石亚玲 姚细安 黄继德
（广州市第八人民医院检验科 广东 广州 510060）
【摘要】 目的：对OLYMPUS AU2700全自动生化分析仪酶法测定肌酐进行多要素方法学性能验证。方法：针对正确度、精密度、线性、临床可报告范围四个主要性能指标进行验证。正确度验证：通过测定卫生部临检中心2014年度小分子代谢物正确度验证质评物，评估偏倚；精密度参照美国临床实验室标准化协会（CLSI） EP15-A[1]文件，评估批内不精密度、日间精密度；临床可报告范围参照行业标准WS/T 408-2012[2] 验证线性范围，稀释度验证按一定稀释比例进行验证。结果：批内精密度低值样本CV 0.6%、高值样本CV 0.6%；天间精密度低值样本CV 1.8%、高值样本 CV 1.4%。卫生部临检中心2014年度小分子代谢物正确度验证物检测偏倚分别为: 低值样本-2.56%、高值样本-2.14%。精密度、正确度指标符合行业标准要求。肌酐线性检验结论为符合一阶线性方程（统计学标准线性），检测高限为8819.3 umol/l，临床可报告范围最高浓度为88193 umol/l。结论：AU2700肌酐检测几项主要性能指标符合国家行业要求，可用于临床检测。
【关键词】 性能验证；肌酐；行业标准
【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2015）11-0077-02
现代临床实验室开展的项目越来越多，为了保障检测结果的可靠性，按《医疗机构临床实验室管理办法》需对新增项目或变更项目进行性能验证，通过验证后该项目方可用于临床检测。本实验室在采用酶法肌酐试剂用于临床检测前，按照相关要求对其正确度、精密度、线性及稀释度等主要性能指标进行了评价，以确定是否采用该试剂。
1.材料与方法
1.1 实验材料
检测所用样本来源于本院临床样本（无溶血、无黄疸、无脂浊）。校准品：日本世诺肌酐校准品（批号：E314），质控品：RANDOX多项目质控血清（LOT： 921UN，703UE）。正确度验证物：中国卫计委临检中心2014年全国小分子/代谢物正确度验证物 ：低值（201411），高值（201412）。
1.2 仪器与试剂
OLMPUS AU2700全自动生化分析仪，日本世诺肌酐检测试剂盒（LOT：RI E408，RII E447）。
1.3 实验方法
1.3.1正确度验证：按照卫计委正确度验证检测要求，每周复融低值、高值样本各一支，重复检测5次，连续检测3周，低值、高值样本各15个数据，计算两个浓度样本15次结果的均值，标准差。判断标准：国家行业标准 WS/T 403-2012 允许偏倚B：± 5.5%。
1.3.2精密度验证：参照CLSI EP15-A文件，选择RANDOX 低值和高值两个不同浓度水平的质控品，每天重复测定4次，连续检测5天，计算均值、标准差和变异系数。可接受标准：批内精密度以1/4TE（行业标准12%）3%作为判断标准；天间精密度可接受标准以行业标准 CV 4%为判断标准。
1.3.3线性验证：线性验证方案依据WS/T 408-2012 临床化学设备线性评价指南文件。收集试剂说明书线性范围高限（Ｈ）与低限（Ｌ）的样本各１份，将Ｈ和Ｌ按５Ｌ、４Ｌ＋１Ｈ、３Ｌ＋４Ｈ、２Ｌ＋３ Ｈ、１Ｌ＋４Ｈ、５Ｈ 等比配制成６个浓度样本，每个样本连续测试3次，共得到18个数据。各浓度点数据离群点检验（Grubbs检验法）、利用SPSS软件对数据进行多项式回归分析判断线性或非线性、当非线性多项式更符合时,评估最适非线性多项式和线性多项式差值是否小于允许误差、数据精密度检验,得出统计结果。
1.3.4稀释度验证：选取接近试剂说明书上高限值的高浓度样本，手工10倍稀释，评价稀释误差。
2.结果
2.1 正确度验证结果
两水平样本检测偏倚分别为 -2.56%和-2.14%，均小于评价标准±5.5%（表1），正确度通过验证。
2.2 精密度验证结果
两样本批内不精密度均小于3%（1/4TE）判断标准[4]，结果见表2；两样本天间不精密度均小于行业标准 CV 4%[3]，结果见表3。
对检测结果进行数据离群点检测（Grubbs法），均无离群点。进行SPSS软件多项式回归分析，结果见表5，二阶方程b2、三阶方程b3的非线性系数t值分别为：0.19、-0.78，均小于二阶、三阶t判断值2.131和2.145，表明二阶，三阶非线性系数无统计学意义，数据符合一阶线性，拟合方程为 Y=1771.37X-26.32，线性高限值8819.3 umol/l通过验证，能够达到厂商承诺的线性要求8840umol/l。
2.4 稀释度验证
根据临床需要进行10倍稀释验证，线性高值样本 8819.3umol/l，10倍稀释理论值为881.93umol/l，测试值 890.0umol/l，偏差 0.9%，稀释偏差以1/2TE（行业标准12%）6%为判断标准，说明该项目10倍稀释结果准确可靠。依据线性最高浓度8819.3umol/l、稀释度1：10计算肌酐可报告最高浓度为88193 umol/l。
3.讨论
肌酐作为评估人体肾功能重要的诊断、监测指标，同时实验室提供准确可靠的肌酐检测结果也对 eGFR（估算肾小球滤过率）的评估具有重要意义[5]，因此对肌酐检测系统分析性能的验证显得尤为重要。但不同厂商提供的试剂性能验证方法和分析质量要求不同，临床检验人员在实施过程往往存在困惑，需要标准化组织／机构制订指南文件，以规范各实验室开展性能验证[6]。卫生部于2012年12月25日发布了卫生行业标准《临床生物化学检验常规项目质量指标》（标准编号：WS/T 403-2012）、《临床化学设备线性评价指南》（标准编号：WS/T 408-2012），本文参照新颁布的行业标准对酶法肌酐试剂的正确度、精密度、线性、可报告范围等进行了验证。
相对以往多采用EP9A方法学比对评估检测系统准确度方案的繁琐，卫生部临检中心自2010年推出的正确度验证计划，为常规实验室提供了方便可行的验证方案，也为日常仪器维护和定期校准提供了验证依据，本实验室测定卫生部临检中心2014年肌酐正确度结果较为满意，两水平样本检测偏倚分别为 -2.56%和-2.14%，均小于评价标准±5.5%。
精密度的验证与正确度的验证同样重要，新颁布的行业标准WS/T 403-2012质量指标较CLIA’88分析总误差更为严格，肌酐由CLIA’88总误差15%调整为行业标准的12%，并具体设定了偏倚±5.5%，天间精密度4%的分析质量指标，通过精密度验证得到的天间精密度数据可作为评估该项目的6σ值。本次试验中，肌酐批内不精密度均为0.6%，均小于行业标准的1/4总误差3%；日间不精密度分别为1.8%和1.4%，均小于行业可接受标准4%，精密度验证通过。
新颁布的行业标准线性实验按照WS/T 408-2012 临床化学设备线性评价指南较之前的平均斜率法选用了不同的统计方法，对数据分析提出了较高的要求，并要求实验人员能够了解多元线性回归各个参数的含义，对线性验证结果提供合理的解释。按照厂商承诺的线性要求8840umol/l选择接近的标本进行线性分析，实验结果显示，二阶、三阶方程的非线性系数t值均小于其t判断值，表明二阶，三阶非线性系数无统计学意义，数据符合一阶线性，说明线性高限值8819.3 umol/l范围内的标本检测结果均可靠。
对于超过8819.3 umol/l的标本则需稀释后检测，为保证稀释后结果的可靠性，进行稀释度验证。根据临床需要进行10倍稀释验证，10倍稀释理论值与测试值偏差为 0.9%，稀释偏差以1/2TE（行业标准12%）6%为判断标准，说明该项目10倍稀释结果准确可靠。可报告上限达88193umol/l。
本研究参照国家行业标准和CLSI文件要求对OLMPUS AU2700全自动生化分析仪检测肌酐的几项性能指标进行验证，其精密度、正确度、线性范围及稀释度均符合质量目标要求，可应用于临床检测。
【参考文献】
[1] NCCLS，EP15-A User Demonstration of Performance for Precision and Accuracy; Approved Guideline Wayne, Pennsylvania USA, 2001.
[2] 中国人民共和国卫生行业标准 WS/T 408-2012 临床化学设备线性评价指南，2012-12-25.
[3] 中国人民共和国卫生行业标准 WS/T 403-2012 临床生物化学检验常规项目分析质量指标，2012-12-25.
[4] CNAS-CL38：2012，医学实验室质量和能力认可准则在临床化学检验领域的应用说明(Guidance on the Application of Accreditati on Criteria for the Medical Laboratory Quality and Competence in the Field of Clinical Chemistry)．
[5] 杨雪，王薇，张传宝，赵海舰，王治国．我国肌酐检测系统性能分析．检验医学，2012，27：989-994.
[6] 陆红，李臣宾，周文宾，高倩，崔皓园，彭明婷.《临床血液学检验常规项目的质量要求》的适用性评价.现代检验医学杂志，2014，29：169-172.
论文作者:石亚玲,姚细安,黄继德
论文发表刊物:《医药前沿》2015年第11期供稿
论文发表时间:2015/7/27
标签：精密度论文; 线性论文; 样本论文; 行业标准论文; 正确论文; 肌酐论文; 标准论文; 《医药前沿》2015年第11期供稿论文;