义市英峪予华仪器厂），JY92-Ⅱ超声波细胞粉碎机（宁波新芝科器研究所），COULTER DELSA 440SXζ 电位测定仪（美国 BECKMAN 公司），COULTER LS230 粒径分析仪（美国 BECKMAN 公司），JEM-100B 透射电镜（日本电子株式会社）
1.2 样品与试剂
右旋兰索拉唑（武汉楷伦化学新材料有限公司，批号138530-94），PLGA（济南岱罡生物科技有限公司），TPGS（北京凤礼精求商贸有限公司 Speziol），乙醇（南京化学试剂有限公司），甲醇为色谱纯其他试剂均为分析纯。
2.方法与结果
2.1 右旋兰索拉唑纳米粒的制备方法
称取处方量右旋兰索拉唑和PLGA溶解于乙醇中；称取处方量TPGS溶解于注射用水中； 在30℃，2400r/min搅拌下，将油相缓慢滴注到水相中；分装冻干。
2.2 包封率测定
2.2.1 Dexlansoprazole的含量测定[6]
2.2.1.1色谱条件与系统适应性实验 色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶柱(250×4.6mm，5μm)；流动相：【水-甲醇-三乙胺(60:40：0.5)(v/v)，用磷酸调pH至7.3】；检测波长：284nm；流速：1.0ml/min；柱温：30℃；运行时间：20分钟；进样量：10uL。
2.2.2标准曲线绘制 精密称取右旋兰索拉唑20.48mg，置50ml量瓶中，用稀释液溶解，并稀释至刻度，并依次精密量取5ml至50ml量瓶，2ml、3ml、4ml、5ml、6ml、7ml分别置于6个10ml量瓶中，用稀释液稀释至刻度，依次注入色谱仪，记录峰面积，以浓度对峰面积作线性回归方程：A=22.0512×C +39.9512，相关系数R值为0.9998。故认为在20.48μg/ml～286.72μg/ml浓度范围内，线性关系良好。
2.2.1.2超滤法：将适量的Dexlansoprazol NP置于超滤杯中，密封后氮气加压（0.3MPa），取流出液稀释一定倍数后，经高效液相色谱法测定A值，用标准曲线法定量，计算游离药物W，包封率的计算公式为(W0－W)/ W0×100%（W0：总药量）。
2.3 纳米粒的制备工艺考察
2.3.1搅拌速度 将120mg Dexlansoprazole和240mg PLGA溶解在2mL乙醇中，在30℃缓慢滴注到8mL含0.5%TPGS的水中。
实验结果表明，当有机相与水相的比例大于或等于1：4时，有较好的粒径和包封率，考虑到便于冻干，选择有机相与水相的比例为1：4。
2.4 纳米粒处方的优化
以纳米粒的粒径和包封率为考察指标，对纳米粒处方进行正交设计优化。方案：右旋兰索拉唑浓度选取三个水平50mg/ml，60mg/ml，70mg/ml（油相中浓度）；TPGS浓度选取三个水平1mg/ml，2mg/ml，5mg/ml（水相中浓度）；右旋兰索拉唑与PLGA的比例选取三个水平1：1，1：2，1：3。
粒径越小越优，直观分析的极差结果和方差分析的结果均显示，影响粒径的因素顺序为药物与PLGA 的比例＞药物浓度＞TPGS浓度。方差分析结果表明，药物与PLGA 的比例对纳米粒粒径有十分显著的影响。最佳方案为药物浓度50mg/ml，TPGS浓度2mg/ml，药物与PLGA的比例为1：2。
包封率越高越优，直观分析的极差结果和方差分析的结果均显示，影响纳米粒包封率的因素顺序为药物与PLGA 的比例＞药物浓度＞TPGS浓度。方差分析结果表明，药物与PLGA 的比例对纳米粒包封率有十分显著的影响，药物浓度和TPGS浓度影响不显著。最佳方案为药物浓度70mg/ml，TPGS浓度2mg/ml，药物与PLGA的比例为1：2。
综合考虑粒径与包封率结果，选取药物浓度60mg/ml，TPGS浓度2mg/ml，药物与PLGA的比例为1：2。
3.讨论
3.1 纳米沉淀法形成纳米粒的机制
聚合物材料以分子形式分散在有机溶剂中，注入水中后由于有机溶剂分子快速扩散入水分子中，对聚合物材料形成局部过饱和，则聚合物分子聚集成小核，然后不断长大，形成纳米粒。成核作用和生长动力学决定了纳米粒的最终粒径和粒径分布，而过饱和作用是关键的影响因素。粒子表面的过饱和公式：，可见过饱和度越大则形成的核半径越小。成核速率公式：,可见过饱和度越大则成核速率越快。初期核的形成减少了溶液的过饱和度，成核作用停止，核继续长大直到其浓度达到平衡浓度C∞。分离成核过程和生长过程是形成均一粒子的关键，理想状态是快速的成核和慢速的长大[7]。
3.2 凡是能增加乙醇扩散到水中的速度的因素，都可以使纳米粒粒径减小，比如增加温度，增加转速，增加水相与油相比例。
3.3 沉淀法制备纳米粒，影响包封率的关键是纳米粒固化速度与药物扩散到外水相的速度。聚合物载体固化的越快，Dexlansoprazole扩散的越慢，则包封率越高。纳米粒的快速固化是由有机溶剂扩散入水中的速度决定的。
3.4 TPGS的乳化效力是F68的2倍，PVA的4倍。在纳米粒形成过程中乳化剂起到了至关重要的作用，它们排列在油水界面上，降低两相界面张力，抑制乳滴的聚集合并以保持乳滴的稳定。
【参考文献】
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[7] Suzanne M.D'Addio,Robert K.Prud'homme.Controlling drug nanoparticle formation by rapid precipitation[J]. Advanced Drug Delivery Reviews,2011,63(6):417-426.
论文作者:李慧
论文发表刊物:《医药前沿》2016年5月第14期
论文发表时间:2016/6/22
标签：纳米论文; 浓度论文; 药物论文; 粒径论文; 右旋论文; 成核论文; 处方论文; 《医药前沿》2016年5月第14期论文;