【摘 要】目的 探讨miR-224 在乳腺癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系。方法用荧光定量PCR 技术检测55 例乳腺癌患者的癌组织及其癌旁的正常乳腺组织中miR-224 的表达情况。结果miR-224 在乳腺癌组织中的相对表达量为0.321±0.324，在配对的正常乳腺组织的相对表达量为0.227±0.370，两者的差异具有统计学意义（t=2.182，P=0.033<0.05），miR-224在乳腺癌中组织的表达与乳腺患者的肿块大小、淋巴结转移、病理分期有关（P 均<0.05），而与患者年龄、分化程度无关（P 均>0.05）。结论 miR-224 在乳腺癌中的表达升高，升高的miR-224 提示乳腺癌患者的不良预后。
【关键词】乳腺癌；miR-224；临床病理特征；预后
Expression and clinical significance of miR-224 and in human breast cancer.XUE Di-xin，CHEN Ji-xian，LIN Dao-zhe，YUming，WU Wei-li，LIANG Mei-zhen，HE Xin-wei，LIN Xiao，CHEN Ha-ha.Department of Surgical Oncology，The Third AffiliatedHospital，Wenzhou Medical College，Ruian325200，China.corresponding author：CHEN Ji-xian，E-mail：xue-di-xin@163.com
【Abstract】 Objective To explore the expression of miR-224 and their correlation with Clinicopathological characteristics in breastcancer.Methods Expression of miR-224 was detected by real-time quantitative PCR in 55 cases of breast cancer and their correspondingadjacent normal tissue.Results The relative expression level of miR-224 was 0.321±0.324 in breast cancer，and 0.227±0.370 in matchednormal tissue，significant differences were observed between them(t=2.182，P=0.033<0.05).In breast carcinoma，the relative expression levelof miR-224 was associate with size，lymph node metastasis，pathological stage（P<0.05），no significant differences were observed regardingage，the degree of differentiation.(P>0.05).Conclusion The expression level of miR-224 was elevated in breast cancer，and overexpressionof miR-224 indicate poor prognostic.
【Key words】breast cancer；miR-224；Clinicopathological characteristics；prognostic.
【中图分类号】R737.9【文献标识码】A【文章编号】2096-0867（2015）-09-012-02
MicroRNA(miRNA)是一种小分子非编码RNA，近些年来，研究表明在乳腺癌组织中miroRNA 出现异常表达， 如miR-125b、miR-21、miR-191［1］，并且异常表达的micoRNA与乳腺癌细胞的增值、侵袭、转移相关［2-3］，而miR-224 在乳腺癌患者的研究甚少，本实验研究miR-224 在乳腺癌中的表达及其与临床特征的关系。资料与方法
一．一般资料
收集温州医学院附属三院肿瘤外科2015 年2 月至2015年8 月手术切除的55 例术前未进行放化疗的乳腺癌患者的癌组织及其癌旁的正常粘膜组织，组织标本用液氮速冻后，保存于-80˚C 冰箱中用于RNA 的提取，55 例乳腺癌患者均为女性，年龄31—68 岁，患者均接受乳腺癌改良根治术，临床病理特征如下：年龄≤50 岁为18 例，年龄>50 岁为37 例；中低分化25 例，高分化30 例；T1 为12 例，T2+T3 为43 例；无淋巴结转移为22 例，有淋巴结转移为33 例；病理分期I、II、III 期分别为7、29、19 例。
二．实验方法
1．microRNA 提取：miRCURY™ RNA Isolation Kit（Takara公司）用于microRNA 的提取，操作详见说明书。
2.逆转录反应：用茎环引物进行miR-224 的逆转录反应，反应条件如下：16 ˚C 30min，42˚C 30min，75˚C 15min，4˚C保存。
3.SYBR GreenⅠ荧光定量PCR：采用SYBR® Premix Ex TaqII（TaKaRa）进行PCR，反应条件如下：预变性95˚C 30s，95˚C 5s，60˚C 34s，共40 个循环，以U6 为内参，所有实验重复3 次。
4.RT-PCR 的引物序列： miR-224 茎环引物5'-CTCAACTGGTGTCGTGGAGTCGGCAATTCAGTTGAGAACGGAAC-3'，miR-224 上游引物5'-ACACTCCAGCTGGG CAAGTCACTAGTGGTTCCGTT-3'，miR-224 下游引物5'-TGGTGTCGTGGAGTCG-3'，U6 的上游引物5'-CTCGCTTCGGCAGCACA-3'，U6 的下游引物5'-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3'。
三．统计学方法
用SPSS13.0 软件对结果进行统计，乳腺癌组织与正常乳腺组织间的比较采用t 检验，miR-224 的表达与临床病理参数的关系采用χ2 检验，P<0.05 表明差异有统计学意义。
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结果
1.miR-224 在乳腺癌组织中的表达
在55 例乳腺癌患者中69.1%（38/55）的患者miR-224 表达升高，而miR-224 在乳腺癌组织中的相对表达量为0.321±0.324，在配对的正常乳腺组织的相对表达量为0.227±0.370，用2-△△ct 法表示miR-224 在乳腺癌组织相对正常组织的变化倍数，故miR-224 在乳腺癌组织的表达是正常组织的2.317倍，用配对的t 检验，两者的差异具有统计学意义（t=2.182，P=0.033<0.05），表明miR-224 在乳腺癌组织中的表达升高。2.miR-224 在乳腺癌组织中的表达与临床病理特征的关系
在55 例乳腺癌患者中，38 例表达升高，17 例表达下降，而在T1 与T2+T3 组中，miR-224 表达升高率分别为41.7%（5/12）、76.2%（32/42），两组差异有统计学差异（χ2=5.157，P=0.023<0.05）；在无淋巴结转移与有淋巴结转移组中，miR-224 表达升高率分别为45.5%（10/22）、84.8%（28/33），两组差异有统计学差异（χ2=9.592，P=0.002<0.05））；病理分期I、II、III 期中，miR-224 表达的升高率分别为42.9%（3/7）、62.1%（18/29）、89.5%（17/19），三组有统计学差异（χ2=6.622，P=0.036<0.05）；在年龄≤50 岁与>50 岁组中，miR-224 表达的升高率分别为66.7%（12/18）、70.3%（26/37），两组无统计学差异（χ2=0.074，P=0.786>0.05）；在中低分化与高分化中，miR-224 表达的升高率分别为68.0%（17/25）、70%（21/30），两组无统计学差异（χ2=0.026，P=0.873>0.05）。
讨论
MicroRNA 是一种小分子非编码的RNA，约20 个核苷酸组成，通过转录水平或转录后水平负性调节基因的表达，研究显示miRNA 在许多实体肿瘤中出现异常表达，如大肠癌［4］、胃癌［5］、乳腺癌［6］等。
Zhang GJ［7］等研究表明miR-224 在大肠癌组织中表达升高，升高的miR-224 通过在翻译水平抑制SMAD4 的表达从而促进癌细胞的增值、侵袭、转移，毛盛勋［8］等研究表明在胃癌中miR-224 表达升高，通过下调胃癌细胞miR-224 的表达可抑制癌细胞的增值，促进癌细胞的凋亡，同时研究显示miR-224 可能通过调节Bcl2 基因的表达发挥作用。Li Q［9］等研究显示在MHHC97H 和MHCC97L 肝癌细胞株中miR-224表达显著升高，miR-224 直接通过下调靶基因HOXD10 的表达，从而促进肿瘤侵袭转移相关基因p-PAK4 和MMP-9 的表达，形成miR-224/HOXD10/p-PAK4/MMP-9 信号通路，促进肝细胞的侵袭和转移。有研究显示在血浆中miR-224 表达在肝癌C 期的患者较B 期的患者明显升高，升高的miR-224 与肝细胞的损伤有关，并且可作为肝癌患者的生存指标［10］。
在乳腺癌患者中miR-224 的研究甚少，而我们初步研究显示在55 例乳腺癌患者中38 例患者miR-224 表达升高，miR-224 在乳腺癌组织中的表达较癌旁正常组织明显升高，同时研究表明miR-224 在乳腺癌组织中的表达与患者肿块大小、有无淋巴结转移，病理分期有关，而与患者的年龄、分化程度、ER 受体的表达情况无关，提示高表达的miR-224 提示乳腺癌患者的不良预后。
参考文献：
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8.毛盛勋，何楠，辛林，等.反义miR-224 对胃癌细胞增殖和凋亡的影响.中华肿瘤杂志.2014，36：92-96.
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10.Zhuang LP，Meng ZQ.Serum miR-224 reflects stage ofhepatocellular carcinoma and predicts survival.Biomed ResInt.2015，2015：731781.
浙江省自然科学基金资助项目（Y2100917）
作者单位：325200，浙江省瑞安，温州医学院附属三院肿瘤外科
通信作者：陈积贤，e-mail：xue-di-xin@163.com
论文作者:薛迪新 陈积贤 林道浙 余 铭 吴伟力 梁美珍 贺新伟 林肖
论文发表刊物:《系统医学》2015年第1卷第9期
论文发表时间:2016/2/18
标签：乳腺癌论文; 组织论文; 患者论文; 引物论文; 统计学论文; 病理论文; 淋巴结论文; 《系统医学》2015年第1卷第9期论文;