河北省沧州中西医结合医院061001
【摘要】应用HPLC-ELSD法测定黄芪注射液中分布的黄芪甲苷的含量，通过设置VP-ODS（4.6mm*250mm，5μm）为实验色谱柱，应用32:68乙腈－水作为流动相，将流速于1mL/min水平控制，应用蒸发光散射检测仪实施相关检测，其中漂移管温度于55℃水平控制，载气的流速设置在1.0L/min。测定的结果显示，黄芪甲苷的含量在0.121 mg/mL~1.150mg/mL间提示具有良好的线性关系（R=0.999），黄芪甲苷平均回收率为98.99%，相对的精密度高且重现性佳。应用HPLC-ELSD法对黄芪注射液当中的黄芪甲苷含量进行测定方法简便易行，该方法可作为黄芪制剂质量控制的有效手段。
【关键词】HPLC-ELSD法；黄芪注射液；黄芪甲苷；测定
黄芪注射液主要是由黄芪、杜仲以及党参这3味中药药材所组成[1-2]。黄芪注射液在临床应用上具补肺固表、补脾益气，健脾、养血、生津以及镇静等多种功效[3]。这种药物不仅可以单独给患者使用，而且，还能够与疫苗联合进行应用，在增强机体特异性免疫力的同时也能够增强非特异性免疫能力，显著的表现出促生长的效果[4]。而制定黄芪注射液质量标准的时候，应该定量黄芪甲。因此，本研究通过应用HPLC-ELSD法测定黄芪注射液当中的黄芪甲苷的含量，现将汇报如下。
1仪器与试剂
VP-ODS液相色谱仪，蒸发光散射检测仪（Alltech3300）；精度1/10000与精度1/100000的电子天平（METTLER，瑞士）。黄芪甲苷的标准品（江苏省食品药品监察所）。色谱纯（Tedia公司，美国），甲醇与乙腈（Tedia公司，美国）。中药复方黄芪注射液（浙江三九邦而康药业公司）。
2方法
2.1液相色谱条件与含量的测定
通过VP-ODS（4.6mm*250mm，5μm）为色谱柱，应用32:68乙腈－水作为流动相，流速控制1mL/min，应用蒸发光散射检测仪进行检测，其中漂移管温度控制55℃，载气的流速控制为1.0L/min。各种样品的进样方式均为自动，在进样时需要控制好样品体积，标准为10μL。不仅需要详细记录各种样品的色谱图，而且，还要测定样品峰面积，注意计算好测定结果记[5]。
2.2制备溶液
（1）对照品
精确地称取适量的黄芪甲苷对照品置于容量10mL的容量瓶当中，并加如甲醇至容量瓶的刻度，依次制得1.150mg/mL、0.867mg/mL、0.645mg/mL、0.484mg/mL、0.242mg/mL以及0.121mg/mL标准品以备用。
（2）供试品
称取黄芪注射液100mL，注意称取一定要精确，将其放置于水饱和正丁醇溶液当中进行振摇，重复提取，一共4次，以每次提取100mL；后合并正丁醇溶液；再用水进行4次洗涤，每次洗涤100mL；并弃水液同时蒸干正丁醇溶液，再往残渣当中加5ml水微热进行溶解，冷置后过D101柱应用50mL水进行洗脱再弃水液；应用40%浓度的乙醇30mL重新洗脱后弃洗脱液，复用浓度为70%的乙醇80mL进行洗脱，并且，对洗脱液进行收集和蒸干，之后，采用2ml甲醇对其进行溶解，必须要摇匀。
（3）阴性对照品
精确地称取100mL不含黄芪复方注射液依据制备溶液步骤制备得阴性的对照品。
2.3系统的适用性
黄芪甲苷对照品、阴性的对照品以及供试品三种溶液均色谱设置条件进行设置，并各吸取其中10μL注入到色谱仪当中，观察并记录其色谱图结果。
2.4线性范围
各不同浓度标准品应该精确地提取，提取量为10μL，之后进行进样操作，对各色谱图结果进行观察并记录，与此同时，对峰面积进行测定记录，黄芪甲苷的峰面积中y自然对数作横坐标，浓度x自然对数作纵坐标，进行回归方程线性处理。
2.5精密度的试验
同一浓度黄芪甲苷要精确地吸取，标准品吸取量为10μL，之后进行进样，操作应该重复6次，测定出峰面积并计算其RSD。
2.6稳定性的试验
同一个样品精确地吸取，吸取量是10μL，在0、2、4、8以及12h，进样操作依据设置色谱条件进行，测定出峰面积并计算其RSD。
2.7重现性的试验
将同一批的黄芪注射液分别制备出5份，每份供试品各10μL，进行进样操作，测定出峰面积并计算其RSD。
2.8加样回收的试验
已知含量的样品3份（各50mL），取量要精确，并将其分别加入标准品0.120mg、0.194 mg以及0.242mg，操作也要十分精确，对各浓度重复进行3次操作并制备样品，同时，精确的吸取10μL，进样操作依据设置色谱条件进行，测定其含量并计算出回收率。
2.9测定样品
取黄芪注射液3批制备样品液，基于研究设置色谱条件吸取10μL量注入到色谱仪中测定各个批注射液当中黄芪甲苷具体含量。
3结果
3.1系统的适用性
将选定液相色谱的条件作为依据，供试品以及标准品的出峰具体时间基本相似，并且，未显示出现杂峰。黄芪甲苷的峰保留时间处，阴性对照品未有出现色谱峰，在研究设置的液相色谱条件下进行的测定当中，黄芪甲苷的峰能实现分离且无干扰的现象。
3.2线性的范围
黄芪甲苷的峰面积中y自然对数作横坐标，浓度x自然对数作纵坐标，测定的结果显示，黄芪甲苷的含量在0.121 mg/mL~1.150mg/mL的范围内的线性关系良好（R=0.999）。见图1。
3.3精密度的试验结果
精密度测定的RSD=0.86%，表明检测系统并未出现显著性的偏差，试验的精密度相对来说比较高，该方法应被应用于对黄芪注射液的检测。
3.4稳定性的试验结果
稳定性测定RSD=5.25%，显示黄芪注射液在制备后的24h内均有较高的稳定性。
3.5重现性的试验结果
重现性测定RSD=9.15%，显示黄芪供试品中的黄芪甲苷制备方法相对稳定且方法可行。
3.6加样回收的试验结果
加样回收的平均回收率为98.99%，RSD=1.37%。显示该方法对于测定黄芪注射液准确度相对较高。
3.7样品的测定
结果显示，黄芪注射液样品黄芪甲苷的含量结果在1.643μg/mL ~1.794μg/mL。
4讨论
本研究对黄芪药材当中的黄芪甲苷含量进行了测定，进行含量检测采用的方法是应用HPLC-ELSD法，研究同时对流动相的乙腈－水比例以及蒸发光散射检测仪柱温充分的控制，考察出峰的时间以及色谱的分离结果，显示了以32:68乙腈－水比例作流动相、流速控制1mL/min，应用蒸发光散射检测仪进行检测，其中漂移管温度控制55℃，载气的流速控制为1.0L/min。黄芪甲苷的色谱峰的出峰时间相对合适且分离的效果较好。
研究提示了，黄芪甲苷的含量在0.121 mg/mL~1.150mg/mL的范围内的线性关系良好（R=0.999），黄芪甲苷平均回收率为98.99%，相对的精密度高且重现性佳。且应用HPLC-ELSD法对黄芪注射液当中的黄芪甲苷含量进行测定方法简便易行，该方法可作为黄芪制剂质量控制的有效手段。
参考文献
[1]瞿理华,谭科.HPLC-ELSD法测定愈伤灵胶囊中5个皂苷类成分[J].中南药学,2014,(5):481-484.
[2]Sarah Fisher,Ellen J. Wachtel.Solubilization of simvastatin and phytosterols in a dilutable microemulsion system[J]. Colloids and Surfaces B: Biointerfaces.2013:35-42.
[3]戚继红,沈伟.高效液相色谱法-蒸发光散射检测法测定前列舒乐胶囊中黄芪甲苷的含量[J].黑龙江医药,2013,(2):174-176.
[4]朱晓威,姜启娟.高效液相色谱法测定复方三七口服液中黄芪甲苷含量[J].中国药业,2009,(2):28-28.
[5]林帅军,崔燕兵,邢志霞,等.HPLC-ELSD法测定乙肝益气解郁颗粒中黄芪甲苷的含量[J].中医药导报,2017(5):47-49.
论文作者:张博
论文发表刊物:《健康世界》2019年第05期
论文发表时间:2019/6/21
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