高辉 河北菲尼斯生物技术有限公司 050035
摘要 建立测定阿法替尼中有机溶剂的顶空气相方法。采用DB-WAX毛细管柱（25m×0.2mm，0.2μm），以二甲基亚砜为溶剂，外标法测定阿法替尼中多种溶剂的残留量。乙腈、乙醚、乙酸乙酯、乙醇、甲醇、二氯甲烷、甲苯、N,N-二甲基甲酰胺在线性范围内线性关系良好，相关系数均在0.9968~0.9998之间。回收率分别为103.93%、98.94%、99.18%、102.96%、102.19%、99.10%、101.40%、103.06%。本方法简单、准确、灵敏度高、重线现好。
关键词 顶空气相色谱法 溶剂残留 阿法替尼
阿法替尼为新型口服制剂，苯胺奎那唑啉化合物，是一种不可逆的EGFR-HER2双重酪氨酸激酶受体抑制剂[1]。阿法替尼所用起始物料引入的溶剂及制备工艺中用到的溶剂共计8种：乙腈、乙醚、乙酸乙酯、乙醇、甲醇、二氯甲烷、甲苯、N,N-二甲基甲酰胺。本文建立了气相色谱法测定其溶剂残留量，方法简单、准确、灵敏度高、重现性好。
1．仪器与试药
Agilent 7890A 气相色谱仪，Agilent 7694E顶空进样器；阿法替尼（河北菲尼斯生物技术有限公司）；乙腈、乙醚、乙酸乙酯、乙醇、甲醇、二氯甲烷、甲苯、N,N-二甲基甲酰胺（DMF）均为AR。
2．方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：DB-WAX毛细管柱(25m×0.2mm, 0.2μm)；载气为氮气；分流比为2：1；进样口温度为220℃；FID检测器，检测器温度为250℃；升温程序：初始温度35℃ 保持10min 以10℃/min升温至160℃，保持4min，再以40℃/min升温至200℃ 保持5min。顶空设置：顶空平衡温度：120℃，定量环温度：140℃，传输管温度：160℃，平衡时间：30min，加压时间：0.2 min，进样时间：1 min。相邻溶剂峰间的分离度大于4。混合对照品色谱图见图。
图 各溶剂的分离度色谱图
1.乙醚 2.乙酸乙酯 3.甲醇 4.二氯甲烷 5.乙醇 6.乙腈 7.甲苯 8. N、N-二甲基甲酰胺 9.二甲基亚砜
2.2 溶液的制备
对照品储备溶液的制备 称取乙醚约5.0g、乙酸乙酯5.0g、甲醇3.0g、二氯甲烷0.6g、乙醇5.0g、乙腈0.4g、甲苯0.89g、DMF0.89g，同置100ml量瓶中，加DMSO稀释至刻度，摇匀，即得。
对照品溶液的制备 取上述溶液1ml置100ml容量瓶中，加DMSO稀释至刻度，摇匀，即得。
供试品溶液的制备 取本品适量，研细，取粉末约0.5g，精密称定，置于顶空瓶中，加DMSO 5ml，振摇，即得。
2.3 线性与范围
对各个溶剂，以限度浓度为100%，以200%、150%、100%、50%、20%五个浓度为线性溶液，以测得的响应值（峰面积）对被测溶剂的浓度作图，用最小二乘法进行线性回归，结果表明：各溶剂在浓度范围内线性关系良好，相关系数均在0.9968~0.9998之间。
2.4 检测限
当信噪比S/N=3时，乙腈、乙醚、乙酸乙酯、乙醇、甲醇、二氯甲烷、甲苯及DMF的最低检测限分别为：19.7μg、0.4μg、10.3μg、30.2μg、25.3μg、30.7μg、11.0μg、210.3μg。
2.5 准确度
准确度是通过向供试品溶液中加入对照品计算回收率来进行评价的。结果表明乙腈、乙醚、乙酸乙酯、乙醇、甲醇、二氯甲烷、甲苯、DMF的回收率分别为103.93%、98.94%、99.18%、102.96%、102.19%、99.10%、101.40%、103.06%。
2.6 精密度试验
取同一对照品溶液，连续进样6次，乙腈、乙醚、乙酸乙酯、乙醇、甲醇、二氯甲烷、甲苯、DMF的RSD分别为1.1%、2.1%、1.0%、0.9%、0.7%、0.8%、0.7%、1.4%。
2.7 样品测定
称取阿法替尼原料2批（1301-F、1302-A），按上述方法进行测定，结果在产品种均未检出乙腈、乙醚、乙酸乙酯、甲醇、二氯甲烷、甲苯、DMF；乙醇的含量分别为720ppm、610ppm。
3．讨论
中国药典2010年版二部附录Ⅷ P[2]中将乙腈、二氯甲烷、DMF、甲醇、甲苯列为第二类必须控制的毒性试剂，将乙醚、乙醇、乙酸乙酯列为第三类低毒性的溶剂，并且对各溶剂的控制限度进行了规定。根据《化学药物残留溶剂研究的技术指导原则》[3]，本品在DMSO中易溶，且DMSO与残留溶剂互溶，所以采用DMSO作为溶剂进行试验。试验经过多种色谱条件及多种溶剂的筛选，最后确定的方法可使多种有机残留试剂达到基线分离的效果，且溶剂峰对测定峰无干扰，方法学试验得到满意结果，故该法用于有机溶剂的含量测定准确，可信。
参考文献
【1】王允芬，宋勇． Afatinib( 阿法替尼) 治疗非小细胞肺癌的研究进展［J］． 中华肺部疾病杂志: 2012，5( 4) : 364-370．
【2】中国药典[S]．二部，2010：附录61
【3】国家药品审评中心．化学药物残留溶剂研究的技术指导原则［Z］．2005
论文作者:高辉
论文发表刊物:《中国科技教育·理论版》2013年第11期供稿
论文发表时间:2014-1-9
标签：乙酸乙酯论文; 溶剂论文; 乙醚论文; 甲烷论文; 甲苯论文; 甲醇论文; 乙醇论文; 《中国科技教育·理论版》2013年第11期供稿论文;