陈辉1，陈勇2
（1.海安县中医院药剂科，226600；2.南通市第一人民医院，226000）
【摘要】 目的： 建立高效液相色谱法测定宁心胶囊中丹参酮ⅡA含量的方法。 方法：高效液相色谱法?,以十八烷基硅烷键合硅胶为色谱柱；甲醇―水（80∶20）为流动相；流速为1.0ml/min；检测波长270nm；柱温为室温。 结果：? 丹参酮ⅡA 在0.01974～0.3963μg范围内与峰面积呈线性关系良好（r=0.9999），平均回收率99.60%（n=5），RSD=1.98%。结论：?本法操作简便，结果准确，重复性好，可用于测定宁心胶囊中丹参酮ⅡA的含量，控制宁心胶囊的质量。
【关键词】? HPLC法 ；宁心胶囊； ?丹参酮ⅡA?；?含量测定
Content determination of TanshinoneⅡA in NingXin Capsules by HPLC
Chen Hui1,Chen Yong2
1.Haian County Chinese medicine hospital pharmacy,226600,China；2.Nantong First People's Hospital,226000.
【Abstract】 Objective To establish a HPLC method for determination of TanshinoneⅡ A in NingXin Capsules.Methods The assay was conducted on a Agilengt —C18 Chromatographic column（5μm，150mm×4.6mm）with methonal-water（80∶20）as mobile phase.Flow rate was1.0ml/min.The detection wavelength was270nm.Results The cali-bration curve was linear over the range of0.01974～0.3963μg（r=0.9999）for TanshinoneⅡ A .The average rate of re-covery was99.60%with RSD=1.98%（n=5）.Conclusion This method is convenient and accurate which may be used for determination of TanshinoneⅡ A in NingXin Capsules.
【Key words】 HPLC;NingXin Capsules ;TanshinoneⅡA?; determination of content
宁心胶囊是根据我院心血管专科多年的经验方，经过批准生产的医院中药制剂（批准文号：苏药制字Z04000118），由丹参、黄芪、葛根、苦参等多味药组成，具有宁心安神，益气养心，活血通脉之功效，用于心肌炎、冠心病等病引起心律失常的治疗，临床疗效显著。为了控制该制剂的质量，确保临床疗效，本文对成品中君药丹参有效成分丹参酮ⅡA 的含量测定方法进行了探讨，采用HPLC法测定丹参酮Ⅱ A 含量1，方法学考察结果令人满意，为控制该制剂的质量提供了依据。
1?仪器与试剂
1.1仪器
Agilengt 1200 型高效液相色谱仪，AUW—220D电子分析天平
1.2样品
宁心胶囊（本院制剂室提供，批号:131103、131112、131121）。
1.3试剂
对照品丹参酮Ⅱ A（中国药品生物制品检定所，批号110764-200511）；甲醇（色谱纯），水（纯化水），其余试剂为分析纯。
2 方法与结果
2.1?色谱条件
色谱柱:Agilengt —C18色谱柱(150mm×4.6mm,5μm）；流动相:甲醇―水（80∶20）；柱温:室温;检测波长:270nm;流量:1.0ml/min；进样量5μl。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取丹参酮Ⅱ A 对照品10mg，置50ml棕色量瓶中，加甲醇适量，振摇使完全溶解后，稀释至刻度，摇匀，作为对照储备液，精密量取对照品储备液2ml，置另一25ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。
2.3 供试品溶液的制备
取供试品去除囊壳，倾出内容物，研细，过80目筛，精密称定0.3g，置25mL具塞锥形瓶中，加甲醇适量，振摇使完全溶解，稀释至刻度，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，过滤，取续滤液，既得。
2.4 阴性样品溶液的制备
除丹参外，其他各药按供试品处方量投料，按宁心胶囊的制备工艺制成阴性制对照品，按供试品溶液的制备方法，制成阴性样品溶液
2.5系统适应性试验
精密吸取对照品溶液、供试品溶液及阴性对照液各5?l，按照“2.1”项色谱条件，分别进样测定，记录色谱图，结果见图1
图1 HPLC色谱图
2.5.1线性关系考察
精密称取丹参酮Ⅱ A 对照品12.36mg,置50ml量瓶中，加甲醇适量，摇匀，稀释至刻度，作为标准溶液。 精密量取2ml置25m棕色量瓶中，加适量甲醇，摇匀，稀释至刻度，得到浓度为0.01978mg/ml对照品溶液。吸取该对照品溶液1、2、5、10、15和20μl，依次注入液相色谱仪。以对照品进样量（μg）为横坐标，峰面积为纵坐标，进行回归处理，得丹参酮Ⅱ A 回归方程:Y=2629713.8957X—5506.0446，r=0.9999。
2.5.2精密度试验
精密吸取上述对照品溶液溶液5μl，重复进样6次，按上述色谱条件测定丹参酮Ⅱ A 峰面积积分值，RSD为0.84%。说明仪器精密度良好。
2.5.3 重复性试验
精密称取同一批号宁心胶囊（批号:131103）6份，按“2.3”所述方法制备供试品溶液，分别进样测定，丹参酮Ⅱ A 平均含量为0.5792mg/粒，RSD=1.88%。表明本方法重复性良好。
2.5.4 稳定性试验
取样品溶液（批号:131103），分别于0、1、2、4、8、12h各精密吸取5μl进样，
按上述色谱条件测定，丹参酮Ⅱ A 平均含量为0.5732mg/粒，RSD为0.75%，表明供试品中的丹参酮Ⅱ A 的含量在12h内稳定。
2.5.5 回收率试验
采用加样回收法，取同一批号样品（批号:131103）6份，称取含量测定中规定量的1/2量，精密称定，分别置于25m棕色量瓶中，精密加入0.284mg/ml丹参酮Ⅱ A 对照品溶液1ml，按本文“2.3”所述方法制备供试品溶液，分别进样测定，计算回收率，结果回收率为99.60%，RSD为1.98%。见表1。
表1 回收率试验结果
4讨论
在供试品制备的过程中，也考虑到其他样品对丹参提取以及含量测定的影响2，考察了用不同提取方法的提取，分别设计了超声10分钟，超声30分钟，回流30分钟，回流1小时，结果超声10分钟提取不完整，丹参酮Ⅱ A仅为5.8741mg/g，超声回流30分钟和回流一小时结果差不多，但回流提取1小时提取，效果较好，峰面积较大，所以本实验供试品的处理方法为甲醇回流提取1小时，与2010版一部《中国药典》丹参项下丹参酮Ⅱ A含量测定一致。
宁心胶囊是医院制剂，在长期的临床实践中证明，具有良好的疗效，但是长期以来，以薄层鉴别作为该药的标准，没有具体的质量控制标准，丹参是宁心胶囊的主药之一，本实验通过用HPLC法对宁心胶囊中丹参酮Ⅱ A的含量进行测定。通过实验，建立了宁心胶囊的质量控制方法，该方法稳定可靠，操作简便，专属性较强，可以作为宁心胶囊制剂的质量控制标准的参考。
参考文献
1 国家药典委员会.中华人民共和国药典?一部.北京:化学工业出版社，2010，57-58.
2 楼云娜，袁强，HPLC测定冠心丹参滴丸中丹参酮Ⅱ A的含量[J]. 齐鲁药事.2007,26（9）：595.
论文作者:陈辉1，陈勇2
论文发表刊物:《医师在线》2015年12月第24期供稿
论文发表时间:2016/4/25
标签：溶液论文; 精密论文; 胶囊论文; 色谱论文; 甲醇论文; 丹参酮论文; 丹参论文; 《医师在线》2015年12月第24期供稿论文;