（衡阳市中心医院 湖南衡阳 421000）
摘要：目的 通过高效液相色谱法测定中药复方健胃分散片中延胡索乙素的含量。方法 采用Agilent SB-C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5μm），以磷酸盐-甲醇（7∶13，pH值=6.0）缓冲液作为流动相，梯度进行洗脱，检测进行波长280 nm。结果 延胡索乙素线性范围 0.1~1.0μg/mL之间关系良好，r=0.9991，RSD=0.90%，平均回收率为99.9997%。结论 高效液相色谱法测定的灵敏度、准确度高，操作更简便，是中药复方健胃分散片中延胡索乙素含量的有效测定方法，其效果明显，值得推广与应用。
关键词：延胡索乙素；高效液相色谱法；含量测定
前胃疾病作为反刍动物最常见的消化系统的发生疾病，严重影响其采食，降低动物机体的抗病能力，最终危害健康，是养殖业中面临的最严重的问题之一[1]。西药治疗是当今养殖户普遍采用于前胃疾病治疗的一种手段，但西药治疗方法后往往会给反刍动物本身带来较大的副作用，而且西药治疗往往只治表不治本，动物极易复发疾病，因此治疗效果往往不太理想[2]。基于这种因素，前胃疾病的治疗迫切需要一种高效、低毒的中方草药来替代西药[3]。而选取延胡索、党参、白术、茯苓等14 味中药材的提取物所制得的中药复方健胃分散片，则是一种较好的替代选择。该药具有补中益气、健脾和胃、消食化积、清热解毒等良好功效。其中，发挥健脾和胃等强化胃功能的有效成分是延胡索乙素、茯苓聚糖等。本研究通过了测定高效液相色谱法测定新型中药复方健胃分散片中延胡索乙素的含量，为该制剂的质量标准提供一定的参考思路，也作为反刍动物治疗前胃疾病的科学依据，相关研究如下[4]。
1材料与方法
1.1 试验材料
①试剂：延胡索乙素标准品（中国食品药品检定研究院，110726-201112）；中药复方健胃分散片；甲醇、磷酸、超纯水（实验室制得）[5]。
②仪器：Agilent 1100 高效液相色谱仪；电子天平（AX 220G）；旋转蒸发仪（RE52AA）；低速离心机（SL02上海知信实验仪器）；涡旋混合器（SK-1赛智科技）；针头式过滤器、膜（0.45μm天津市富集科技）。
1.2 试验方法
①色谱条件
采用Agilent SB-C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5μm）以磷酸盐-甲醇（7∶13，pH值=6.0）缓冲液作为流动相；流速控制1.0 mL/min；280 nm检测波长；柱温为30℃；保留时间约为30 min[6]。
②对照品制备
精密称取延胡索乙素标准品（纯度98%）共2.5 mg于50 mL容量瓶中，加入缓冲液进行超声溶解，稀释混匀，获得溶液浓度50.0μg/mL，滤膜微孔过滤，获得续滤液，该溶液为对照品。
③供试品制备
取单提复配法、提取机混提法制备的复方药片各25片，精密研细应用60目筛筛取2.0 g，添加甲醇-浓氨试液（20∶1）混合液100 mL，放入冷水冷却1 h，之后超声进行30 min，取出复冷却至室温。用缓冲液补足混匀后过滤，通过精密吸取得25 mL滤液。水浴锅上蒸干缓冲液作残渣溶解，置于5 mL容量瓶，稀释至刻度，摇匀过滤，续滤液复用微孔滤膜过滤，获得供试品的溶液[7]。
④原药材制备
取延胡索药材样品2.0 g，重复供试品制备步骤获得。
⑤系统适应性试验
精密吸取延胡索乙素对照品溶液20μL，单提复配法、提取机混提法制备分散片样品溶液，按照色谱条件测定其有效成分含量，记录各溶液色谱图。
⑥线性范围：量取50.0μg/mL延胡索乙素对照品液1、2、4、5、6、7、10 mL置于10 mL容量瓶中，加流动相进行稀释摇匀作为标准溶液。精密量取各标准液20μL通过峰面积进行线性回归分析。
⑦精密度试验
精密、重复进样量取20μL对照品稀释溶液6次，测定每次延胡索乙素峰面积和RSD值。
⑧回收率试验
同一批样品精密称取9份，各份均为2.000 g，分别添加延胡索乙素50μg/mL对照品溶液各2.0、4.0、6.0 mL[8]。混匀制备供试液，对其中延胡索乙素含量进行测定并计算各样品回收率。
⑨样品含量测定
精密吸取供试品、对照品和原药材延胡索溶液，精密吸取进样20μL，通过色谱条件测延胡索乙素的有效成分含量。
2 结果与分析
2.1 线性范围
延胡索乙素的回归方程Y=16.81269X-819723（r=0.9991）。延胡索乙素线性范围 0.1~1.0μg/mL之间关系良好。
2.2 精密度试验结果
精密度试验结果得延胡索乙素平均峰面积为573.937，其中RSD=0.40%（n=6），试验数据说明该仪器的精密度呈现良好。
2.3 加样回收率试验
通过加样回收率试验计算对比样品含量与样品测得量。计算出延胡索乙素的平均回收率为 99.9997%（n=6），RSD=0.90%，见表1。
2.4 样品含量测定
提取机混提法、单提复配法制备的分散片以及原药材通过采取供试品制备步骤制备检测的溶液，高效液相色谱法测定各样品中延胡索乙素的有效含量，提取机混提法结果的平均含量（2.4234mg/g）大于单提复配法结果的平均含量（1.9455mg/g）及原药材（2.1564mg/g），表明利用提取机混提法制片效果更好[9]。
3 讨论
结合其他相关试验的结果摸索出的色谱条件的流动相，磷酸盐-甲醇（7∶13，pH值=6.0）缓冲液，280 nm的检测波长，而试验结果也证明，在该色谱条件下延胡索乙素分离效果明显。对于供试品的常用提取方法主要有浸渍提取、回流提取、超声提取等。本研究在供试品制备过程中，通过试验确定冷水浸泡冷却1h后进行超声处理30 min可以完全提取，且操作更为简单，效果更好。本研究相关结果表明，提取机混提法制分散片中，延胡索乙素的含量最高，混提法使用水溶液溶剂可能是其影响因素之一。同时，组方里其他相关的活性成分也可能对延胡索乙素的提取有一定的辅助效果。
参考文献
[1]马荔，滕再进，王志强，等.高效液相法测定中药健胃愈疡片中延胡索乙素的含量［J］.海峡药学，2015，27（2）：45-47.
[2]肖定汉.奶牛病学[M].北京：中国农业大学出版社，2002：93-94.
[3]杨帆.改良高效液相色谱法测定元胡止痛滴丸和胶囊中延胡索乙素含量［J］.中国药业，2014，23（13）：24-25.
[4]林家寿.高效液相色谱法测定延胡索中延胡索乙素、延胡索丙素、小檗碱的含量及不同炮制品稳定性研究[J].世界中西医结合杂志，2016，11（3）：348-351.
[5]陈立娜，马坤芳.高效液相色谱法测定胃康灵胶囊中延胡索乙素的含量[J].中国药房，2006，17（21）：1660-1661.
[7]国家药典委员会.中华人民共和国药典（2005 版）[S]. 北京：化学工业出版社，2005：94.
[8]关强，王云龙，杜遵义.高效液相色谱法测定延胡索药材中延胡索乙素的含量[J].中国当代医药，2009，16.
[9]乳颗粒中延胡索乙素的含量[J].中国医院药学杂志.2005.25（6）：540-541.[6]路魁.HPLC法测定三香健脾胶囊中延胡索乙素的含量［J］.中国中医药现代远程教育，2014，12（15）：154-155.
论文作者:邹文光
论文发表刊物:《航空军医》2018年3期
论文发表时间:2018/4/15
标签：延胡索论文; 色谱论文; 含量论文; 高效论文; 溶液论文; 精密论文; 缓冲液论文; 《航空军医》2018年3期论文;